本文選題：無(wú)創(chuàng)性延遲肢體缺血預(yù)適應(yīng) + 延遲相心臟保護(hù)　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2008年博士論文

【摘要】： 目的:研究無(wú)創(chuàng)性延遲肢體缺血預(yù)適應(yīng)(NDLIP)對(duì)大鼠心肌缺血再灌注(I/R)損傷的保護(hù)作用,并探討線粒體ATP敏感性鉀通道(mitoK_(ATP))在NDLIP延遲保護(hù)效應(yīng)中的作用。 方法:健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為5組。(1)I/R組(n=22):心臟冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)實(shí)施30 min缺血/120 min再灌注。(2)早期心肌缺血預(yù)適應(yīng)組(EMIP組,n=22):心臟LAD先行3次5 min缺血/5 min再灌注,隨后實(shí)施30 min缺血/120 min再灌注。(3)NDLIP組(n=22):左后肢實(shí)施3次5 min缺血/5 min再灌注,每天1次,連續(xù)3天,第4天對(duì)心臟LAD實(shí)施30 min缺血/120 min再灌注。(4)I/R+mitoK_(ATP)特異性阻斷劑5-羥基癸酸鈉(5-HD)組(I/R+5-HD組,n=22):I/R組大鼠LAD結(jié)扎前靜脈注射5-HD(9 mg/kg),LAD結(jié)扎25 min開始至再灌注120 min末持續(xù)靜脈輸入5-HD(1 mg/kg)。(5)NDLIP+5-HD組(n=22):NDLIP組大鼠LAD結(jié)扎前靜脈注射5-HD(9 mg/kg),LAD結(jié)扎25 min開始至再灌注120 min末持續(xù)靜脈輸入5-HD(1 mg/kg)。從ECG、心肌細(xì)胞死亡、心肌抗氧化能力、血管內(nèi)皮功能以及凝血功能變化等方面評(píng)價(jià)NDLIP延遲心臟保護(hù)作用。監(jiān)測(cè)LAD 30 min缺血/120 min再灌注期間心率(HR)、平均動(dòng)脈壓(MAP)、ECG變化;TTC染色法測(cè)定心肌梗死面積,TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡,免疫組化法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Fas、FasL表達(dá)情況,HE染色觀察心肌形態(tài)學(xué)改變;比色法測(cè)定心肌組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、錳-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、黃嘌呤氧化酶(XOD)活力,丙二醛(MDA)含量,以及血清一氧化氮(NO)濃度;RT-PCR法檢測(cè)心肌Mn-SOD mRNA含量,ELISA法檢測(cè)血清內(nèi)皮素-1(ET-1)含量;凝固法測(cè)定凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)和纖維蛋白原(FIB)含量。 結(jié)果: 1.NDLIP對(duì)大鼠心肌I/R損傷所致心電圖變化的影響 與I/R組比較,EMIP組和NDLIP組I/R期間ST-段抬高幅度降低(P＜0.01),室早(VPC)、室速(VT)出現(xiàn)時(shí)間推遲(VPC:5.33±2.14 min vs11.85±1.79 min and 8.25±2.15 min,respectively,P＜0.01;VT:6.40±2.77 min vs13.25±1.72 min and 10.16±3.29 min,respectively P＜0.01),持續(xù)時(shí)間縮短(VPC:12.09±2.63 min vs 5.13±2.18 min and 6.65±2.20 min,respectively,P＜0.01;VT:10.45±4.24 min vs 3.26±1.69 min and 4.06±1.92 min,respectively,P＜0.01),VT、VF發(fā)生率降低(VT:81.82%vs 22.73%and 50%,respectively,P＜0.05;VF:54.54%vs 13.64%and 18.18%,respectively,P＜0.05)。NDLIP對(duì)I/R期間HR和MAP變化無(wú)顯著性影響。 