發(fā)布時(shí)間：2018-05-13 02:09

  本文選題：韌帶組織工程 + 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞�。� 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2009年博士論文

【摘要】： [摘要]目的:探索bFGF和BMP12基因的聯(lián)合修飾使兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向韌帶成纖維細(xì)胞分化的方法。方法:(1)分離、培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)和韌帶成纖維細(xì)胞(Ligament Fibroblast, LF),通過細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)方法對(duì)兩種細(xì)胞進(jìn)行鑒別分析;(2)構(gòu)建攜帶人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)基因和人骨形態(tài)發(fā)生蛋白12(bone morphogenetic protein 12 , BMP12 )基因的重組腺病毒載體Ad.bFGF-eGFP及Ad.BMP12-eGFP,并進(jìn)行鑒定、擴(kuò)增;(3)將Ad.bFGF-eGFP和Ad.BMP12-eGFP聯(lián)合轉(zhuǎn)染兔BMSCs,觀察BMSCs表達(dá)、分泌bFGF、BMP12的情況,及轉(zhuǎn)染后對(duì)BMSCs增殖、分化及產(chǎn)生韌帶特異性細(xì)胞外基質(zhì)的影響。結(jié)果: (1)成功分離和培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和韌帶成纖維細(xì)胞,兩種細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)上相似,但在細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)、增殖特性、細(xì)胞表型、細(xì)胞分子生物學(xué)水平上均有顯著差異;(2)成功構(gòu)建和擴(kuò)增了攜帶人bFGF基因和BMP12基因的重組腺病毒載體Ad.bFGF-eGFP及Ad.BMP12-eGFP,其中含有eGFP熒光蛋白報(bào)告基因;(3) Ad.bFGF-eGFP和Ad.BMP12 -eGFP共轉(zhuǎn)染BMSCs后,bFGF蛋白及BMP12蛋白顯著表達(dá),且明顯促進(jìn)BMSCs增殖和向韌帶成纖維細(xì)胞表型分化,加強(qiáng)韌帶特異性細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生的能力并誘導(dǎo)韌帶特異性轉(zhuǎn)錄因子Scleraxis的表達(dá)。結(jié)論:經(jīng)Ad.bFGF-eGFP和Ad.BMP12-eGFP共同修飾改造后,兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能明顯向韌帶成纖維細(xì)胞表型分化,韌帶特異性細(xì)胞外基質(zhì)的能力顯著增強(qiáng),為組織工程韌帶的構(gòu)建提供了一種更優(yōu)良的種子細(xì)胞。
[Abstract]:Objective: to explore the method of combining bFGF and BMP12 gene to differentiate rabbit bone marrow mesenchymal stem cells into ligament fibroblasts. Method 1) Separation, Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs) and ligament fibroblast cells of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were cultured and identified by cytological and molecular biological methods to construct human basic fibroblast growth factor. The recombinant adenovirus vectors Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP of fibroblast growth factor-bFGF gene and human bone morphogenetic protein 12(bone morphogenetic protein 12 (BMP12) gene were identified. Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP were co-transfected into rabbit BMSCs to observe the expression of BMSCs and secretion of bFGF BMP12, and the effects on proliferation, differentiation and production of ligaments-specific extracellular matrix (ECM) of BMSCs after transfection. Results: rabbit bone marrow mesenchymal stem cells and ligament fibroblasts were isolated and cultured successfully. We successfully constructed and amplified the recombinant adenovirus vector Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP, which contain eGFP fluorescent protein reporter gene, and cotransfected with Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12 -eGFP into BMSCs. The recombinant adenovirus vector Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP were successfully constructed and amplified after cotransfection of BMSCs with Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12 -eGFP. Protein and BMP12 protein were significantly expressed, It also promoted the proliferation and differentiation of BMSCs into ligament fibroblasts, enhanced the ability of ligament specific extracellular matrix production and induced ligamental-specific transcription factor (Scleraxis) expression. Conclusion: after modification with Ad.bFGF-eGFP and Ad.BMP12-eGFP, rabbit bone marrow mesenchymal stem cells can differentiate into ligament fibroblast phenotype, and the ability of ligamenta-specific extracellular matrix is significantly enhanced. It provides a better seed cell for the construction of tissue engineering ligament.
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：1881174