本文選題：抗體庫(kù) + 胃癌　； 參考：《浙江大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 研究目的:構(gòu)建全人源胃癌噬菌體單鏈抗體庫(kù),并從中篩選出與人胃癌細(xì)胞特異結(jié)合的單鏈抗體,并對(duì)其進(jìn)行鑒定分析。 研究方法和研究結(jié)果:首先分離胃癌病人外周血淋巴細(xì)胞,提取總RNA,RT-PCR合成cDNA第一鏈,采用兼并引物PCR擴(kuò)增抗體重鏈(V_H)和輕鏈可變區(qū)(V_L)基因。經(jīng)重疊PCR(SOE-PCR),將V_H和V_L連接成單鏈抗體(scFv)基因,并連接到噬菌粒載體pCANTAB-5E中,轉(zhuǎn)化至E.coli TG1,經(jīng)輔助噬菌體超感染,構(gòu)建了全人源胃癌噬菌體單鏈抗體庫(kù),庫(kù)容為2.6×10~6,質(zhì)粒片段插入率95%。單鏈抗體庫(kù)經(jīng)與正常人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1孵育后,去除與正常細(xì)胞結(jié)合的噬菌體單鏈抗體,再以人胃癌細(xì)胞MGC-803為靶標(biāo)對(duì)抗體庫(kù)進(jìn)行4輪富集篩選,結(jié)果顯示富集了50倍。選取第四輪篩選后的菌落制備單克隆抗體,并進(jìn)行ELISA特異性鑒定,獲得五株與人胃癌細(xì)胞MGC-803有較強(qiáng)特異性結(jié)合的噬菌體抗體。送5株抗體進(jìn)行測(cè)序,選取陽(yáng)性值最高的單克隆對(duì)其序列進(jìn)行分析并預(yù)測(cè)其空間結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明:可變區(qū)基因與人胚系基因有很高的同源性(大于90%)。 結(jié)論:成功構(gòu)建了庫(kù)容為2.6×10~6的全人源胃癌噬菌體單鏈抗體庫(kù),抗體庫(kù)多樣性良好。獲得的噬菌體單克隆抗體具有較強(qiáng)的特異性,為胃癌的診斷和治療提供了新載體。
[Abstract]:Objective : To construct a single - chain antibody library of human gastric cancer phage and to identify the single - chain antibody specific to human gastric cancer cells .



A single - chain antibody library of human gastric cancer cells was amplified by PCR ( SOE - PCR ) , and then transformed into E . coli TG1 . After incubation with human gastric cancer cell MGC - 803 , a single - chain antibody library was constructed .



Conclusion : The phage single - chain antibody library of human gastric cancer with a volume of 2.6 脳 10 ~ 6 has been successfully constructed . The antibody library has a good diversity . The obtained phage monoclonal antibody has strong specificity and provides a new carrier for the diagnosis and treatment of gastric cancer .
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊玲,李連弟,陳育德,D.M.Parkin;中國(guó)2000年及2005年惡性腫瘤發(fā)病死亡的估計(jì)與預(yù)測(cè)[J];中國(guó)衛(wèi)生統(tǒng)計(jì);2005年04期

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本文編號(hào)：2063348