本文選題：十溴聯(lián)苯醚 + 體外受精��； 參考：《暨南大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 第一部分外源性BDE-209暴露對(duì)小鼠體外受精受精率及早期胚胎發(fā)育的影響 【目的】 本研究在外源性BDE-209可降低卵母細(xì)胞存活率的基礎(chǔ)上,采用用昆明小鼠體外受精、早期胚胎發(fā)育的方法,擬初步探討B(tài)DE-209對(duì)小鼠體外受精率的影響及小鼠早期胚胎發(fā)育的毒性作用,并探究其劑量效應(yīng)關(guān)系。 【方法】 將體外受精培養(yǎng)液按照BDE-209的終濃度不同設(shè)為四組：對(duì)照組A 0μg／ml；B組：10μg／ml；C組：20μg／ml；D組：40μg／ml。取性成熟昆明雌鼠20只及雄鼠8只,對(duì)雌鼠行促排卵及促卵成熟,收集成熟卵母細(xì)胞隨機(jī)平均放入以上培養(yǎng)液中,對(duì)雄性小鼠附睪尾取精,加入培養(yǎng)液中,使其受精。放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。觀察指標(biāo)：小鼠受精后6小時(shí)倒置顯微鏡下觀察卵細(xì)胞第二極體形成情況,此后根據(jù)小鼠體內(nèi)受精卵的發(fā)育與運(yùn)行規(guī)律,每隔24小時(shí)觀察一次。統(tǒng)計(jì)各組2-細(xì)胞、4-細(xì)胞、8-細(xì)胞、桑葚胚及囊胚形成率,并觀察其形態(tài)變化。 [結(jié)果] 1、在2細(xì)胞階段：對(duì)照組A組2細(xì)胞成形率為69.2%；BDE-209低劑量組B組為63.3%；中劑量組C組為28.1%；高劑量組D組為24.1%。B組的受精率稍低于A組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.750,P=0.387)；C組與A組相比,明顯低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.478,P0.001)；D組與A組相比,低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.29,P0.001)。 2、4-細(xì)胞、8細(xì)胞、桑葚胚及囊胚形成率,實(shí)驗(yàn)各組均低于對(duì)照組,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3、B組與A組比較,除二細(xì)胞期外,B組胚胎各期發(fā)育率均低于A組。B組VS A組,①4-細(xì)胞期,χ2=4.927,P=0.026；②8細(xì)胞、桑葚胚及囊胚形成率,(P0.001)。 4、C組與B組比較,C組胚胎各期發(fā)育率均低于B組(P0.01)。 5、D組與C組比較,除2-細(xì)胞期外,D組胚胎各期發(fā)育率均低于C組(P0.01)。 【結(jié)論】 1、外源性低劑量(10μg／ml)的BDE-209對(duì)小鼠的受精率無明顯影響,但是中高劑量(20μg／ml、40μg／ml)的BDE-209均可明顯降低小鼠體外受精的受精率。 2、各濃度的外源性BDE-209均能顯著阻滯小鼠受精卵的正常發(fā)育。 3、由結(jié)果3、4、5可以看出,外源性BDE-209對(duì)小鼠受精卵胚胎的發(fā)育毒性作用呈現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系。 綜上,通過本實(shí)驗(yàn),闡明外源性的BDE-209對(duì)昆明小鼠受精率及受精卵的發(fā)育確有毒性,其具體損傷機(jī)制及損傷途徑有待深入探討與證實(shí),可根據(jù)卵細(xì)胞及精子的發(fā)育代謝原理有針對(duì)性地行進(jìn)一步研究。 第二部分外源性BDE-209急性染毒對(duì)小鼠附睪尾精子DNA的損傷 【目的】 本研究在第一部分研究的基礎(chǔ)上,對(duì)BDE-209降低昆明小鼠受精率,阻滯受精卵發(fā)育的損傷機(jī)制及損傷途徑進(jìn)行進(jìn)一步的研究,以期找出BDE-209的毒性機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)對(duì)附睪尾精子行外源性染毒的,采用堿性單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)檢測(cè)BDE-209染毒小鼠精子DNA的損傷,以此探討B(tài)DE-209的毒性作用機(jī)制。 【方法】 1、附睪尾取精法體外獲得昆明小鼠精子,分別添加到HTF培養(yǎng)基中。按照培養(yǎng)基中BDE-209終濃度的不同將實(shí)驗(yàn)分為5組：A組0μg／ml；B組：2.5μg／ml；C組：5μg／ml；D組：10μg／ml；E組：20μg／ml。