本文選題：豬β干擾素 + Hsp70��； 參考：《南京農(nóng)業(yè)大學》2010年碩士論文

【摘要】：日本腦炎(Japanese encephalitis, JE)是由日本腦炎病毒(Japanese Encephalitis Virus, JEV)引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性傳染病。本病在世界許多國家廣泛存在,不但對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失,而且嚴重威脅著人類的健康。目前對乙型腦炎的治療仍然沒有行之有效的方法,而且對待本病主要還是以免疫接種疫苗的方式進行預(yù)防。現(xiàn)在世界上預(yù)防本病使用的疫苗主要是一些傳統(tǒng)的滅活疫苗和弱毒疫,這些傳統(tǒng)疫苗存在著一些自身的弊端,如滅活苗效果不是很強,減毒苗存在毒力返強的危險等。新型有效的乙腦疫苗的研究急需進行。同時,急需研制出安全、高效、新型的抗病毒和免疫增強劑用于增強機體的抵抗力和提高疫苗的保護率。干擾素和熱休克蛋白70都是生物活性蛋白,在免疫反應(yīng)中具有重要的作用。論文對豬β干擾素的生物學活性進行研究,并比較研究了兩種細菌Hsp70和豬β干擾素作為核酸佐劑的免疫增強效果。本實驗的研究內(nèi)容包括以下幾部分： 1重組載體的構(gòu)建：研究豬p干擾素的生物學活性,我們構(gòu)建了重組酵母表達載體pPICZαA-SwIFN-β,實現(xiàn)豬β干擾素在酵母中的分泌表達,為后續(xù)實驗做準備；研究三種生物活性蛋白作為核酸佐劑對豬乙腦EDⅢ蛋白亞單位疫苗的免疫怎強效果,我們構(gòu)建了三種重組真核表達載體pCDNA3.0-SwIFN-β, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70,為后續(xù)動物試驗做準備。2本實驗接著研究重組豬p-干擾素作為生物活性蛋白對乙型腦炎病毒的作用：研究豬p干擾素對豬乙型腦炎病毒在BHK-21細胞上復(fù)制的抑制,當干擾素含量為1000單位時能對BHK-21細胞起到50%的保護力。從實時定量PCR的結(jié)果表明當干擾素含量為10U時,并未表現(xiàn)出明顯的病毒拷貝數(shù)減少,而1000U和105U時病毒拷貝數(shù)減少近10倍；選取豬p干擾素0.1ug、lug和10ug三個劑量作為豬乙腦EDⅢ蛋白亞單位疫苗的佐劑研究,經(jīng)過一系列試驗發(fā)現(xiàn),高滴度的抗乙型腦炎病毒抗體和中和抗體出現(xiàn)在免疫了lug swIFN-β+TRX-EDIII的實驗組,而免疫0.1ug swIFN-β+TRX-EDIII和10ug swIFN-β+TRX-EDIII兩種劑量的實驗組與對照組比并未出現(xiàn)明顯的提高。對于誘導(dǎo)細胞因子而言,IFN-γ在免疫了lugswIFN-β+TRX-EDIII的實驗動物中明顯的高于其他實驗組組,而重組豬p干擾素作為佐劑卻不能明顯的提高IL-4的誘導(dǎo)水平。實驗說明豬β干擾素能抑制豬乙型腦炎病毒在BHK-21細胞上復(fù)制,同時豬p干擾素能作為有效的免疫佐劑增強豬乙腦EDⅢ蛋白亞單位疫苗的免疫效應(yīng),而且有劑量依賴關(guān)系。 3本實驗將三種重組真核表達載體pCDNA3.0-SwIFN-β, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70分別與豬乙腦EDⅢ蛋白亞單位疫苗聯(lián)合免疫無病原體豬,經(jīng)過一些列檢測試驗發(fā)現(xiàn)：pCDNA3.0-SwIFN-p, pCDNA3.0-H.Ps-Hsp70及pCDNA3.0-M.T-Hsp70均能誘導(dǎo)較強的免疫應(yīng)答反應(yīng),抗體滴度及中和抗體等試驗均顯示H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70能刺激強于豬β干擾素的免疫反應(yīng)；細胞因子檢測發(fā)現(xiàn),H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70能同時刺激IL-4和IFN-y的分泌表達,而豬β干擾素主要是刺激IFN-y的分泌表達,對IL-4分泌影響較小。但H.Ps-Hsp70和M.T-Hsp70之間無明顯差異。本實驗說明Hsp70針對JEV EDIII能誘導(dǎo)強于豬β干擾素的免疫應(yīng)答反應(yīng),且誘導(dǎo)通路更全面,可能作為JEV EDIII亞單位疫苗的候選佐劑。
[Abstract]:Japanese encephalitis ( JE ) is an acute infectious disease of the central nervous system caused by Japanese encephalitis virus ( JEV ) .

1 . Construction of recombinant vector : To study the biological activity of porcine p - interferon , we constructed recombinant yeast expression vector pZ偽A - SwIFN - 尾 , which realized the secretion expression of porcine interferon - beta in yeast , and prepared for subsequent experiments ;
Three kinds of recombinant eukaryotic expression vectors pCDNA3.0 - SwIFN - 尾 , pCDNA3.0 - H . Ps - Hsp70 and pCDNA3.0 - M.T - Hsp70 were prepared .
A series of experiments showed that the anti - Japanese encephalitis virus antibody and neutralizing antibody were significantly higher than other experimental groups in the experimental animals immunized with lugswIFN - 尾 + trx - EDIII and 10ug swIFN - 尾 + trx - EDIII .

In this experiment , three recombinant eukaryotic expression vectors pCDNA3.0 - SwIFN - 尾 , pCDNA3.0 - H . Ps - Hsp70 and pCDNA3.0 - M.T - Hsp70 , respectively , were combined with the porcine encephalitis ED 鈪，

本文編號：1955839