本文選題：RNA干擾 + 細(xì)胞因子�。� 參考：《中南大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】： 嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、敗血癥(特別是革蘭氏陰性菌敗血癥)及各種類型的休克常導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatoryresponse syndrome,SIRS)發(fā)生。SIRS是臨床各科十分常見、平時(shí)及戰(zhàn)時(shí)導(dǎo)致死亡的危重病癥。雖然SIRS的發(fā)生機(jī)制迄今尚未完全闡明,但是LPS所致炎癥介質(zhì)的表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化,在其發(fā)病學(xué)中的重要作用已受到廣泛關(guān)注。 本研究應(yīng)用RNA干擾技術(shù),抑制RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞的HSP70基因表達(dá)。采用RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),大腸桿菌脂多糖(LPS)可誘導(dǎo)轉(zhuǎn)空載體的RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞(NEO)產(chǎn)生大量IL-1β和IL-6等細(xì)胞因子。而用過表達(dá)HSP70的RAW264.7細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)HSP70抑制了LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞因子表達(dá)。當(dāng)抑制HSP70基因的表達(dá)后,再進(jìn)行LPS刺激,則細(xì)胞因子表達(dá)增多,說明抑制HSP70的表達(dá)可促進(jìn)LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞因子表達(dá)。 由于NF-κB/IκB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化在LPS所致炎癥反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用,我們進(jìn)一步分析了HSP70表達(dá)抑制對(duì)LPS所致NF-κB信號(hào)通路活化的影響。通過Western blot等技術(shù)檢測(cè)NF-κB(p65)的核移位,我們發(fā)現(xiàn)抑制HSP70表達(dá)后,HSP70對(duì)NF-κB(p65)核移位(LPS刺激60 min)及LPS刺激20 min所致的IκB降解的抑制作用被解除。 由于IκBα的降解涉及IκBa的磷酸化,而IκBα的磷酸化是由IκB的激酶IKK以及相應(yīng)的磷酸酯酶相互影響、協(xié)同作用的結(jié)果。因此,我們進(jìn)一步分析了HSP70表達(dá)抑制對(duì)細(xì)胞內(nèi)磷酸酯酶2A活性的影響。在不用LPS刺激和LPS刺激30min后,RNA干擾組細(xì)胞內(nèi)的磷酸酯酶2A活性低于非干擾對(duì)照組細(xì)胞。說明抑制HSP70的表達(dá)可降低細(xì)胞內(nèi)的磷酸酯酶2A的活性。 綜上所述,HSP70可能通過增高磷酸酯酶2A活性,從而抑制LPS所致IκB的磷酸化及降解,減少NF-κB的核移位,從而抑制NF-κB活化以及細(xì)胞因子的表達(dá)。
[Abstract]:Severe trauma, burn, septicemia (especially Gram-negative bacillus septicemia) and various types of shock often lead to systemic inflammatoryresponse syndromes. Sirs is very common in clinical departments. Although the pathogenesis of SIRS has not been fully elucidated, the expression of inflammatory mediators induced by LPS and the activation of intracellular signal transduction pathway have attracted much attention. In this study, RNA interference technique was used to inhibit the expression of HSP70 gene in macrophages of RAW264.7 mice. It was found by RT-PCR detection that E. coli lipopolysaccharide (LPS) could induce the production of a large number of cytokines such as IL-1 尾 and IL-6 in macrophages of RAW264.7 mice with empty vector. However, RAW264.7 cells with overexpression of HSP70 showed that HSP70 inhibited the expression of cytokines induced by LPS. When the expression of HSP70 gene was inhibited and then stimulated by LPS, the expression of cytokines increased, indicating that inhibiting the expression of HSP70 could promote the expression of cytokines induced by LPS. Since the activation of NF- 魏 B / I 魏 B signal transduction pathway plays an important role in the inflammatory response induced by LPS, we further analyzed the effect of the inhibition of HSP70 expression on the activation of NF- 魏 B signaling pathway induced by LPS. Western blot and other techniques were used to detect the nuclear translocation of NF- 魏 B p65). We found that the inhibitory effect of HSP70 on the degradation of I 魏 B induced by NF- 魏 B p65) and 20 min induced by LPS was removed after inhibiting the expression of HSP70. The degradation of I 魏 B 偽 involves the phosphorylation of I 魏 Ba, and the phosphorylation of I 魏 B 偽 is the result of the interaction of I 魏 B kinase IKK and the corresponding phosphatase. Therefore, we further analyzed the effect of inhibition of HSP70 expression on intracellular phosphatase 2A activity. The activity of phosphatase 2A in LPS interference group was lower than that in non-interference control group after 30min was not stimulated by LPS or LPS. The results showed that inhibiting the expression of HSP70 could decrease the activity of phosphatase 2A. In conclusion, HSP70 may inhibit the phosphorylation and degradation of I 魏 B induced by LPS, decrease the nuclear translocation of NF- 魏 B, and inhibit the activation of NF- 魏 B and the expression of cytokines by increasing the activity of phosphatase 2A.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1854389