本文選題：雌激素 + 增齡��； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 雌激素參與骨調(diào)節(jié)代謝及脂肪組織的分布,分解及合成、沉積。中老年女性增齡性變化通常伴隨表現(xiàn)有骨質(zhì)疏松以及雌激素水平的下降,隨之機(jī)體脂肪組織增加造成中心性肥胖。對(duì)于婦女的機(jī)體變化既要考慮性腺功能衰退,也要考慮年齡因素造成的身體機(jī)能的下降。骨脂代謝中的成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞可能是由同一前體細(xì)胞即干細(xì)胞分化而來,二者的分化平衡可能受相同因素影響。脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)由于其自身具備的諸多優(yōu)點(diǎn)成為了近年干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)。目前,雌激素和增齡性改變對(duì)大鼠ADSCs誘導(dǎo)分化中的作用尚不清楚。本研究以3月和18月齡雌性SD大鼠來源的ADSCs為對(duì)象,擬觀察雌激素與增齡性因素對(duì)ADSCs體外增殖及誘導(dǎo)成骨,成脂肪分化能力的影響,探討雌激素與增齡改變?cè)贏DSCs成骨成脂分化調(diào)控平衡中可能的作用。 研究?jī)?nèi)容包括: 1.脂肪干細(xì)胞的分離,純化培養(yǎng)鑒定: 采用密度梯度離心和自然貼壁法分別從3月和18月齡雌性SD大鼠腹股溝脂肪處分離純化培養(yǎng)ADSCs,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀對(duì)其表面標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè),具有基質(zhì)干細(xì)胞表面抗原CD29和CD105陽(yáng)性,CD34陰性而排除其為造血干細(xì)胞可能。同時(shí)經(jīng)由成骨,成脂的誘導(dǎo)陽(yáng)性結(jié)果也逆向證實(shí)培養(yǎng)分離的細(xì)胞為ADSCs。 2.雌激素對(duì)脂肪干細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響: 通過MTT法檢測(cè)不同月齡ADSCs生長(zhǎng)增殖以及雌激素對(duì)其影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),3月齡較18月齡ADSCs生長(zhǎng)增殖能力強(qiáng),雌激素處理后能促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖。 3.雌激素對(duì)于不同月齡大鼠ADSCs體外誘導(dǎo)成骨分化能力的影響: 分別取3月齡和18月齡第三代ADSCs預(yù)設(shè)為(1)單純成骨誘導(dǎo)組,(2)成骨誘導(dǎo)雌激素處理組,含雌激素終濃度為10-7M(3)普通單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組。通過茜素紅染色及OCN檢測(cè)不同月齡和雌激素處理下ADSCs體外成骨分化的能力。結(jié)果顯示:成骨誘導(dǎo)條件下第21天同月齡雌激素處理組茜素紅染色陽(yáng)性面積大于單純誘導(dǎo)組,相同誘導(dǎo)條件下茜素紅染色陽(yáng)性面積3月齡組大于18月齡組; RT-PCR半定量檢測(cè)顯示成骨誘導(dǎo)下同月齡雌激素組較單純誘導(dǎo)組OCN表達(dá)強(qiáng)烈,相同成骨誘導(dǎo)條件下3月齡組較18月齡組OCN表達(dá)強(qiáng)烈;非誘導(dǎo)組染色及OCN檢測(cè)陰性。結(jié)論:雌激素能增強(qiáng)大鼠ADSCs體外誘導(dǎo)成骨分化能力,其誘導(dǎo)成骨分化能力隨增齡性變化下降。 4.雌激素對(duì)于不同月齡ADSCs體外誘導(dǎo)成脂分化能力的影響: 方法:分別取3月齡和18月齡第三代ADSCs預(yù)設(shè)為(1)單純成脂誘導(dǎo)組,(2)雌激素處理成脂誘導(dǎo)組,含雌激素終濃度為10-7M(3)單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組。油紅O染色及LPL檢測(cè)雌激素處理和不同月齡的ADSCs體外成脂分化能力的區(qū)別。結(jié)果顯示:成脂誘導(dǎo)第5天同月齡雌激素處理組油紅O染色陽(yáng)性面積大于單純誘導(dǎo)組,RT-PCR檢測(cè)雌激素處理組較單純誘導(dǎo)組LPL表達(dá)強(qiáng)烈;相同誘導(dǎo)條件下3月齡組油紅O染色陽(yáng)性面積大于18月齡組,RT-PCR檢測(cè)3月齡組LPL表達(dá)較18月齡組強(qiáng)烈;而單純培養(yǎng)非誘導(dǎo)組油紅染色及LPL檢測(cè)均為陰性。結(jié)論:雌激素能增強(qiáng)大鼠ADSCs體外誘導(dǎo)成脂分化能力,其體外誘導(dǎo)成脂分化能力隨著增齡性變化下降。
[Abstract]:The effects of estrogen and aging on the proliferation of ADSCs in vitro and in the induction of osteogenic and adipogenic differentiation of ADSCs can be considered . The effects of estrogen and aging factors on the proliferation of ADSCs in vitro and the ability to induce bone formation and adipogenesis are also investigated .



The research content includes :



1 . Isolation , Purification and Identification of Adipose Stem Cells :



ADSCs were isolated and purified from the inguinal fat of female SD rats in March and 18 months by density gradient centrifugation and natural adherent method respectively . The morphology of the cells was observed by an inverted microscope . The flow cytometry was used to detect the surface markers .



2 . Effect of estrogen on growth and proliferation of fat stem cells :



The effects of estrogen on growth and proliferation of ADSCs were detected by MTT assay . The results showed that the proliferation of ADSCs was stronger than that in 18 months of age , and the growth and proliferation of ADSCs could be promoted after estrogen treatment .



3 . Effects of estrogen on the osteodifferentiation ability of ADSCs in vitro in rats with different ages :



The results showed that the positive area of alizarin red staining was higher than that in the simple induction group . The results showed that the positive area of alizarin red stain in the same induction group was higher than that in the simple induction group . The results showed that the positive area of alizarin red stain in the same induction group was higher than that of the 18 month old group .



4 . Effects of estrogen on the ability of ADSCs to induce adipogenesis in vitro in vitro :



Methods : The third generation ADSCs of 3 - month - old and 18 - month - old were pre - set to be ( 1 ) pure fat - induced group , ( 2 ) estrogen treated as fat - induced group . The positive area of oil - red O - stained positive was higher than that in simple induction group .
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 倪毓輝,郭錫熔,陳榮華;脂肪細(xì)胞分化的表型特征、分子標(biāo)志和調(diào)控[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));2004年06期

2 肖林,邱儉,孫剛,陳宜張;雌激素在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2001年01期

3 王升,何瑞榮;雌激素心血管作用的研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2001年04期

4 賈經(jīng)漢;邱新建;陳志堅(jiān);;骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J];中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2007年08期

5 吳明玉,朱國(guó)英;異黃酮防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的研究進(jìn)展[J];中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志;2005年03期

6 魏雅楠;苗懿德;;肥胖與骨質(zhì)疏松[J];中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志;2007年11期

7 夏軍,黃鋼勇,黃煌淵;80歲及以上髖部骨折患者圍手術(shù)期治療的探討[J];中華老年醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

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本文編號(hào)：1956337