2.NDLIP對(duì)大鼠心肌I/R損傷后心肌細(xì)胞死亡的影響 與I/R組比較,EMIP組和NDLIP組心肌梗死面積縮小(IS/AAR%:32.4±10.1%vs 19.0±5.9%and 21.4±9.4%,respectively,P＜0.05),MPO活性降低(1.05±0.16 U/g vs 0.89±0.05 U/g and 0.77±0.11 U/g,respectively,P＜0.05),心肌細(xì)胞凋亡減少(TUNEL:31.66±3.74%vs 20.67±1.30%and 22.09±1.76%,respectively,P＜0.01),凋亡相關(guān)蛋白Fas、FasL表達(dá)陽(yáng)性指數(shù)降低(Fas:28.51±1.31%vs 21.91±2.15%and 22.21±1.84%,respectively,P＜0.01;FasL:26.81±1.43%vs 19.75±1.80%and 19.95±1.74%,respectively,P＜0.01),心肌形態(tài)學(xué)損傷減輕。EMIP和NDLIP保護(hù)作用相當(dāng)。 3.NDLIP對(duì)大鼠心肌I/R損傷后抗氧化能力的影響 與I/R組比較,EMIP組和NDLIP組心肌T-SOD(144.78±16.47U/mgprotvs 162.26±6.41 U/mgprot and 162.67±14.21 U/mgprot,respectively,P＜0.05)、Mn-SOD(46.37±12.18 U/mgprot vs 76.49±17.57 U/mgprot and 75.67±3.36U/mgprot,respectively,P＜0.01)、GSH-PX(79.38±7.95 U/gprot vs 90.62±9.80U/gprot and 92.74±7.76 U/gprot,rcspectively,P＜0.05)活力增強(qiáng),Mn-SOD mRNA表達(dá)增加(Mn-SOD/β-actin%:41.36±14.91%vs 61.46±10.73%and 79.18±21.92%,respectively,P＜0.05),XOD活性(91.20±10.69 U/gprot vs 81.34±7.23 U/gprot and76.29±8.77 U/gprot,respectively,P＜0.05)和MDA含量(2.01±0.17 nmol/mgprot vs1.79±0.18 nmol/mgprot and 1.68±0.11 nmol/mgprot,respectively,P＜0.05)降低。EMIP和NDLIP保護(hù)作用相當(dāng)。 4.NDLIP對(duì)大鼠心肌I/R損傷前后血管內(nèi)皮功能的影響 缺血前,與I/R組比較,EMIP組和NDLIP組血清NO濃度升高(11.88±2.46μmol/L vs 14.85±2.00μmol/L and 15.09±2.82μmol/L,respectively,P＜0.05),ET-1/NO比值降低(0.2526±0.0673 vs 0.2005±0.0528 and 0.1834±0.0490,respectively,P＜0.05)。再灌注后,EMIP組和NDLIP組血清ET-1升高程度降低(4.10±0.30 ng/ml vs 3.50±0.34 ng/ml and 3.21±0.49 ng/ml,respectively,P＜0.01),NO濃度得到保留(7.21±1.29μmol/L vs 10.23±0.82μmol/L and11.18±2.52μmol/L,respectively,P＜0.01),ET-1/NO比值升高程度降低(0.5790±0.1571 vs 0.3448±0.0492 and 0.3105±0.0695,respectively,P＜0.05)。EMIP和NDLIP保護(hù)作用相當(dāng)。 5.NDLIP對(duì)大鼠心肌I/R損傷前后凝血功能的影響 缺血前,各組凝血指標(biāo)無(wú)顯著性差異。再灌注后,與I/R組比較,EMIP組和NDLIP組FIB升高程度較I/R組顯著降低(238.28±22.19 mg/dl vs214.73±22.33 mg/dl and 216.54±14.52 mg/dl,respectively,P＜0.05),各組間PT和APTT無(wú)明顯差異。 6.mitoK_(ATP)在NDLIP保護(hù)效應(yīng)中的作用 與I/R組比較,I/R+5-HD組各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)顯著性差異,說(shuō)明5-HD自身對(duì)I/R損傷無(wú)影響。