發(fā)布時間：2018-05-02 02:18

  本文選題：腫瘤 + 表皮生長因子受體　； 參考：《復(fù)旦大學》2008年碩士論文

【摘要】： 表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)是原癌基因c-erbB基因編碼的170kDa跨膜糖蛋白,具有胞內(nèi)酪氨酸激酶活性。由于在多種上皮惡性腫瘤中,EGFR都發(fā)生一定程度的突變或異常高表達,且與腫瘤患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。因此,EGFR是一種腫瘤的標志性抗原,可將其作為腫瘤治療的靶點之一。 本研究首次將雞源EGFR(cEGFR)胞外Ⅱ-Ⅲ區(qū)作為抗原,免疫球蛋白IgG-Fc片段作為疫苗載體分子與cEGFR片段融合,構(gòu)建了重組DNA疫苗和蛋白質(zhì)疫苗,評價這兩種疫苗在小鼠Lewis肺癌模型中的抗腫瘤主動免疫療效,探討其抗腫瘤作用機制。我們用重疊延伸PCR法擴增獲得cEGFR-Fc融合基因,克隆至pVAX1質(zhì)粒構(gòu)建重組DNA疫苗pVAX1-cEGFR-Fc,同時,構(gòu)建載有溶葡球菌酶信號肽序列的pET-28a(+)-S公用分泌型大腸桿菌表達載體,將cEGFR-Fc融合基因克隆至該載體,并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達的融合蛋白cEGFR-Fc經(jīng)Protein A親和層析純化后作為蛋白疫苗。48只C57BL/6J小鼠隨機平分為4組:單用DNA疫苗組、單用蛋白質(zhì)疫苗組、DNA疫苗和蛋白疫苗聯(lián)合免疫組及生理鹽水對照組,各組小鼠免疫4次后接種Lewis肺癌細胞,觀測腫瘤生長情況及小鼠生存狀態(tài)及毒副反應(yīng)。19天后脫頸椎處死小鼠,剝離腫瘤稱重并計算抑瘤率。Western blot法檢測小鼠血清中是否產(chǎn)生了抗EGFR抗體,ELISA法檢測抗體滴度。分離免疫小鼠脾臟細胞,檢測淋巴細胞對靶細胞A431的細胞毒性作用。 本研究成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pVAX1-cEGFR-Fc和pET28a(+)-S-cEGFR-Fc,其中,pET28a(+)-S-cEGFR-Fc轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,經(jīng)誘導(dǎo)表達在發(fā)酵上清液中獲得了30～35%分泌蛋白,經(jīng)Protein A親和層析純化,得到純度達85%以上的重組融合蛋白。動物實驗結(jié)果表明,三疫苗組小鼠腫瘤明顯小于生理鹽水對照組(P＜0.01),聯(lián)合免疫組小鼠腫瘤亦明顯小于DNA疫苗組、蛋白疫苗組(P＜0.01)。DNA疫苗組、蛋白質(zhì)疫苗組和聯(lián)合免疫組抑瘤率分別為37%、49%和63%。三疫苗組小鼠血清中均有抗EGFR抗體產(chǎn)生,其中聯(lián)合免疫組抗體滴度最高,蛋白質(zhì)疫苗組次之,DNA疫苗組最低。免疫后的小鼠脾臟細胞對EGFR受體高表達的A431細胞具有殺傷作用,效靶比為10:1時具有最大殺傷率。 本研究證實,異種同源EGFR胞外Ⅱ-Ⅲ區(qū)重組DNA疫苗和蛋白質(zhì)疫苗能打破機體對自身EGFR分子的免疫耐受,產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng),對小鼠Lewis肺癌有明顯的抑制作用。兩種疫苗的聯(lián)合使用可進一步加強抑瘤作用。
[Abstract]:Epidermal growth factor receptor (EGFR) is a transmembrane 170kDa glycoprotein encoded by proto-oncogene c-erbB gene and has intracellular tyrosine kinase activity. Because EGFR has a certain degree of mutation or abnormal overexpression in many kinds of epithelial malignant tumors, it is closely related to the poor prognosis of tumor patients. Therefore, EGFR is an iconic antigen of tumor, which can be used as a target of tumor therapy. In this study, the recombinant DNA vaccine and protein vaccine were constructed by fusion of the extracellular region 鈪，

本文編號：1831975