本文選題：ALK1 + ALK2��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： BMPs屬于TGFβ超家族,最初是作為骨生長因子被發(fā)現(xiàn)的,目前共分離和鑒定了20余種BMPs。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)在器官發(fā)育和組織損傷再生等過程中發(fā)揮著重要作用。目前,已報(bào)道的具有誘導(dǎo)成骨活性的BMPs主要是BMP2、4、7等。近年來的研究發(fā)現(xiàn)BMP9具有強(qiáng)大的誘導(dǎo)成骨能力,但是由于其被關(guān)注的時(shí)間較短,所以對BMP9信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程以及誘導(dǎo)成骨的分子機(jī)制還缺乏了解。 BMPs是通過跨膜絲氨酸/蘇氨酸激酶受體傳遞信號的。TGFβ受體分為Ⅰ型受體與Ⅱ型受體,其中Ⅱ型受體處于持續(xù)磷酸化狀態(tài),即持續(xù)激活的狀態(tài),而Ⅰ型受體則需要Ⅱ型受體磷酸化相應(yīng)位點(diǎn)后才能被激活,Ⅰ型受體激活后,再磷酸化激活下游的轉(zhuǎn)錄因子Smads。Ⅰ型受體和Ⅱ型受體復(fù)合物是BMPs信號途徑的必要分子。其中Ⅰ型受體,在BMPs信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程和功能發(fā)揮中起著承上啟下的關(guān)鍵作用。 我們實(shí)驗(yàn)室前期工作,利用顯性負(fù)性突變型TGFβⅠ型受體的腺病毒和BMP9共同作用發(fā)現(xiàn),ALK1、ALK2這兩種Ⅰ型受體很可能與BMP9誘導(dǎo)成骨有關(guān)�；诖�,本研究擬對Ⅰ型受體ALK1和ALK2參與BMP9誘導(dǎo)成骨的作用進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。 本研究利用T-C He等設(shè)計(jì)的一種siRNA篩選系統(tǒng)(pSOS系統(tǒng))成功構(gòu)建和篩選了能有效干擾ALK1和ALK2表達(dá)的siRNA的腺病毒,在體內(nèi)體外水平驗(yàn)證了ALK1和ALK2對于BMP9誘導(dǎo)成骨的影響。在體外實(shí)驗(yàn)中,siALK1、siALK2可以有效抑制堿性磷酸酶、鈣鹽、熒光素酶的活性,而這三項(xiàng)是驗(yàn)證BMP9信號傳導(dǎo)和體外成骨的重要指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明,siALK1、siALK2抑制了BMP9的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),并抑制了BMP9誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,siALK1、siALK2有效抑制了裸鼠皮下包塊形成的大小,HE染色、Alcian blue染色的組織學(xué)評價(jià)說明包塊中骨基質(zhì)較少,軟骨基質(zhì)較多,表明其成骨過程不活躍且較滯后。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)說明siALK1和siALK2在動物水平抑制了BMP9的誘導(dǎo)成骨效應(yīng)。綜上,通過RNAi抑制ALK1、ALK2后的體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn),,鑒定和驗(yàn)證了ALK1、ALK2是參與BMP9信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和誘導(dǎo)成骨過程的Ⅰ型受體,發(fā)揮著承上啟下的重要作用,本研究將有助于進(jìn)一步闡明BMP9誘導(dǎo)成骨的機(jī)制。
[Abstract]:BMPs belongs to the TGF 尾 superfamily and was originally discovered as bone growth factor (BGF). At present, more than 20 BMPs have been isolated and identified. Bone morphogenetic protein (BMP) plays an important role in organ development and tissue regeneration. At present, the BMPs with osteogenic activity is mainly BMP2, 4, 7 and so on. In recent years, it has been found that BMP9 has a strong osteogenic ability, but because of its short time of attention, there is little understanding of the signal transduction process of BMP9 and the molecular mechanism of osteogenesis. BMPs transmembrane serine / threonine kinase receptor transduction signal. TGF- 尾 receptor is divided into type 鈪，

本文編號：1889917