本文選題：關(guān)節(jié)軟骨細胞 + 細胞培養(yǎng)��； 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 目的：優(yōu)化兔關(guān)節(jié)軟骨細胞分離方法,探索其體外單層培養(yǎng)過程條件及端粒、生物學(xué)功能學(xué)特性的變化。 方法：選用4周齡雄性、健康、新西蘭大白兔的關(guān)節(jié)軟骨,采用機械、雙酶消化法進行分離得到關(guān)節(jié)軟骨細胞。測定細胞存活率,并在含有10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中進行體外單層培養(yǎng)。待細胞融合率達到85%至90%時,用胰蛋白酶消化收集并以相同密度鋪板傳代。逐代觀察細胞形態(tài)及應(yīng)用MTT法繪制細胞生長曲線；同時采用甲苯胺藍染色和RT-PCR方法動態(tài)研究各代關(guān)節(jié)軟骨細胞的蛋白多糖,Ⅰ、Ⅱ型膠原蛋白與端粒酶因水平的表達變化。 結(jié)果：本方法兔關(guān)節(jié)軟骨細胞收集過程簡便、高效,平均每克軟骨可得到2×106個細胞。在體外單層培養(yǎng)的過程中,隨傳代次數(shù)增加,軟骨細胞傳代時間變長,細胞形態(tài)逐漸向“纖維樣”細胞轉(zhuǎn)化。Ⅰ型膠原蛋白基因水平的表達呈遞增趨勢,Ⅱ型膠原蛋白與端�；蛩降谋磉_呈遞增趨勢,細胞外基質(zhì)蛋白多糖逐漸減少。前三代細胞具有較高的生物學(xué)及功能學(xué)特性表達,四代后主要表現(xiàn)為Ⅰ型膠原的高表達,而軟骨細胞所特有的Ⅱ型膠原及蛋白多糖基本消失。整個趨勢呈現(xiàn)去分化。 結(jié)論：1關(guān)節(jié)軟骨細胞機械、雙酶獲取方法簡便易操作,可獲取大量存活率高的軟骨細胞。 2.體外單層培養(yǎng)的兔關(guān)節(jié)軟骨細胞前三代表型穩(wěn)定,生物學(xué)及功能學(xué)特性表達良好。
[Abstract]:Aim: to optimize the separation method of rabbit articular chondrocytes, and to explore the changes of telomere and biological function in monolayer culture of rabbit articular chondrocytes. Methods: articular cartilage of 4 week old male healthy New Zealand rabbits was isolated by mechanical and double enzyme digestion. Cell survival rate was measured and monolayer culture was carried out in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum in vitro. When the cell fusion rate reached 85% to 90%, trypsin was used to digest and collect the cells. Cell morphology was observed generation by generation and cell growth curve was plotted by MTT method. Meanwhile, the expression of proteoglycan, type 鈪，

本文編號：2076588