本文選題：豬β干擾素 + Hsp70��； 參考：《南京農(nóng)業(yè)大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】：日本腦炎(Japanese encephalitis, JE)是由日本腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus, JEV)引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性傳染病。本病在世界許多國家廣泛存在,不但對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,而且嚴(yán)重威脅著人類的健康。目前對(duì)乙型腦炎的治療仍然沒有行之有效的方法,而且對(duì)待本病主要還是以免疫接種疫苗的方式進(jìn)行預(yù)防�，F(xiàn)在世界上預(yù)防本病使用的疫苗主要是一些傳統(tǒng)的滅活疫苗和弱毒疫,這些傳統(tǒng)疫苗存在著一些自身的弊端,如滅活苗效果不是很強(qiáng),減毒苗存在毒力返強(qiáng)的危險(xiǎn)等。新型有效的乙腦疫苗的研究急需進(jìn)行。同時(shí),急需研制出安全、高效、新型的抗病毒和免疫增強(qiáng)劑用于增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力和提高疫苗的保護(hù)率。干擾素和熱休克蛋白70都是生物活性蛋白,在免疫反應(yīng)中具有重要的作用。論文對(duì)豬β干擾素的生物學(xué)活性進(jìn)行研究,并比較研究了兩種細(xì)菌Hsp70和豬β干擾素作為核酸佐劑的免疫增強(qiáng)效果。本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容包括以下幾部分： 1重組載體的構(gòu)建：研究豬p干擾素的生物學(xué)活性,我們構(gòu)建了重組酵母表達(dá)載體pPICZαA-SwIFN-β,實(shí)現(xiàn)豬β干擾素在酵母中的分泌表達(dá),為后續(xù)實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備；研究三種生物活性蛋白作為核酸佐劑對(duì)豬乙腦EDⅢ蛋白亞單位疫苗的免疫怎強(qiáng)效果,我們構(gòu)建了三種重組真核表達(dá)載體pCDNA3.0-SwIFN-β, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70,為后續(xù)動(dòng)物試驗(yàn)做準(zhǔn)備。2本實(shí)驗(yàn)接著研究重組豬p-干擾素作為生物活性蛋白對(duì)乙型腦炎病毒的作用：研究豬p干擾素對(duì)豬乙型腦炎病毒在BHK-21細(xì)胞上復(fù)制的抑制,當(dāng)干擾素含量為1000單位時(shí)能對(duì)BHK-21細(xì)胞起到50%的保護(hù)力。從實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果表明當(dāng)干擾素含量為10U時(shí),并未表現(xiàn)出明顯的病毒拷貝數(shù)減少,而1000U和105U時(shí)病毒拷貝數(shù)減少近10倍；選取豬p干擾素0.1ug、lug和10ug三個(gè)劑量作為豬乙腦EDⅢ蛋白亞單位疫苗的佐劑研究,經(jīng)過一系列試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),高滴度的抗乙型腦炎病毒抗體和中和抗體出現(xiàn)在免疫了lug swIFN-β+TRX-EDIII的實(shí)驗(yàn)組,而免疫0.1ug swIFN-β+TRX-EDIII和10ug swIFN-β+TRX-EDIII兩種劑量的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比并未出現(xiàn)明顯的提高。對(duì)于誘導(dǎo)細(xì)胞因子而言,IFN-γ在免疫了lugswIFN-β+TRX-EDIII的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中明顯的高于其他實(shí)驗(yàn)組組,而重組豬p干擾素作為佐劑卻不能明顯的提高IL-4的誘導(dǎo)水平。實(shí)驗(yàn)說明豬β干擾素能抑制豬乙型腦炎病毒在BHK-21細(xì)胞上復(fù)制,同時(shí)豬p干擾素能作為有效的免疫佐劑增強(qiáng)豬乙腦EDⅢ蛋白亞單位疫苗的免疫效應(yīng),而且有劑量依賴關(guān)系。 3本實(shí)驗(yàn)將三種重組真核表達(dá)載體pCDNA3.0-SwIFN-β, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70分別與豬乙腦EDⅢ蛋白亞單位疫苗聯(lián)合免疫無病原體豬,經(jīng)過一些列檢測(cè)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：pCDNA3.0-SwIFN-p, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70均能誘導(dǎo)較強(qiáng)的免疫應(yīng)答反應(yīng),抗體滴度及中和抗體等試驗(yàn)均顯示H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70能刺激強(qiáng)于豬β干擾素的免疫反應(yīng)；細(xì)胞因子檢測(cè)發(fā)現(xiàn),H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70能同時(shí)刺激IL-4和IFN-y的分泌表達(dá),而豬β干擾素主要是刺激IFN-y的分泌表達(dá),對(duì)IL-4分泌影響較小。但H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70之間無明顯差異。本實(shí)驗(yàn)說明Hsp70針對(duì)JEV EDIII能誘導(dǎo)強(qiáng)于豬β干擾素的免疫應(yīng)答反應(yīng),且誘導(dǎo)通路更全面,可能作為JEV EDIII亞單位疫苗的候選佐劑。
[Abstract]:Japanese encephalitis ( JE ) is an acute infectious disease of the central nervous system caused by Japanese encephalitis virus ( JEV ) .

1 . Construction of recombinant vector : To study the biological activity of porcine p - interferon , we constructed recombinant yeast expression vector pZ偽A - SwIFN - 尾 , which realized the secretion expression of porcine interferon - beta in yeast , and prepared for subsequent experiments ;
Three kinds of recombinant eukaryotic expression vectors pCDNA3.0 - SwIFN - 尾 , pCDNA3.0 - H . Ps - Hsp70 and pCDNA3.0 - M.T - Hsp70 were prepared .
A series of experiments showed that the anti - Japanese encephalitis virus antibody and neutralizing antibody were significantly higher than other experimental groups in the experimental animals immunized with lugswIFN - 尾 + trx - EDIII and 10ug swIFN - 尾 + trx - EDIII .

In this experiment , three recombinant eukaryotic expression vectors pCDNA3.0 - SwIFN - 尾 , pCDNA3.0 - H . Ps - Hsp70 and pCDNA3.0 - M.T - Hsp70 , respectively , were combined with the porcine encephalitis ED 鈪，

本文編號(hào)：1955839