本文選題：臍帶血造血干細(xì)胞 + 免疫逃逸��； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 目的:近年來有研究發(fā)現(xiàn)異基因臍帶血造血干細(xì)胞(UCB-HSCs)能夠在免疫功能正常的受者體內(nèi)長期存活。但是UCB-HSCs免疫逃逸能力的機制尚未闡明。而自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)在殺傷異基因造血干細(xì)胞中發(fā)揮了主要作用,因此,我們研究UCB-HSCs逃避NK細(xì)胞的殺傷的能力,并且探索這種免疫逃逸能力與其細(xì)胞表面表達(dá)NK細(xì)胞活化性和抑制性兩類受體的關(guān)系,以期找到UCB-HSCs免疫逃逸能力的機制。 方法:(1)利用免疫磁珠法分別從成人臍帶血、外周血及骨髓中分離UCB-HSCs、外周血造血干細(xì)胞(PB-HSCs)及骨髓造血干細(xì)胞(BM-HSCs);利用免疫磁珠法及流式細(xì)胞分選法從成人外周血中分離NK細(xì)胞;(2)以NK細(xì)胞和NK-92細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,并分別以UCB-HSCs為靶細(xì)胞,以PB-HSCs、BM-HSCs以及去除了造血干細(xì)胞的外周血單個核細(xì)胞(PB-MNCs)為對照靶細(xì)胞,用乳酸脫氫酶(LDH)釋放法分析效應(yīng)細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷率;以NK細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,并分別以UCB-HSCs、PB-HSCs、BM-HSCs為靶細(xì)胞,通過克隆增殖實驗分析效應(yīng)細(xì)胞對靶細(xì)胞增殖能力的抑制率;(3)利用流式細(xì)胞技術(shù)分析UCB-HSCs、PB-HSCs、BM-HSCs、PB-MNCs表面NK細(xì)胞活化性受體NKp30、NKp44、NKp46的配體以及NK細(xì)胞抑制性受體的配體HLA-G分子的表達(dá)情況;(4)利用融合蛋白及抗體阻斷NKp30、NKp44、NKp46以及HLA-G,觀察NK細(xì)胞對UCB-HSCs、PB-HSCs、BM-HSCs、PB-MNCs殺傷作用的變化。 結(jié)果:(1)UCB-HSCs具有逃避NK細(xì)胞殺傷的能力,與對照組細(xì)胞相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義;(2)UCB-HSCs、PB-HSCs、BM-HSCs表面低表達(dá)NK細(xì)胞活化性受體NKp30、NKp44、NKp46的配體,與PB-MNCs相比,差別有統(tǒng)計學(xué)意義;(3)UCB-HSCs表面高表達(dá)HLA-G分子,與PB-HSCs、BM-HSCs、PB-MNCs相比,差別有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論:(1)UCB-HSCs具有逃避NK細(xì)胞殺傷的能力;(2)UCB-HSCs表面低表達(dá)NK細(xì)胞活化性受體NKp30、NKp44、NKp46的配體可能是其逃逸NK細(xì)胞殺傷的機制之一;(3))UCB-HSCs表面高表達(dá)HLA-G分子是其逃逸NK細(xì)胞殺傷的主要機制。
[Abstract]:Objective: in recent years, it has been found that UCB-HSCsof allogeneic cord blood hematopoietic stem cells can survive for a long time in recipients with normal immune function. However, the mechanism of immune escape ability of UCB-HSCs has not been clarified. Natural killer cells (NK cells) play a major role in killing allogeneic hematopoietic stem cells. Therefore, we study the ability of UCB-HSCs to escape the killing of NK cells. In order to find out the mechanism of immune escape ability of UCB-HSCs, the relationship between the ability of immune escape and the expression of NK cell activative and inhibitory receptors on the cell surface was explored in order to find out the mechanism of immune escape ability of UCB-HSCs. Methods 1) using immunomagnetic bead method to separate umbilical cord blood from adults, UCB-HSCs, PB-HSCsand BM-HSCs2 were isolated from peripheral blood and bone marrow. NK cells were separated from adult peripheral blood by immunomagnetic bead method and flow cytometry.) NK cells and NK-92 cells were used as effector cells. Using UCB-HSCs as target cells, PB-HSCsBM-HSCs and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) without hematopoietic stem cells as control, the cytotoxicity of effector cells to target cells was analyzed by lactate dehydrogenase release assay, and NK cells were used as effector cells. UCB-HSCsPB-HSCsPM-HSCs were used as target cells. The inhibitory rate of effector cells on target cell proliferation was analyzed by clone proliferation assay. Flow cytometry was used to analyze the ligands of NK cell activating receptor NKp30 and NKp44NKp46 on the surface of PB-MNCs and the HLA-G molecule of NK cell inhibitory receptor. In order to observe the cytotoxicity of NK cells to UCB-HSCsPM-HSCsBM-HSCsPB-MNCs, NKp30 nkp44 and HLA-G4 were blocked by fusion protein and antibody against UCB-HSCsPM-HSCsPB-MNCs. Results the UCB-HSCs had the ability to evade NK cell killing. There was a significant difference between UCB-HSCsPB-HSCsPB-HM-HSCs and the low expression of NK cell activation receptor NKp30NKp44 / NKp46 on the surface of UCB-HSCs. Compared with PB-MNCs, the UCB-HSCs expressed high expression of HLA-G molecules on the surface of UCB-HSCs. The difference was statistically significant compared with that of PB-HSCsBM-HSCsN PB-MNCs. Conclusion UCB-HSCs have the ability to evade NK cell killing. The low expression of NK cell activating receptor NKp30 / NKp4nkp46 on the surface of UCB-HSCs may be one of the mechanisms of escaping NK cell killing by overexpression of HLA-G molecules on the surface of UCB-HSCs.
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

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本文編號：1880226