本文選題：自噬 + IL-6　； 參考：《浙江大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：探討IL-6對饑餓誘導的細胞自噬過程的影響及其分子機制。 方法：將實驗分為對照組、饑餓組及饑餓+IL-6組,首先采用western blot法檢測了LC3蛋白的表達水平,細胞免疫熒光法統計LC3熒光點的量并借助電鏡觀察細胞內自噬泡數量變化和形態(tài)特征；western blot法檢測并篩選自噬及IL-6下游主要通路蛋白表達水平；然后,采用關鍵信號分子的抑制劑并構建其突變體等方法,進一步檢測其在IL-6抑制自噬中的作用,同時通過Beclin1siRNA, Atg14siRNA的干擾實驗分析IL-6影響自噬過程的分子機制。 結果：(1)我們發(fā)現,在饑餓處理的U937細胞內,外源IL-6(30ng/ml)的添加降低了LC3-9Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,且二者的比值隨IL-6濃度的增加而減小,同時IL-6的處理下調了免疫熒光反應中LC3的熒光點數,表明IL-6負向調控細胞自噬過程。(2)饑餓誘導下,細胞內與自噬相關的主要信號分子Akt, ERK1/2, STAT3的磷酸化水平均發(fā)生變化。IL-6(30ng/ml)添加后,Akt, ERK1/2的磷酸化水平未發(fā)生明顯變化,但STAT3的磷酸化水平明顯升高,活化了胞內STAT3通路,并促進了Bcl-2的表達,同時胞內自噬相關蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值顯著下調,p62未發(fā)生明顯降解。(3) STAT3抑制劑LLL12作用于細胞后,P-STAT3活性顯著降低,自噬相關蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ, Beclin1及VPS34蛋白水平均有明顯的上調；突變體STAT3Y705F的轉染實驗表明,IL-6的處理不影響STAT3Y705F轉染的細胞內的自噬水平。(4)在Beclin1siRNA, Atg14siRNA轉染的細胞中,IL-6的添加不影響?zhàn)囸I作用后胞內自噬相關蛋白的表達水平。 結論：綜上所述,(1)IL-6抑制細胞自噬,STA3T介導IL-6抑制細胞自噬過程；(2)Beclin1, Atg14參與IL-6抑制細胞的自噬過程。深入探討IL-6與細胞自噬的關系,將有助于探究與IL-6密切相關疾病的致病機制。
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of IL-6 on the process of starvation induced autophagy and its molecular mechanism.
Methods: the experiment was divided into the control group, the starving group and the starving +IL-6 group. First, the expression level of LC3 protein was detected by the Western blot method. The amount of LC3 fluorescence point was measured by cell immunofluorescence and the changes of the number of autophagic vesicles and the morphological characteristics were observed by the electron microscope. The autophagy and the main pathway of the lower reaches of IL-6 were detected and screened by Western blot method. The protein expression level; then, using the inhibitors of key signal molecules and the construction of its mutants to further detect its role in the inhibition of autophagy by IL-6, and the molecular mechanism of IL-6 affecting autophagy through the interference experiments of Beclin1siRNA and Atg14siRNA.
Results: (1) we found that in the U937 cells treated with starvation, the addition of exogenous IL-6 (30ng/ml) reduced the ratio of LC3-9 II /LC3- I, and the ratio of the two decreased with the increase of IL-6 concentration, and the IL-6 treatment reduced the number of LC3 in the immunofluorescence reaction, indicating that the IL-6 negative direction regulates the autophagy process of the cells. (2) starvation induced. The phosphorylation of the main signal molecules associated with autophagy, Akt, ERK1/2, STAT3, was changed by.IL-6 (30ng/ml), and the phosphorylation level of Akt and ERK1/2 did not change obviously, but the phosphorylation level of STAT3 increased significantly, activated the intracellular STAT3 pathway, and promoted the expression of Bcl-2, and the intracellular autophagy related protein LC3- II. LC3- I ratio decreased significantly, and p62 did not degrade obviously. (3) the activity of P-STAT3 was significantly reduced after the action of STAT3 inhibitor LLL12 on the cells. The levels of the autophagy related protein LC3- II /LC3- I, Beclin1 and VPS34 protein were obviously up-regulated; the mutant STAT3Y705F transfection test showed that IL-6 treatment did not affect the cells transfected by STAT3Y705F. Autophagy level. (4) in Beclin1siRNA, Atg14siRNA transfected cells, the addition of IL-6 did not affect the expression level of autophagy related proteins after starvation.
Conclusion: (1) IL-6 inhibits autophagy, STA3T mediates IL-6 inhibition of autophagy, and (2) Beclin1, Atg14 participates in the autophagy process of IL-6 suppressor cells. The in-depth study of the relationship between IL-6 and cell autophagy will help to explore the pathogenesis of the closely related diseases associated with IL-6.
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392.12

【共引文獻】

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本文編號：2043466