本文選題：大鼠 + 深靜脈血栓形成　； 參考：《昆明醫(yī)學(xué)院》2010年碩士論文

【摘要】： 目的： 建立大鼠創(chuàng)傷性深靜脈血栓模型,在血栓形成前、血栓形成后、血栓不形成等主要狀態(tài)下,研究組織蛋白酶(cathepsin, cat)家族所有成員在血細(xì)胞轉(zhuǎn)錄層面的表達(dá)情況；分析其參與血管內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)降解、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及抑制纖溶系統(tǒng)活性等促栓作用,篩選能夠靈敏地早期診斷大鼠深靜脈血栓形成的候選分子標(biāo)志物。 方法： 1參見王兵博士論文《大鼠急性創(chuàng)傷性深靜脈血栓模型建立及股靜脈基因表達(dá)研究》中大鼠造模、分組及芯片檢測方法,分析前期芯片數(shù)據(jù),總結(jié)大鼠DVT過程中cathepsin基因家族在股靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律。 2查閱ncbi GenBank數(shù)據(jù)庫和cnki數(shù)據(jù)庫確定大鼠cathepsin基因家族成員,通過BLAST與人進(jìn)行同源性比對,并查閱他們參與的生理功能。 3再次建立大鼠急性創(chuàng)傷性深靜脈血栓模型,將100只SD大鼠根據(jù)觀察時(shí)間和血栓形成情況進(jìn)行如下分組：正常對照組(A組)、血栓形成初始期組(B組),血栓形成高峰期(C組)和無血栓形成組(D組)。提取各組血液總RNA并檢測質(zhì)量。 4對大鼠cathepsin基因家族所有成員,應(yīng)用Oligo6.69引物設(shè)計(jì)軟件,設(shè)計(jì)反轉(zhuǎn)錄引物,將各組大鼠血液總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA. 5以GAPDH為內(nèi)參照,采用半定量PCR檢測cathepsin基因家族所有成員血栓形成前后的表達(dá)量,初步判斷差異表達(dá)的基因,采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測各組大鼠血細(xì)胞中已鎖定的cathepsin基因的表達(dá)量。 6對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理、分析,并與其在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)變化作比較,通過其在深靜脈血栓形成中的表達(dá)變化規(guī)律,結(jié)合其生理作用和參與其他疾病發(fā)生發(fā)展的機(jī)理,分析其在深靜脈血栓形成網(wǎng)絡(luò)中的地位和作用,篩選大鼠血細(xì)胞轉(zhuǎn)錄層面能夠作為早期診斷DVT的候選分子標(biāo)志物。 結(jié)果： 1分析前期的芯片數(shù)據(jù),我們發(fā)現(xiàn),該家族10個(gè)成員自創(chuàng)傷即刻到血栓形成高峰期在血管內(nèi)皮細(xì)胞中都出現(xiàn)不同程度的表達(dá)上調(diào),其中cathepsin B,cathepsin L，cathepsin S表達(dá)變化差異顯著。考慮到該家族成員之間的基因、蛋白序列相似度較高,因而其功能較相似,推測該家族成員可能在DVT形成中發(fā)揮相似作用,與血栓形成密切相關(guān)。 2大鼠cathepsin基因家族18個(gè)成員如下：cathepsin 7,cathepsin 8,cathepsin A,cathepsin B,cathepsin C,cathepsin D, cathepsin E,cathepsin F,cathepsin G,cathepsin H,cathepsin K,cathepsin L1, cathepsin M, Cathepsin Q,cathepsin Q like 2,cathepsin R,cathepsin S,cathepsin W,大鼠與人cathepsin基因家族具有高度同源性,該家族主要參與抗原呈遞、細(xì)胞凋亡、基質(zhì)降解等生理過程,并涉及溶酶體通路和系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)贰?3再次大鼠造模成功,血栓形成率與前期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,各組提取的血細(xì)胞RNA完整性和純度均達(dá)到實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)要求。 4 Cathepsin基因家族所有成員經(jīng)半定量PCR檢測,結(jié)果顯示cathepsin A, B, C, D, E, F, G,H,K, L1,W在血栓形成前后具有差異表達(dá),對它們進(jìn)行real-timePCR檢測,結(jié)果顯示cathepsin B,cathepsin C在血栓形成高峰期組較血栓形成前組顯著上調(diào),而在血栓不形成組較血栓形成前組無顯著變化。 5本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果與前期芯片結(jié)果對比,在血栓形成過程中cathepsin B,cathepsin C在股靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和血細(xì)胞中表達(dá)均呈上調(diào)趨勢。內(nèi)皮細(xì)胞損傷后,cathepsin B的高表達(dá)促使內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)降解、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,進(jìn)而內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙,從而放大內(nèi)皮細(xì)胞的促凝活性,促進(jìn)血栓形成和發(fā)展。首次提出二者可以作為大鼠深靜脈血栓形成敏感的早期診斷候選分子標(biāo)志物。結(jié)論： 1 Cathepsin家族與大鼠創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成密切相關(guān)。 2 Cathepsin家族通過降解內(nèi)皮細(xì)胞外基質(zhì)、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、抑制纖溶系統(tǒng)等促進(jìn)血栓形成和發(fā)展。 3 Cathepsin B, cathepsin C可以作為大鼠深靜脈血栓形成早期診斷的候選分子標(biāo)志物。
[Abstract]:Objective:
To establish a rat model of deep venous thrombosis, the expression of all members of the cathepsin (CAT) family at the transcription level of the blood cells was studied before the formation of thrombus, the formation of thrombus and the non formation of thrombus, and the analysis of its involvement in the degradation of the endothelial cell extracellular matrix, promoting the apoptosis of endothelial cells and inhibiting fibrinolysis. Screening for candidate biomarkers of deep vein thrombosis in rats can be sensitively diagnosed by systematic activity and embolic action.
Method錛，

本文編號：1955882