本文選題：雙歧桿菌完整肽聚糖 + 樹突狀細(xì)胞��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 目的:通過研究雙歧桿菌和不同劑量雙歧桿菌完整肽聚糖(Whole Peptidoglycan, WPG)對(duì)臍血單核細(xì)胞來源樹突狀細(xì)胞(Cord blood monocyte-derived dendritic cells, CB-MDDCs)形態(tài)、表面標(biāo)志、刺激淋巴細(xì)胞增殖功能及分泌細(xì)胞因子的影響,了解雙歧桿菌及其WPG在體外對(duì)CB-MDDCs分化、成熟及免疫調(diào)節(jié)功能的作用;探討雙歧桿菌防治免疫失調(diào)性疾病的可能機(jī)制,為益生菌及其生物活性成分的進(jìn)一步開發(fā)提供依據(jù)。 方法:分離正常孕婦臍血單個(gè)核細(xì)胞(Cord blood monocular cell,CBMC),貼壁培養(yǎng)獲得臍血單核細(xì)胞(Cord blood Monocyte, CB-Mon), GM-CSF、IL-4聯(lián)合誘導(dǎo)單核細(xì)胞生成未成熟樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells, DCs),實(shí)驗(yàn)組在培養(yǎng)的第7天分別加入兩歧雙歧桿菌全菌、不同劑量(1μg/ml-8μg/ml)兩歧雙歧桿菌WPG,陽性對(duì)照組加入脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),陰性對(duì)照組僅加入培養(yǎng)基。通過CB-MDDCs形態(tài)學(xué)觀察,流式細(xì)胞術(shù)檢測CB-MDDCs表面標(biāo)志物CD83及CD1a的表達(dá),MLR檢測CB-MDDCs刺激同種異體T淋巴細(xì)胞能力,ELISA法測定CB-MDDCs培養(yǎng)上清中IL-12、IL-10的分泌,確定雙歧桿菌及其WPG在體外對(duì)CB-MDDCs成熟程度及功能的影響;比較雙歧桿菌與其WPG的免疫調(diào)節(jié)作用的差別。 結(jié)果:(1)CB-Mon在雙歧桿菌或其WPG(1-6μg/ml)與GM-CSF、IL-4協(xié)同誘導(dǎo)作用下,成為形態(tài)上具有典型樹突狀突起的DCs;誘導(dǎo)后的CB-MDDCs刺激同種異體T細(xì)胞的增殖能力及分泌IL-12p70、IL-10的水平顯著高于陰性對(duì)照組(P0.01);其中以WPG 5μg/ml組刺激能力最強(qiáng),且該組細(xì)胞表面標(biāo)志物CD83及CD1a的表達(dá)增加。(2)當(dāng)WPG的量達(dá)到2μg/ml時(shí),CB-MDDCs刺激同種異體T淋巴細(xì)胞的能力及分泌IL-12p70、IL-10的水平與雙歧桿菌全菌組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異(P0.05),而當(dāng)WPG的量達(dá)到5μg/ml時(shí),其對(duì)CB-MDDCs的刺激能力則明顯高于雙歧桿菌全菌組(P0.01);(3)WPG的濃度在1- 5μg/ml時(shí)CB-MDDCs分泌的IL-12及IL-10的量呈劑量依賴性,其中WPG 5μg/ml時(shí)作用最為顯著,WPG量為6μg/ml時(shí)分泌的量減少,WPG量為8μg/ml時(shí),分泌的量與陰性對(duì)照組無差異(P0.05)。 結(jié)論: 1.雙歧桿菌及其WPG能影響CB-MDDCs的成熟狀態(tài)。 2.雙歧桿菌及其WPG通過刺激CB-MDDCs分泌細(xì)胞因子調(diào)節(jié)Th1/Th2之間平衡,可能是防治免疫失調(diào)性疾病的作用機(jī)制之一。 3.雙歧桿菌WPG對(duì)CB-MDDCs成熟程度及分泌細(xì)胞因子水平的影響強(qiáng)于雙歧桿菌全菌,說明WPG是雙歧桿菌主要免疫活性成分;不同劑量WPG的免疫調(diào)節(jié)作用呈一定量效關(guān)系,提示益生菌制劑只能在一定劑量范圍內(nèi)發(fā)揮有益作用。
[Abstract]:Objective: to study the effects of Bifidobacterium and different doses of Bifidobacterium peptidoglycan (WPG) on the morphology, surface markers, lymphocyte proliferation and cytokine secretion of cord blood monocyte derived dendritic cells (CB-MDDCs). To understand the effects of bifidobacterium and its WPG on the differentiation, maturation and immunomodulation of CB-MDDCs in vitro, and to explore the possible mechanism of bifidobacterium in preventing and treating immune disorders, which provides the basis for the further development of probiotics and its bioactive components. Methods: umbilical cord blood mononuclear cells (Cord blood monocular cells) were isolated from normal pregnant women, and cord blood monocytes, CB-Monocyte, CB-Monocyte, GM-CSFFN- IL-4 were isolated from cord blood mononuclear cells to induce the formation of immature dendritic cells (DCS). The experimental group was cultured on the 7th day. Add Bifidobacterium bifidobacterium, Different doses of 1 渭 g/ml-8 渭 g / ml of bifidobacterium (WPGs) were added to the lipopolysaccharide of lipopolysaccharide in the positive control group, and only to the medium in the negative control group. The expression of CD83 and CD1a on the surface of CB-MDDCs was detected by flow cytometry. The ability of CB-MDDCs to stimulate allogeneic T lymphocytes was detected by Elisa. The secretion of IL-12 and IL-10 in the supernatant of CB-MDDCs was determined by Elisa. To determine the effect of Bifidobacterium and its WPG on the maturation and function of CB-MDDCs in vitro, and to compare the immunomodulatory effect between Bifidobacterium and its WPG. Results the CB-Mon was induced by Bifidobacterium or its WPG(1-6 渭 g / ml in collaboration with GM-CSFU IL-4. The ability of CB-MDDCs to stimulate the proliferation of allogeneic T cells and the level of IL-12p70 ~ + IL-10 secretion were significantly higher than those of negative control group (P 0.01), and the stimulation ability of WPG 5 渭 g/ml group was the highest. Moreover, the expression of CD83 and CD1a on the cell surface was increased.) when the amount of WPG reached 2 渭 g/ml, the ability of CB-MDDCs to stimulate allogeneic T lymphocytes and the level of IL-12p70 IL-10 secreted by CB-MDDCs were not significantly different from those of the whole bifidobacterium group, but when the amount of WPG reached 5 渭 g/ml, there was no significant difference between them. Its stimulating ability to CB-MDDCs was significantly higher than that of P0.01M3WPG of Bifidobacterium in a dose-dependent manner when the concentration of CB-MDDCs was 1 -5 渭 g/ml, and the amount of IL-12 and IL-10 secreted by CB-MDDCs was most significant when WPG 5 渭 g/ml was 6 渭 g/ml, and the quantity of WPG decreased to 8 渭 g/ml when the concentration of WPG 5 渭 g/ml was 6 渭 g/ml. There was no difference in secretion between the control group and the negative control group (P 0.05). Conclusion: 1. Bifidobacterium and its WPG can affect the mature state of CB-MDDCs. 2. Bifidobacterium and its WPG regulate the balance of Th1/Th2 by stimulating the secretion of cytokines by CB-MDDCs, which may be one of the mechanisms of preventing and treating immune disorders. 3. The effect of Bifidobacterium WPG on CB-MDDCs maturation and cytokine secretion was stronger than that of Bifidobacterium, indicating that WPG was the main immune active component of Bifidobacterium, and the immunomodulatory effect of different doses of WPG was in a dose-dependent manner. The results suggest that probiotics can only play a beneficial role in a certain dose range.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1933720