本文選題：gyrA基因 + gyrB基因�。� 參考：《廣州醫(yī)學(xué)院》2010年碩士論文

【摘要】：研究背景與目的 結(jié)核病是一種對(duì)人類影響嚴(yán)重的傳染性疾病,2006年全球有180萬(wàn)人死于結(jié)核病,920萬(wàn)人成為新發(fā)結(jié)核病患者。該病需要較長(zhǎng)時(shí)間的藥物聯(lián)合治療才能治愈,但目前能用于該病治療的藥物有限,而且隨著耐藥結(jié)核病特別是耐多藥結(jié)核病的出現(xiàn),結(jié)核病控制工作和公共健康安全正遭受越來(lái)越嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。作為廣譜的抗生素,喹諾酮類藥物逐漸被用于結(jié)核病的治療,并有可能作為一線藥物使用。不幸的是,隨著該類藥物的廣泛使用及不同程度的濫用和誤用,對(duì)該類藥物耐受的結(jié)核分枝桿菌(MTB)開始出現(xiàn)并逐漸增多�，F(xiàn)有的研究已經(jīng)證實(shí)gyrA基因和gyrB基因的突變是MTB喹諾酮類耐藥的主要分子機(jī)制,但各研究者所發(fā)現(xiàn)的突變位點(diǎn)及突變頻率尚存在差異,因此需要進(jìn)一步的研究來(lái)深入分析MTB的喹諾酮類耐藥機(jī)制。 本研究通過(guò)檢測(cè)耐喹諾酮類結(jié)核分枝桿菌臨床菌株gyrA基因和gyrB基因的突變類型和突變頻率,分析突變類型與耐藥水平之間的關(guān)系,闡述gyrA基因和gyrB基因突變?cè)诮Y(jié)核分枝桿菌喹諾酮類耐藥中作用。 方法 從肺結(jié)核患者的痰液中分離出67株MTB臨床菌株,采用絕對(duì)濃度法測(cè)定MTB臨床菌株對(duì)左氧氟沙星(LVX)的敏感性,并應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和DNA直接測(cè)序(DS)技術(shù)檢測(cè)其gyrA基因和gyrB基因的突變情況。 結(jié)果 1. 64株MTB臨床LVX耐藥菌株有47株gyrA基因序列發(fā)生突變,突變率為73.4%。其中42株低濃度耐藥菌株有27株存在突變,突變率為64.3%;22株高濃度耐藥菌株有20株發(fā)生突變,突變率為90.9%。47株gyrA基因突變菌株中,其中45株為單位點(diǎn)突變,另2株為雙位點(diǎn)突變。單位點(diǎn)突變發(fā)生在70位、89位、90位、91位和94位,雙位點(diǎn)突變發(fā)生在90位+94位,94位為突變頻率最高的位點(diǎn),占總例數(shù)的63.8%。具體的突變類型包括H70R、D89N、A90V、S91A、D94G、D94A、D94N等7種單位點(diǎn)突變和1種A90V+D94A雙位點(diǎn)突變。其中,H70R、D89N單位點(diǎn)突變和A90V+D94A雙位點(diǎn)突變均只導(dǎo)致高濃度耐藥,而其它突變類型即可致低濃度耐藥也可引起高濃度耐藥。 2. 64株LVX耐藥MTB臨床菌株中,僅有1株發(fā)生gyrB基因突變,為Thr511Asn突變。 結(jié)論 gryA基因和gyrB基因的突變是MTB喹諾酮類耐藥的主要分子機(jī)制,其不同的突變類型可導(dǎo)致不同程度的耐藥水平改變。但是,gryA基因和gyrB基因的突變并不能解釋所有MTB喹諾酮類耐藥現(xiàn)象。因此,有必要對(duì)其它耐藥機(jī)制(如藥物外排泵)進(jìn)行研究。
[Abstract]:Research background and purpose
Tuberculosis is an infectious disease seriously affected by human beings. In 2006, 1 million 800 thousand people worldwide died of tuberculosis and 9 million 200 thousand were newly diagnosed with tuberculosis. The disease needed a long time of combined treatment to cure, but the drugs used for the treatment of the disease were limited and with drug-resistant TB, especially MDR - TB. As a broad-spectrum antibiotic, quinolones are gradually used for the treatment of tuberculosis and may be used as a first-line drug. Unfortunately, with the widespread use of such drugs and the misuse and misuse of different degrees, tolerance to this type of drugs is unfortunately tolerated. Mycobacterium tuberculosis (MTB) begins to appear and increases gradually. Existing studies have confirmed that the mutation of gyrA and gyrB genes is the main molecular mechanism of MTB quinolone resistance, but the mutation sites and frequency of mutation found by the researchers are still different, so a further study is needed to analyze the resistance of MTB to quinolones. Mechanism.
In this study, the relationship between mutation type and drug resistance level was analyzed by detecting the mutation type and mutation frequency of gyrA and gyrB gene in clinical strains resistant to quinolone Mycobacterium tuberculosis, and the use of gyrA and gyrB gene mutations in quinolone resistance of Mycobacterium tuberculosis was described.
Method
67 MTB clinical strains were isolated from the sputum of the patients with pulmonary tuberculosis. The sensitivity of MTB clinical strains to levofloxacin (LVX) was determined by absolute concentration, and the mutation of the gyrA gene and gyrB gene was detected by polymerase chain reaction (PCR) and DNA direct sequencing (DS).
Result
There were 47 strains of gyrA gene sequence mutation in 1.64 MTB clinical LVX resistant strains. The mutation rate was 73.4%. of which 42 strains of low concentration resistant strains were mutated, the mutation rate was 64.3%, 20 strains of high concentration resistant strains of 22 strains were mutated, the mutation rate was 90.9%.47 strain gyrA mutant strain, 45 of them were unit point mutation and 2 was double. Site mutation. Unit point mutation occurred in 70, 89, 90, 91 and 94. The double site mutation occurred at 90 +94 sites and 94 was the highest mutation frequency. The 63.8%. specific mutation types included 7 unit point mutations, such as H70R, D89N, A90V, S91A, D94G, D94A, D94N, and 1 A90V+D94A double site mutations. Point mutation and A90V+D94A double site mutation only lead to high concentration of resistance, while other mutant types can cause low concentration resistance and high concentration resistance.
Of the 2.64 LVX resistant MTB clinical isolates, only 1 of them had gyrB gene mutation, which was Thr511Asn mutation.
conclusion
Mutations in the gryA and gyrB genes are the main molecular mechanisms of the resistance to MTB quinolones, and the different mutations can lead to varying levels of resistance to varying degrees. However, mutations in the gryA and gyrB genes do not explain all MTB quinolones resistance. Therefore, it is necessary to study other mechanisms of drug resistance, such as the drug efflux pump. Study.
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：2008999