NDLIP誘導(dǎo)的上述保護(hù)作用在NDLIP+5-HD組均消失或減弱。與NDLIP組比較,NDLIP+5-HD組I/R期間ST-段抬高幅度增加(P＜0.05),VPC、VT出現(xiàn)時(shí)間提前(VPC:8.25±2.15 min vs 6.28±2.29 min,P＜0.01;VT:10.16±3.29 min vs 6.81±2.85 min,P＜0.01),持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)(VPC:6.65±2.20 min vs 10.31±5.14 min,P＜0.01;VT:4.06±1.92 min vs 9.35±4.17 min,P＜0.01),VT、VF發(fā)生率升高(VT:50%vs 81.82%,P＜0.05;VF:18.18%vs 50%,P＜0.01)。I/R后心肌梗死面積擴(kuò)大(21.4±9.4%vs 34.9±14.7%,P＜0.05),MPO活力升高(0.77±0.11 U/g vs 0.98±0.24 U/g,P＜0.05),心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)增加(22.09±1.76%vs 27.28±1.38%,P＜0.01),Fas、FasL表達(dá)陽(yáng)性指數(shù)增加(Fas:22.21±1.84%vs 26.53±1.56%,P＜0.01;FasL:19.95±1.74%vs 24.65±1.85%,P＜0.01),心肌形態(tài)學(xué)損傷加重。心肌T-SOD(162.67±14.21 U/mgprot vs145.07±14.02 U/mgprot,P＜0.05)、Mn-SOD(75.67±3.36 U/mgprot vs 44.75±15.33U/mgprot,P＜0.01)、GSH-PX(92.74±7.76 U/gprot vs 79.00±7.51 U/gprot,P＜0.01)活力降低,Mn-SOD mRNA表達(dá)減少(79.18±21.92%vs 54.62±15.31%,P＜0.05),XOD活力(76.29±8.77 U/gprot vs 94.73±10.66 U/gprot,P＜0.01)和MDA含量(1.68±0.11 nmol/mgprot vs 2.10±0.23 nmol/mgprot,P＜0.01)增加。血清ET-1濃度升高(3.21±0.49 ng/ml vs 3.91±0.22 ng/ml,P＜0.01),NO水平降低(11.18±2.52μmol/L vs 7.71±1.47μmol/L,P＜0.01),ET-1/NO比值升高(0.3105±0.0695 vs0.5372±0.0976,P＜0.01)。血漿FIB濃度增加(216.54±14.52 mg/dl vs 234.23±22.40mg/dl,P＜0.05)。 結(jié)論: 1.NDLIP明顯降低I/R所致ST-段抬高幅度,推遲缺血期VPC、VT出現(xiàn)時(shí)間,縮短其持續(xù)時(shí)間,降低惡性室性心律失常發(fā)生率,具有延遲抗心律失常作用,其保護(hù)作用強(qiáng)度與EMIP相當(dāng)。NDLIP對(duì)I/R所致MAP和HR變化無(wú)影響。 2.NDLIP能縮小I/R所致心肌梗死面積,減少心肌細(xì)胞凋亡,改善心肌形態(tài)學(xué)改變,其抗細(xì)胞死亡的延遲保護(hù)作用強(qiáng)度與EMIP相當(dāng)。機(jī)制可能與降低MPO活力,下調(diào)凋亡相關(guān)蛋白Fas、FasL表達(dá)有關(guān)。 3.NDLIP能增強(qiáng)I/R損傷心肌的抗氧化能力,減輕過(guò)氧化損傷,此作用強(qiáng)度與EMIP相當(dāng)。 4.NDLIP能增加基礎(chǔ)狀態(tài)下的血清NO濃度,使ET-1與NO之間的平衡向NO移動(dòng)。I/R后,NDLIP減輕血管內(nèi)皮功能障礙,保留血清NO濃度,降低ET-1升高幅度,使ET-1與NO之間的平衡接近正常,其保護(hù)作用強(qiáng)度與EMIP相當(dāng)。 5.NDLIP對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下的凝血功能無(wú)影響,但能降低I/R后血漿FIB增加程度,可能是其延遲心臟保護(hù)作用機(jī)制之一。 6.mitoK_(ATP)的開放參與介導(dǎo)NDLIP上述延遲保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1911289