發(fā)布時(shí)間：2018-05-30 00:13

  本文選題：丙型肝炎病毒 + HMGB1�。� 參考：《湖南大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：丙型肝炎病毒（HCV）為單股正鏈RNA病毒，感染了全世界約1.7億人，可導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化、肝癌等嚴(yán)重的肝臟疾病。聯(lián)合使用聚乙二醇干擾素和利巴韋林是經(jīng)典的丙肝治療方法，但約50%的1型HCV病人對(duì)此耐藥，研發(fā)丙肝的新療法迫在眉睫，而對(duì)HCV生活周期的闡述則為抗病毒研究提供治療的靶標(biāo)。高遷移率族蛋白1（HMGB1）是一種非組蛋白核蛋白，調(diào)節(jié)染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。在病毒感染宿主細(xì)胞時(shí)，HMGB1既能抑制登革熱病毒和水泡性口炎病毒等病毒的復(fù)制，又能促進(jìn)禽流感病毒的復(fù)制，本課題主要研究肝細(xì)胞中HMGB1對(duì)HCV生活周期的影響。 我們運(yùn)用siRNA和shRNA等RNA干擾手段，對(duì)肝癌細(xì)胞系Huh7、Huh7.5以及HLCZ01中的HMGB1進(jìn)行基因沉默。在HCV感染Huh7.5和HLCZ01，以及NDV感染Huh7的實(shí)驗(yàn)中，沉默HMGB1導(dǎo)致細(xì)胞中的病毒含量降低，，過(guò)表達(dá)HMGB1則導(dǎo)致HCV在HLCZ01細(xì)胞中的含量升高，同時(shí)IFNβ的表達(dá)水平與細(xì)胞中病毒含量呈正相關(guān)性，這些結(jié)果預(yù)示著肝細(xì)胞中的HMGB1能夠促進(jìn)病毒復(fù)制，并且不是通過(guò)影響細(xì)胞的先天免疫反應(yīng)實(shí)現(xiàn)的。免疫熒光結(jié)果顯示，HCV的感染誘導(dǎo)了肝細(xì)胞中的HMGB1由胞核向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移。通過(guò)免疫共沉淀和RNA結(jié)合蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，HMGB1不與HCV的core、NS2、NS5A等病毒蛋白結(jié)合，而與HCV的負(fù)鏈RNA結(jié)合。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，HCV感染肝細(xì)胞后，HMGB1從胞核轉(zhuǎn)移至胞質(zhì)，通過(guò)結(jié)合HCV負(fù)鏈RNA促進(jìn)HCV的復(fù)制。我們的研究對(duì)于HMGB1在病毒感染中的功能，以及HCV的生活周期有了新的闡述，為抗病毒研究提供了一種新的靶標(biāo)、思路和方法。
[Abstract]:Hepatitis C virus (HCV) is a single strand of positive chain RNA virus, infected with about 170 million people worldwide, and can lead to chronic hepatitis, cirrhosis, liver cancer and other serious liver diseases. The combination of peginterferon and Leigh Bhave Lin is a classic hepatitis C treatment, but about 50% of type 1 HCV patients are resistant to this, and the new therapy for hepatitis C is imminent. The elaboration of the HCV life cycle provides a target for the treatment of antiviral research. High mobility group protein 1 (HMGB1) is a non histone nucleoprotein that regulates the structure and function of chromatin. When the virus infects the host cell, HMGB1 can inhibit the replication of dengue virus and vesicular stomatitis virus and promote the avian influenza virus. In this project, we mainly studied the effect of HMGB1 on the life cycle of HCV in hepatocytes.
We use RNA interference such as siRNA and shRNA to silencing the HMGB1 in the cell lines of Huh7, Huh7.5 and HLCZ01. In HCV infected Huh7.5 and HLCZ01, and NDV infection Huh7, the silence caused the decrease of the virus content in the cells. There is a positive correlation between the expression level and the virus content in the cells. These results indicate that HMGB1 in the hepatocytes can promote the replication of the virus and is not achieved by affecting the innate immune response of the cells. The immunofluorescence results show that the infection of HCV induces the transfer of HMGB1 from the nucleus to the cytoplasm in the liver cells. By immunoprecipitation and RN A binding protein immunoprecipitation assay demonstrated that HMGB1 does not bind to HCV's core, NS2, NS5A and other viral proteins, and is associated with negative chain RNA of HCV. These experimental data show that HMGB1 is transferred from the nucleus to the cytoplasm after HCV infection of the liver cells, and promotes replication by combining HCV negative strand RNA. The new life cycle of HCV has provided a new target, train of thought and method for antiviral research.
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R373.21

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本文編號(hào)：1953052