本文選題：肝纖維化 + 枯否細(xì)胞　； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：【目的】建立經(jīng)濟(jì)簡便穩(wěn)定的同步分離培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞(hepaticstellatecells,HSCs)與枯否細(xì)胞(kupffercells，KCs)方法，為研究肝星狀細(xì)胞、枯否細(xì)胞生物學(xué)特性及肝纖維化(HF)的發(fā)生機(jī)制提供細(xì)胞學(xué)方法基礎(chǔ)。 【方法】采用鏈霉蛋白酶、Ⅳ型膠原酶離體灌流，10.387％與18.8％Nycodenz密度梯度高速(20000r/min)離心分離培養(yǎng)SD大鼠原代肝星狀細(xì)胞、kupffer細(xì)胞。臺盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞活率。通過結(jié)蛋白(desmin)、平滑肌肌動蛋白(α-SMA)免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法鑒定HSCs。采用溶菌酶(lysozyme)免疫細(xì)胞化學(xué)法與印度墨汁吞噬功能實(shí)驗(yàn)鑒定KCs。 【結(jié)果】成功同步分離培養(yǎng)大鼠HSCs、KCs，免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法證實(shí)所分離的細(xì)胞分別為肝星狀細(xì)胞和kupffer細(xì)胞，且kupffer細(xì)胞吞噬功能明顯。每只大鼠的HSCs和KCs的細(xì)胞得率分別為2.0×107/肝和1.2×107/肝，平均純度分別為93％、91％，活率分別為92％、94％。 【結(jié)論】本實(shí)驗(yàn)同步分離培養(yǎng)大鼠肝KCs和HSCs的方法簡便經(jīng)濟(jì)，細(xì)胞得率、活率和純度高，能用于肝纖維化機(jī)制的研究。 【目的】研究內(nèi)毒素脂多糖(LPS)與其刺激的kupffer細(xì)胞(KCs)培養(yǎng)上清(KCCM)及吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC，NF-kB通路抑制劑)對大鼠原代肝星狀細(xì)胞(HSCs)表達(dá)結(jié)締組織生長因子(CTGF)的影響，探討LPS刺激HSCs表達(dá)CTGF的機(jī)制。 【方法】培養(yǎng)72h的KCs經(jīng)1mg/LLPS刺激48h后收集上清標(biāo)記為KCCM1，未經(jīng)LPS刺激的上清標(biāo)記為KCCM0。將培養(yǎng)72h的HSCs隨機(jī)分為空白對照組、KCCM0組、LPS組、KCCM1組、PDTC組、PDTC＋LPS組、PDTC＋KCCM1組。各組HSCs經(jīng)相應(yīng)的處理48h后，，westernblot檢測各組HSCs表達(dá)CTGF水平，ELISA檢測培養(yǎng)上清中Ⅰ型膠原含量。 【結(jié)果】各組HSCs中CTGF含量為：空白對照組(1.95±0.67)、KCCM0(2.15±1.10）、LPS(4.56±4.16）、KCCM1(5.21±3.23）、PDTC(0.06±0.02）、PDTC＋LPS(0.10±0.08）、PDTC＋KCCM1(2.77±4.08）。與空白對照組相比，LPS與KCCM1作用于HSCs后CTGF表達(dá)增加(P＜0.05），PDTC與PDTC＋LPS處理的HSCs中CTGF表達(dá)明顯下降(P＜0.01）。PDTC與KCCM1聯(lián)合比單獨(dú)KCCM1作用于HSCs的CTGF表達(dá)減少(P＜0.05）。ELISA結(jié)果顯示，KCCM1組HSCs上清中Ⅰ型膠原的含量增加(P＜0.05）。 【結(jié)論】LPS可直接通過HSCs內(nèi)的NF-kB通路使其表達(dá)CTGF水平上調(diào)，LPS刺激的kupffer細(xì)胞還可能通過其它途經(jīng)使HSCs表達(dá)CTGF水平上調(diào)。
[Abstract]:[objective] to establish a simple, convenient and stable method for simultaneous isolation and culture of hepatic stellate cells (HSCs) and Kupffer cells (KCs) from rat hepatic stellate cells (HSCs) in order to study hepatic stellate cells (HSCs). The biological characteristics of Kupffer cells and the mechanism of hepatic fibrosis (HF) provide the basis of cytological methods. [methods] Strepsin was used. Primary hepatic stellate cells of SD rats were isolated from 10.387% of type 鈪

本文編號：2085636