將各組加入了精子的培養(yǎng)基放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中,處理時(shí)間為2.5小時(shí)。 2、精子的單細(xì)胞凝膠電泳染毒完畢后,將個(gè)樣本按照鋪膠、裂解、去除核RNA和核蛋白、解旋、電泳、中和、染色等步驟進(jìn)行單細(xì)胞凝膠電泳。最后在熒光顯微鏡下觀察并拍照。 3、統(tǒng)計(jì)：每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,每次每組計(jì)數(shù)70個(gè)細(xì)胞,每組共計(jì)200個(gè)細(xì)胞,利用彗星分析軟件對(duì)細(xì)胞進(jìn)行逐個(gè)分析,選取細(xì)胞尾長(zhǎng)、尾頭光強(qiáng)、尾部%DNA,Olive尾矩、尾長(zhǎng)／頭長(zhǎng)、遷移率等幾個(gè)客觀指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 【結(jié)果】 1、BDE-209對(duì)小鼠精子DNA損傷SCGE試驗(yàn)距離及強(qiáng)度指標(biāo)的影響 在SCGE試驗(yàn)圖片中,正常對(duì)照組可見細(xì)胞核清晰,大部分細(xì)胞呈圓形,邊界清楚,密度均勻,拖尾細(xì)胞很少,平均尾長(zhǎng)為1.15±1.27μm。隨著BDE-209染毒劑量的加大,在10μg／ml及20μg／ml濃度時(shí),可見到部分細(xì)胞拖尾,平均尾長(zhǎng)分別為2.13±1.29μm和2.83.±2.46μm。細(xì)胞尾部DNA的含量比也明顯增加。經(jīng)χ2檢驗(yàn),10μg／ml及20μg／ml劑量組細(xì)胞尾長(zhǎng)、尾部%DNA與對(duì)照組相比,差異均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。實(shí)驗(yàn)組的尾長(zhǎng)、尾光強(qiáng)度及尾%DNA與正常組相比,經(jīng)F檢驗(yàn),其差異也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2、BDE-209對(duì)小鼠精子DNA損傷SCGE試驗(yàn)相對(duì)比指標(biāo)的改變 此部分結(jié)果為相對(duì)比,更加能夠說明問題。結(jié)果顯示：Olive尾矩,對(duì)照組為0.270±0.322,10μg／ml及20μg／ml劑量組分別是0.453±0.375和0.808±0.822。尾長(zhǎng)／頭長(zhǎng),對(duì)照組為0.045±0.049,5μg／ml、10μg／ml及20μg／ml劑量組均高于對(duì)照組。經(jīng)χ2檢驗(yàn),10μg／ml及20μg／ml向劑量組在Olive尾矩、尾長(zhǎng)／頭長(zhǎng)和對(duì)照組相比,差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),5μg／ml組在尾長(zhǎng)／頭長(zhǎng)與對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3、小鼠精子DNA損傷中各指標(biāo)變化與BDE-209濃度的相關(guān)性分析。 在結(jié)果選取的6個(gè)指標(biāo)中,除遷移率外,其他五個(gè)指標(biāo),經(jīng)過Person相關(guān)分析,相關(guān)系數(shù)均大于0.9。 【結(jié)論】 1、外源性的BDE-209造成小鼠精子DNA的損傷,導(dǎo)致小鼠精子DNA鏈的斷裂。 2、外源性BDE-209致小鼠精子DNA鏈斷裂的損傷作用呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。
[Abstract]:Effects of exogenous BDE - 209 exposure on fertilization rate and early embryo development in mice



Purpose of the project



The effect of BDE - 209 on in vitro fertilization rate of mice and the toxicity of BDE - 209 on in vitro fertilization rate in mice and its dose - effect relationship were investigated .



Methodology



In vitro fertilization , the final concentration of BDE - 209 was set to four groups : control group A 0 渭g / ml ;
B緇勶細(xì)10渭g錛弇l錛，

本文編號(hào)：1890288