本文選題：CD配體(CDL) + 單純皰疹病毒型(HSV-)　； 參考：《醫(yī)學(xué)研究雜志》2015年10期

【摘要】：目的研究重組質(zhì)粒pc DNA3-Kan/CD40L輔佐HSV-2 DNA疫苗增強(qiáng)小鼠體液免疫和細(xì)胞免疫的作用效果,探討其作為HSV-2 DNA疫苗佐劑的潛力。方法 (1)構(gòu)建鼠CD40L基因的重組真核表達(dá)質(zhì)粒pc DNA3-Kan/CD40L。(2)體外細(xì)胞實驗:檢測重組質(zhì)粒p CD40L刺激小鼠外周血淋巴細(xì)胞增殖情況和脾細(xì)胞分泌IFN-γ的能力。(3)體內(nèi)動物實驗:48只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4個免疫組p K組、pg D組、pc CD40L+pg D組和p K+pg D組。小鼠后腿肌內(nèi)注射,共免疫2次,間隔3周。末次免疫3周后,每組隨機(jī)取4只小鼠進(jìn)行致死劑量攻毒實驗驗證疫苗的保護(hù)作用。ELISA檢測小鼠血清抗HSV-2 Ig G抗體水平和趨化因子RANTES;流式細(xì)胞術(shù)檢測全血中CD4+和CD8+T細(xì)胞百分率以及分泌IFN-γ和IL-4的T細(xì)胞的百分率;MTS法檢測小鼠脾臟T細(xì)胞的增殖能力。結(jié)果 (1)體外實驗結(jié)果:重組質(zhì)粒pc DNA3-Kan/CD40L對小鼠外周血淋巴細(xì)胞的增殖能力和刺激脾細(xì)胞分泌IFN-γ的能力均顯著大于空質(zhì)粒pc DNA3-Kan(P0.05)。(2)體內(nèi)實驗結(jié)果:小鼠血清抗HSV-2 Ig G水平、趨化因子RANTES、脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)和外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)和分泌IFN-γ的Th1細(xì)胞數(shù)均高于其他免疫組(P0.05)。pc DNA3-Kan/CD40L+pg D組預(yù)防小鼠感染HSV-2效果好于其他免疫組。結(jié)論 (1)重組質(zhì)粒pc DNA3-Kan/CD40L能夠誘導(dǎo)外周血淋巴細(xì)胞增殖并刺激脾細(xì)胞分泌IFN-γ具有作為疫苗佐劑的潛力。(2)pc DNA3-Kan/CD40L可以輔助HSV-2 DNA疫苗誘導(dǎo)BALB/c小鼠產(chǎn)生特異性抗HSV-2的體液免疫和細(xì)胞免疫,具備作為HSV-2 DNA疫苗免疫佐劑的能力。
[Abstract]:Objective to study the effect of recombinant plasmid PC DNA3-Kan/CD40L and HSV-2 DNA vaccine on enhancing humoral and cellular immunity in mice, and to explore its potential as adjuvant of HSV-2 DNA vaccine. Methods 1) Construction of recombinant eukaryotic expression plasmid of mouse CD40L gene pcDNA3-Kanr / CD40L.2) in vitro cell experiment: the proliferation of peripheral blood lymphocytes stimulated by recombinant plasmid p CD40L and the ability of spleen cells to secrete IFN- 緯 were detected. Female BALB/c mice were randomly divided into four immunization groups: PK group, PG D group, PC CD40L PG D group and p K PG D group. Mice were injected intramuscularly into hind leg and immunized twice at intervals of 3 weeks. Three weeks after the last immunization, Four mice in each group were randomly selected for lethal dose attack test to verify the protective effect of the vaccine. Elisa was used to detect the level of anti HSV-2 IgG antibody and chemokine RANTES, flow cytometry was used to detect the percentage of CD4 and CD8 T cells in whole blood, and Percentage of T cells secreting IFN- 緯 and IL-4. Results 1) the results of in vitro experiment: the proliferation ability of recombinant plasmid PC DNA3-Kan/CD40L on peripheral blood lymphocytes of mice and the ability of stimulating spleen cells to secrete IFN- 緯 were significantly higher than those of empty plasmid PC DNA3-Kann P0.05G.) the results of in vivo experiment showed that the level of anti HSV-2 Ig G in serum of mice was significantly higher than that of blank plasmid PC DNA3-Kann P0.05G. The chemokine RANTES, spleen lymphocyte stimulating index, the number of CD4 T cells and the number of Th1 cells secreting IFN- 緯 in peripheral blood were better than those in other immune groups in preventing HSV-2 infection in mice. Conclusion the recombinant plasmid PC DNA3-Kan/CD40L can induce the proliferation of peripheral blood lymphocytes and stimulate the secretion of IFN- 緯 by splenocytes. It has the potential to be a vaccine adjuvant. The recombinant pc DNA3-Kan/CD40L can assist HSV-2 DNA vaccine to induce specific humoral and cellular immunity against HSV-2 in BALB/c mice. Ability to act as an immune adjuvant for HSV-2 DNA vaccines.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院;
【基金】：浙江省自然科學(xué)基金資助項目(LY12H19009)
【分類號】：R392

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本文編號：1854800