發(fā)布時(shí)間：2018-06-01 01:36

  本文選題：血管內(nèi)皮生長因子 + 血管內(nèi)皮祖細(xì)胞��； 參考：《蘇州大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 目的:構(gòu)建攜帶血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)的重組腺病毒(Ad-VEGF165),Ad-VEGF165體外轉(zhuǎn)染大鼠骨髓源性血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs),觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞VEGF蛋白的表達(dá)情況以及重組腺病毒對EPCs生長的影響。 方法:利用pAdEasy系統(tǒng)構(gòu)建攜有血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)的重組腺病毒載體。HEK293A細(xì)胞包裝、重組、擴(kuò)增腺病毒顆粒,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光表達(dá)。對其進(jìn)行PCR、基因測序鑒定。EGM-2MV培養(yǎng)基培養(yǎng)擴(kuò)增大鼠骨髓源性EPCs。Ad-VEGF165體外轉(zhuǎn)染EPCs,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光表達(dá),激光共聚焦測轉(zhuǎn)染效率,MTT法測MOI及對生長活性的影響,ELISA檢測上清中VEGF的表達(dá)。 結(jié)果:經(jīng)酶切鑒定、基因測序及綠色熒光觀察說明成功構(gòu)建了Ad-VEGF165。Ad-VEGF165成功轉(zhuǎn)染EPCs,轉(zhuǎn)染24 h后在熒光顯微鏡下可見綠色熒光,增殖實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞形態(tài)觀察證實(shí)1:50是合適的轉(zhuǎn)染比率。當(dāng)MOI為50時(shí)其轉(zhuǎn)染效率為57.4%。ELISA法檢測轉(zhuǎn)染VEGF165后的EPCs其上清液中VEGF蛋白濃度明顯升高。 結(jié)論:成功構(gòu)建了Ad-VEGF165。Ad-VEGF165能有效轉(zhuǎn)染EPCs。一定的轉(zhuǎn)染比率對EPCs生長增殖有一定促進(jìn)作用。轉(zhuǎn)染后的EPCs高表達(dá)VEGF蛋白。
[Abstract]:Objective: to construct a recombinant adenovirus containing vascular endothelial growth factor 165 (VEGF165) and transfect Ad-VEGF165 into rat bone marrow-derived vascular endothelial progenitor cells in vitro to observe the expression of VEGF protein and the effect of recombinant adenovirus on the growth of EPCs. Methods: pAdEasy system was used to construct recombinant adenovirus vector, HEK293A, carrying vascular endothelial growth factor 165 (VEGF 165). Recombinant adenovirus particles were amplified and green fluorescent expression was observed under fluorescence microscope. The EPCS were transfected with EPCS. Ad-VEGF165 from rat bone marrow in vitro, and the green fluorescent expression was observed under fluorescence microscope. Measurement of transfection efficiency and MTT assay of moi and its effect on growth activity the expression of VEGF in supernatant was detected by Elisa. Results: the expression of VEGF in supernatant was determined by enzyme digestion. Gene sequencing and green fluorescence observation showed that Ad-VEGF165.Ad-VEGF165 was successfully transfected into EPCs, and green fluorescence was observed under fluorescence microscope for 24 h. The suitable transfection ratio was confirmed by proliferation experiment and cell morphology observation. When moi was 50, the transfection efficiency was 57.4. the concentration of VEGF protein in the supernatant of EPCs transfected with VEGF165 was detected by Elisa. Conclusion: Ad-VEGF165.Ad-VEGF165 can effectively transfect EPCs. A certain ratio of transfection can promote the growth and proliferation of EPCs. The transfected EPCs overexpressed VEGF protein.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

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8 湯e，

本文編號(hào)：1962353