本文選題：丙型肝炎病毒 + 模擬肽��； 參考：《中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院》2008年博士論文

【摘要】： 目前針對慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染尚無切實(shí)有效的辦法,以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫為主的HCV治療新疫苗,可通過重建感染者針對HCV的免疫應(yīng)答,調(diào)動(dòng)自身的免疫機(jī)能來清除病毒,減少非特異性炎癥對肝臟的損害的作用。有可能是將來治療慢性HCV感染的重要方法。本研究的課題是建立在我室長期對中國人群常見的HCV感染毒株(1b、2a)包膜蛋白E2高變區(qū)1(HVR1)序列變異規(guī)律的研究基礎(chǔ)上,根據(jù)保守位點(diǎn)合成的一系列長度不等的HCVHVR1模擬表位。之前的研究中,已經(jīng)驗(yàn)證了其中一個(gè)含有7個(gè)氨基酸的多肽(7P)能夠誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答。本課題主要是在此基礎(chǔ)上,針對人不同免疫細(xì)胞,研究7P對人不同免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響,并初步探討其機(jī)制。課題共分為三個(gè)部分。 (一)7P對正常人免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響 將7P與正常人的外周血單核細(xì)胞((PBMCs)共同孵育培養(yǎng),然后通過檢測免疫細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子分泌的改變來研究其免疫變化。結(jié)果表明,應(yīng)用7P刺激正常人PBMCs后,分泌IFN-γ的細(xì)胞頻數(shù)無論在NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞以及CD4~+CD8~-、CD4~-CD8~+T淋巴細(xì)胞均明顯增高;而分泌IL-4的細(xì)胞頻數(shù)則變化不明顯。分泌IL-10的細(xì)胞頻數(shù)在CD4+CD8-、CD4-CD8+T淋巴細(xì)胞表現(xiàn)為升高,在NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞表現(xiàn)為下降;而分泌TNF-α的細(xì)胞頻數(shù)在CD4+CD8-、CD4-CDS+T淋巴細(xì)胞表現(xiàn)為下降,在NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞表現(xiàn)為升高。 (二)7P刺激免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子改變的初步研究 首先將7P與正常人的外周血單核細(xì)胞((PBMCs)共同孵育培養(yǎng),然后檢測抗原呈遞細(xì)胞(DC)成熟及細(xì)胞因子變化情況。結(jié)果表明應(yīng)用7P刺激DC細(xì)胞時(shí),成熟細(xì)胞表型的mDC細(xì)胞的頻數(shù)明顯下降;成熟的細(xì)胞表型的pDC細(xì)胞的頻數(shù)未發(fā)生變化,代表mDC分泌功能的IL-12未能檢測出來。提示7P體外刺激有可能夠降低成熟mDC的表達(dá),未能促進(jìn)IL-12的分泌;但對pDC表達(dá)的影響尚不完全明確。其后采用細(xì)胞分選技術(shù),將抗原提呈細(xì)胞從PBMCs中分離出去,剩余的成分中包括免疫反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞T細(xì)胞和NK、NKT細(xì)胞,將其和7P共同孵育培養(yǎng)后檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色。結(jié)果表明,當(dāng)應(yīng)用磁珠分選之后其與7P共同孵育培養(yǎng),能夠得到與分選之前基本相同的結(jié)果。提示7P的這種對細(xì)胞因子分泌的調(diào)節(jié)可能是直接作用于效應(yīng)細(xì)胞,同時(shí)對于抗原提呈細(xì)胞(DC)也具有直接或間接的作用,而這種作用也可能間接地影響效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌。 (三)7P對HCV感染患者免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子影響的初步研究 將HCV感染患者的PBMCs和7P共同孵育培養(yǎng)后檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色,來分析7P對HCV感染患者的免疫細(xì)胞的作用。與第一部分結(jié)果相比,INF-γ在NK及NKT細(xì)胞,IL-10在CD4~+CD8~-T細(xì)胞及CD4~-CD8~+T細(xì)胞的變化是一致的;而TNF-α在NKT細(xì)胞出現(xiàn)了相反的變化,即下降。同時(shí),我們也注意到其他未發(fā)生具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義變化的部分,其變化的主要方向也往往和之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果趨向一致。
[Abstract]:At present, there is no effective and effective method for chronic hepatitis C virus (HCV) infection, in order to induce the organism to produce a new HCV vaccine based on cell immunization. It can be used to reconstruct the immune response to HCV by reconstructing the infected person and mobilize its own immune function to remove the virus and reduce the damage to the liver by non specific inflammation. It may be the future. An important method for the treatment of chronic HCV infection is based on the study of a series of HCVHVR1 mimic epitopes based on the conservative loci of a series of HCVHVR1 mimic epitopes synthesized by the conservative loci, based on a long term study on the variation of the hypervariable region 1 (HVR1) sequence of the envelope protein E2 of the common HCV infection virus (1b, 2a) in the Chinese population. One of these peptides (7P) which contains 7 amino acids can induce immune response in mice. On this basis, the subject is to study the effect of 7P on the secretion of cytokines from different immune cells in human, and the mechanism is preliminarily discussed. The subject is divided into three parts.
(1) effect of 7P on cytokines secreted by normal human immune cells
7P and normal human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were incubated together, and then the changes of cytokine secretion in the immune cells were detected to study their immune changes. The results showed that the frequency of IFN- gamma secreted by 7P stimulated the normal human PBMCs, both in NK cells, NKT cells, and CD4~+CD8~-, and CD4~-CD8~+T lymphocytes were all clear. The frequency of secreting IL-4 was not obvious. The frequency of secreting IL-10 was in CD4+CD8-, the expression of CD4-CD8+T lymphocyte was elevated and the NKT cells were decreased in NK cells, while the number of TNF- alpha cells in CD4+CD8-, CD4-CDS+T lymphocyte decreased, and NKT cells in NK cells were elevated.
(two) a preliminary study on the changes of cytokines secreted by 7P stimulated immune cells.
First, 7P was incubated with normal human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), and then the maturation of antigen presenting cell (DC) and the change of cytokine were detected. The results showed that the frequency of mDC cells in the mature cell phenotype decreased obviously when 7P was used to stimulate DC cells, and the frequency of the mature cell phenotype of pDC cells did not change, representing mDC. The secretory function of IL-12 was not detected. It was suggested that in vitro stimulation of 7P could reduce the expression of mature mDC and failed to promote the secretion of IL-12, but the effect on the expression of pDC was not completely clear. Then the cell sorting technique was used to separate the antigen presenting cells from PBMCs, and the remaining components included the immune response cell T finely. Cell and NK, NKT cells were incubated with 7P to detect cytokine staining in cells. The results showed that when the magnetic beads were reincubated with 7P, the same results were obtained before the separation, suggesting that the regulation of the secretion of cytokines from 7P may be directly acting on the effector cells and at the same time Antigen presenting cells (DC) also play a direct or indirect role, which may indirectly affect the secretion of cytokines in effector cells.
(three) effect of 7P on cytokines secreted by immune cells in HCV infected patients
HCV infected patients' PBMCs and 7P were incubated together to detect cytokine staining in cells to analyze the effect of 7P on the immune cells of patients with HCV infection. Compared with the results of the first part, INF- gamma in NK and NKT cells, IL-10 in CD4~+CD8~-T cells and CD4~-CD8~+T cells, and TNF- alpha appeared on the opposite side of the cells. At the same time, we also noticed that there were no other parts of statistical significance, and the main direction of the change tended to be consistent with the previous experimental results.

【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

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本文編號：1885242