本文選題：卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞 + 顆粒細(xì)胞�。� 參考：《華中科技大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：目的：建立一種簡(jiǎn)單易行的分離未成年小鼠卵巢卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞的方法，并對(duì)分離細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和功能鑒定。方法：選取未成年C57BL/6小鼠（21-25d）的卵巢組織，在體式顯微鏡下分離干凈周圍組織并去包膜，，用機(jī)械法去除顆粒細(xì)胞，將殘余組織在LSP培養(yǎng)基清洗兩次后用膠原酶Ⅳ-DNase（4g/L膠原酶，10g／LDNase和10g/L BSA溶于M199培養(yǎng)液）在37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中消化分離卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞，用含10%胎牛血清及10ng/ml雄激素的McCoy’s5a培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，并用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、蛋白印跡技術(shù)、激素檢測(cè)對(duì)培養(yǎng)的卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。通過(guò)卵泡膜-間質(zhì)細(xì)胞在不同濃度的FSH和LH條件下激素水平的改變，檢測(cè)該細(xì)胞激素分泌反應(yīng)性。結(jié)果：通過(guò)上述分離方法得到的細(xì)胞存活率在90%以上，細(xì)胞在培養(yǎng)24小時(shí)內(nèi)貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)成梭形和不規(guī)則三角形，且能在含10%胎牛血清及10ng/ml雄激素McCoy’s5a培養(yǎng)基中分裂增殖。免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞AMH蛋白陽(yáng)性表達(dá)5%，而p450scc蛋呈陽(yáng)性表達(dá)95%；貼壁細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)之后雄激素濃度為649.22±12.3ng/dl(n=3),雌激素濃度10.7pg/ml(n=3);0.1U/ml LH組的睪酮水平明顯高于FSH組和基礎(chǔ)培養(yǎng)基組（p0.05）。0.5U/ml LH組的睪酮水平顯著高于0.1U/ml組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；加入LH0.5U/ml組、1U/ml組，2U/ml組之間睪酮水平未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。FSH組睪酮水平和基礎(chǔ)培養(yǎng)基組未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)，在這三組中均未檢測(cè)到雌激素水平的改變。結(jié)論：通過(guò)本實(shí)驗(yàn)的分離和培養(yǎng)方法可以得到大量貼壁生長(zhǎng)的卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞，其中很少有顆粒細(xì)胞的混雜，此方法可以快速、高效的進(jìn)行小鼠卵泡膜間質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)。
[Abstract]:Objective: to establish a simple and convenient method for isolation of follicular mesenchymal cells from immature mice. Methods: the ovarian tissues of immature C57BL / 6 mice (21-25 d) were selected, and the surrounding tissues were separated and coated under a pose microscope, and granulosa cells were removed by mechanical method. The residual tissue was washed twice in LSP medium and then digested and separated by collagenase 鈪

本文編號(hào)：2053419