本文選題：溫度依賴 + 絲氨酸蛋白酶　； 參考：《中國科學技術(shù)大學》2010年碩士論文

【摘要】：1.肺炎鏈球菌中溫度依賴的蛋白HtrA的結(jié)構(gòu)研究 HtrA (high-temperature requirement A)是一種溫度依賴的熱休克蛋白,它通過感應外界溫度的變化來調(diào)節(jié)兩種功能的轉(zhuǎn)化,分別是:正常溫度時行使分子伴侶功能,以及溫度升高時的絲氨酸蛋白酶活性。這種功能上的精確轉(zhuǎn)化使得HtrA在維持蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及降解熱變形的蛋白以維持細胞的穩(wěn)定性過程中起關(guān)鍵作用。它被認為是細菌周質(zhì)間隙中蛋白質(zhì)質(zhì)量調(diào)控體系中的關(guān)鍵蛋白。研究證實HtrA對于幫助細菌和細胞抵抗高溫損傷都有重要作用。HtrA家族蛋白廣泛分布在從古細菌到人類的許多的組織中。近期的生物化學和結(jié)構(gòu)學研究證實,不管是細菌抵抗一系列的環(huán)境壓力還是蛋白質(zhì)質(zhì)量調(diào)控,都是通過HtrA家族蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的精確變化來完成的。然而,其精確的蛋白質(zhì)質(zhì)量調(diào)控方式還有待研究。為了更好的解析HtrA家族蛋白的作用作用方式,需要進一步對其進行生物化學和結(jié)構(gòu)學研究,幫助我們對其分子功能以及其特殊的分子調(diào)控機制有更好的理解。我們已經(jīng)得到了肺炎鏈球菌的基因組DNA,經(jīng)過PCR擴增出一個htrA全長基因和絲氨酸蛋白酶功能域片段,隨后分別插入p28質(zhì)粒進行表達載體的構(gòu)建。其中全長蛋白經(jīng)過表達優(yōu)化與純化后,可以得到大量的可溶狀態(tài)。蛋白質(zhì)初篩后得到晶體,目前我們嘗試優(yōu)化了各種條件,但是沒有優(yōu)化到合適于X射線衍射的蛋白晶體。 2.肺炎鏈球菌中假定的蛋白酶成熟蛋白PpmA的結(jié)構(gòu)研究 在過去的20年中,肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶積累了大量的研究數(shù)據(jù),分別在生理,細胞生化,分子動力學以及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究中取得了相當多的進展。盡管肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶催化的順反異構(gòu)作用本身并不復雜,但是但目前為止對于詳細的蛋白催化機理仍沒有得到完全的解釋。我們研究的PpmA (Potential proteinase maturation protein A)屬于被廣泛研究的肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶的小細胞蛋白家族。我們已經(jīng)得到了肺炎鏈球菌的基因組DNA,進行PCR擴增出一個ppmA全長基因和一個功能域片段,隨后分別插入p28質(zhì)粒進行表達載體的構(gòu)建。其中PpmA全長蛋白經(jīng)過表達優(yōu)化與純化后,可以得到大量的可溶狀態(tài),但是晶體篩選后沒有得到蛋白晶體。
[Abstract]:1. Study on the structure of Temperature-dependent protein HtrA in Streptococcus pneumoniae HtrA high-temperature requirement A is a temperature-dependent heat shock protein, which regulates the transformation of two functions by inducting the change of external temperature, namely, the function of chaperone at normal temperature and the activity of serine protease at elevated temperature. This precise functional transformation makes HtrA play a key role in maintaining the stability of proteins and the degradation of thermodeformed proteins to maintain the stability of cells. It is considered to be a key protein in the protein quality control system in the periplasmic space of bacteria. It has been confirmed that HtrA plays an important role in helping bacteria and cells resist high temperature damage. HtrA family proteins are widely distributed in many tissues from ancient bacteria to humans. Recent biochemistry and structural studies have confirmed that both bacterial resistance to a series of environmental pressures and protein quality regulation are accomplished by precise changes in the structure and function of HtrA family proteins. However, the precise regulation of protein quality remains to be studied. In order to elucidate the action of HtrA family proteins, it is necessary to further study their biochemistry and structure to help us understand their molecular functions and their special molecular regulation mechanisms. We have obtained the genomic DNA of Streptococcus pneumoniae and amplified a full-length htrA gene and a functional domain of serine protease by PCR. Then we inserted p28 plasmid to construct the expression vector. After expression optimization and purification, a large number of soluble state can be obtained. At present, we have tried to optimize various conditions, but we have not optimized the protein crystal suitable for X-ray diffraction. 2. Study on the structure of putative protease mature protein PpmA in Streptococcus pneumoniae In the past 20 years, a large amount of research data have been accumulated on the peptide proline cis-trans isomerase, and considerable progress has been made in the studies of physiology, cell biochemistry, molecular dynamics and protein structure, respectively. Although the cis-trans isomerization catalyzed by peptidyl prolyl cis-trans isomerase is not complicated, the detailed mechanism of protein catalysis has not been fully explained. Our PpmA potential proteinase maturation protein A belongs to the small cell protein family of peptidyl prolyl cis-trans isomerase. We have obtained the genomic DNA of Streptococcus pneumoniae, amplified a full-length ppmA gene and a functional domain fragment by PCR, then inserted p28 plasmid to construct the expression vector. After expression optimization and purification of PpmA full-length protein, a large number of soluble state could be obtained, but no protein crystal was obtained after crystal screening.
【學位授予單位】：中國科學技術(shù)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R378

【共引文獻】

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本文編號：1847781