本文選題：黃芩苷 + T淋巴細(xì)胞��； 參考：《南昌大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 目的:研究黃芩苷對(duì)人淋巴細(xì)胞Toll樣受體(TLR)的調(diào)節(jié),探討其在免疫調(diào)節(jié)方面的作用。 方法: 1.采用尼龍毛分離法分離人外周血T和B細(xì)胞;2.采用UF-50流式分析尋找最佳黃芩苷作用濃度;3.采用實(shí)時(shí)定量熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR),分析在最佳黃芩苷作用濃度處理前后TLRs的表達(dá)情況;4.通過(guò)受體抑制實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)定量熒光RT-PCR探討黃芩苷對(duì)TLRs的調(diào)節(jié)位點(diǎn)。 結(jié)果:1.體外孵育48h后,1mg/ml的黃芩苷可以顯著促進(jìn)人T、B淋巴細(xì)胞增殖(P0.05);2.使用1mg/ml黃芩苷相對(duì)于未用黃芩苷處理的T、B細(xì)胞,其TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的表達(dá)均有顯著增加(P0.05),T細(xì)胞增加倍數(shù)分別為21、15、57和66倍,B細(xì)胞增加的倍數(shù)分別為24、20、61和63倍,TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNA表達(dá)變化不顯著(P0.05);3.在1mg/ml黃芩苷作用下人T、B細(xì)胞TLR3、7、8和9 mRNA在12h時(shí)表達(dá)已開(kāi)始增加,除T細(xì)胞的TLR7 mRNA表達(dá)在48h時(shí)略有下降外,其余表達(dá)基本一直持續(xù)增加,至48h到達(dá)峰值;4.人T、B細(xì)胞在被黃芩苷作用前使用鼠抗人TLR4單克隆抗體封閉,會(huì)顯著降低黃芩苷對(duì)TLR3、7、8和9 mRNA表達(dá)的誘導(dǎo)作用(P0.05),使得T細(xì)胞增加倍數(shù)分別降為11、5、28和36倍,下降比率分別為47.6%、66.7%、50.9%和45.5%;B細(xì)胞增加的倍數(shù)分別降為12、11、30和31倍,下降比率分別為50.0%、45.0%、50.8%和50.8%。 結(jié)論:1.黃芩苷在體外能顯著促進(jìn)T、B淋巴細(xì)胞增殖;2.人外周血T、B細(xì)胞組成性表達(dá)含量差異較大的TLR1-10mRNA,黃芩苷在體外可以顯著上調(diào)人T、B淋巴細(xì)胞TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表達(dá),但對(duì)TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6及TLR10 mRNA沒(méi)有影響;3.黃芩苷可能通過(guò)TLR4參與對(duì)人天然免疫能力的調(diào)節(jié)。
[Abstract]:Aim: to study the regulation of baicalin on Toll like receptor (TLR) in human lymphocytes and its role in immunomodulation. Methods: 1. Human peripheral blood T and B cells were separated by nylon wool method. UF-50 flow analysis was used to find the best concentration of baicalin. Real-time quantitative fluorescence reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to analyze the expression of TLRs before and after the best concentration of baicalin. The regulatory sites of baicalin on TLRs were investigated by receptor inhibition test and real-time quantitative RT-PCR. The result is 1: 1. After incubation in vitro for 48 h, baicalin (1 mg / ml) could significantly promote the proliferation of human TnB lymphocytes. The expression of TLR8 and TLR9mRNA in 1mg/ml baicalin was significantly higher than that in TLB cells without baicalin treatment. The expression of TLR8 and TLR9mRNA in TLR3, TLR7, TLR7, TLR8, TLR8, TLR7, TLR8, TLR7, TLR8, TLR7, TLR8, TLR8, TLR8 and TLR6 of TLR7, TLR7, TLR6, and TLR6 in TLR7, TLR7, TLR6, TLR7, TLR6, TLR7, TLR6, TLR6, TLR7, TLR6, and TLR6, The expression of TLR3O78 and 9 mRNA began to increase at 12h after the action of 1mg/ml baicalin, and the expression of TLR3n78 and 9 mRNA increased continuously at 48h, except that the TLR7 mRNA expression of T cells decreased slightly at 48h. The blocking of mouse anti-human TLR4 monoclonal antibody before being treated with baicalin could significantly reduce the induction of baicalin on the expression of TLR3O7O8 and 9 mRNA, and reduce the T cell proliferation multiple to 115mand 36-fold, respectively. The decreasing rates were 47.6% and 45.5%, respectively, and the increase times of B cells were decreased to 120.1130 and 31 times, respectively, and the decreasing rates were 50.0% and 50.8%, respectively. Conclusion 1. Baicalin can significantly promote the proliferation of T B lymphocytes in vitro. In vitro, baicalin could significantly up-regulate the expression of TLR3, TLR7, TLR8 and TLR9 mRNA in human peripheral blood TLR1-10mRNAs, but had no effect on TLR1-10mRNAs and TLR5TLR6 and TLR10 mRNA. Baicalin may be involved in the regulation of human innate immunity through TLR4.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1913796