本文選題：重組豬IFN-α + 重組蛋白��； 參考：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： IFN-α(interferon alpha,IFN-α)是在特定誘生劑的作用下由細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有生物活性的糖蛋白,可誘導(dǎo)同種動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生廣譜的抗病毒活性。目前已發(fā)現(xiàn)近百種疫病能通過(guò)動(dòng)物傳染給人,其中很多為病毒性傳染病,有些目前尚未發(fā)現(xiàn)合適的疫苗和藥物來(lái)預(yù)防和治療,有些對(duì)病毒的生物學(xué)特性仍未研究清楚。IFN-α是抗病毒能力最強(qiáng)的干擾素,但無(wú)論是醫(yī)學(xué)還是獸醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)FN-α臨床應(yīng)用仍然極為有限,因此開(kāi)展IFN-α單克隆抗體的研制,為評(píng)價(jià)機(jī)體抗病毒水平以及IFN-α作用機(jī)制研究奠定基礎(chǔ),對(duì)推動(dòng)IFN-α在臨床上廣泛應(yīng)用具有重要作用。 本研究運(yùn)用雜交瘤細(xì)胞技術(shù),以重組豬IFN-α蛋白免疫BALB/c小鼠,無(wú)菌條件下制備小鼠免疫脾細(xì)胞,與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0細(xì)胞融合,通過(guò)通過(guò)GST和GST-pIFN-α雙重篩選和多次克隆化培養(yǎng),成功獲得了3株能分泌抗IFN-α的單克隆雜交瘤穩(wěn)定細(xì)胞株。用單克隆抗體亞型鑒定試劑盒鑒定其亞型,確定1株單克隆抗體為IgG2a,2株單克隆抗體為IgG2b。將分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株的染色體計(jì)數(shù),發(fā)現(xiàn)雜交瘤細(xì)胞株染色體平均數(shù)為92條,而骨髓瘤細(xì)胞株染色體平均數(shù)僅為66條,從遺傳角度證明確實(shí)獲得了雜交瘤細(xì)胞株;雜交瘤細(xì)胞腹水和細(xì)胞上清經(jīng)ELISA檢測(cè),腹水中3株雜交瘤分泌單抗的效價(jià)均可達(dá)1:105,而細(xì)胞上清的效價(jià)可達(dá)到1:104;單抗的抗原結(jié)合位點(diǎn)分析表明,3株單抗的抗原結(jié)合位點(diǎn)基本一致;SDS-PAGE結(jié)果顯示,3株單抗的重鏈分子量均在60ku以上,輕鏈分子量在30ku以上;在雜交瘤細(xì)胞的穩(wěn)定性試驗(yàn)中,3株細(xì)胞經(jīng)3次克隆化培養(yǎng),細(xì)胞上清中的抗體效價(jià)均在1:104～1:105之間,說(shuō)明該3株雜交瘤細(xì)胞分泌單抗的能力穩(wěn)定,具有較好的遺傳穩(wěn)定性。
[Abstract]:IFN- 偽 interferon alpha-IFN- 偽) is a bioactive glycoprotein produced by cells under the action of a specific inducer, which can induce a broad spectrum of antiviral activity in the same species of animal cells. At present, it has been found that nearly 100 kinds of epidemic diseases can be transmitted to people through animals, many of which are viral infectious diseases. Some of them have not yet found suitable vaccines and drugs to prevent and treat them. Some of the biological characteristics of the virus have not been studied clearly. IFN- 偽 is the most potent antiviral interferon, but the clinical application of IFN- 偽 in both medicine and veterinary medicine is still very limited. Therefore, the development of monoclonal antibodies against IFN- 偽 has been carried out. It lays a foundation for evaluating the level of anti-virus and the mechanism of IFN- 偽, and plays an important role in promoting the wide application of IFN- 偽 in clinic. In this study, BALB/c mice were immunized with recombinant porcine IFN- 偽 protein by hybridoma cell technique. Spleen cells were prepared under sterile conditions and fused with myeloma cell line SP2/0 cells. GST and GST-pIFN- 偽 double screening and multiple cloning culture were used. Three monoclonal hybridoma stable cell lines secreting anti IFN- 偽 were successfully obtained. The subtypes were identified by using monoclonal antibody subtype identification kit, and one monoclonal antibody was identified as IgG2a2 and two monoclonal antibodies were IgG2b. The chromosome count of hybridoma cell lines secreting monoclonal antibodies showed that the average chromosome number of hybridoma cell lines was 92, while the average chromosome number of myeloma cell lines was 66. From the genetic point of view, hybridoma cell lines were obtained. Ascites and supernatants of hybridoma cells were detected by ELISA. The titers of McAbs secreted by three strains of hybridoma in ascites were 1: 105, while the titers of supernatants reached 1: 104.The antigen-binding sites of McAbs were basically consistent with those of SDS-PAGE. The molecular weight of the chain is above 60ku. The molecular weight of light chain was above 30ku, and in the stability test of hybridoma cells, the antibody titers in the supernatant were between 1: 104 and 1: 105, which indicated that the monoclonal antibody secreted by the three hybridoma cells was stable, and the antibody titers in the supernatant were between 1: 104 and 1: 105, which indicated that the three hybridoma cells had stable ability to secrete monoclonal antibodies. It has good genetic stability.
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1941954