本文選題：表皮干細(xì)胞 + 細(xì)胞培養(yǎng)�。� 參考：《暨南大學(xué)》2008年碩士論文

【摘要】： 研究目的:完善表皮干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)及鑒定的技術(shù)方法,建立皮膚角朊細(xì)胞與表皮干細(xì)胞總蛋白的雙向電泳圖譜,并初步分析二者表達(dá)蛋白質(zhì)的差異,為進(jìn)一步研究體外調(diào)控表皮干細(xì)胞的增殖分化提供線索。 研究方法:采用酶消化法獲得單個表皮細(xì)胞懸液,Ⅳ型膠原快速貼壁法分選表皮干細(xì)胞,以復(fù)合DMEM為培養(yǎng)基培養(yǎng),免疫組化法檢測CK19和P63,流式細(xì)胞儀檢測β1整合素,CD71和細(xì)胞周期來鑒定目的細(xì)胞,通過細(xì)胞生長曲線觀察其增殖能力;利用雙向電泳技術(shù)(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)建立皮膚角朊細(xì)胞與表皮干細(xì)胞的雙向電泳圖譜,Image Master 2D Elite 5.0軟件分析兩種細(xì)胞的差異表達(dá)蛋白點(diǎn)。 結(jié)果:Ⅳ型膠原篩選細(xì)胞在復(fù)合DMEM培養(yǎng)基中生長良好,CK19和P63陽性表達(dá),β1整合(CD29)表達(dá)率為98.57%,CD71表達(dá)率為9.05%,94.99%細(xì)胞處于增殖期,細(xì)胞呈現(xiàn)指數(shù)增長,以上表明分選細(xì)胞是表皮干細(xì)胞;兩種細(xì)胞的2-DE蛋白表達(dá)譜具有良好的重復(fù)性和可比性,皮膚角朊細(xì)胞與表皮干細(xì)胞的電泳圖譜平均蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)分別為982±18和930±15,匹配點(diǎn)數(shù)為850±13和798±11,匹配率是86.56%和85.81%,兩種細(xì)胞蛋白質(zhì)間匹配點(diǎn)數(shù)是886±8,配率是76.98%。找到差異蛋白點(diǎn)11個,其中只在表皮干細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)的有8個,只在皮膚角朊細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)的有3個。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)采用多種方法證實(shí)貼壁細(xì)胞為表皮干細(xì)胞,利用雙向電泳法得到了分辨率較高且重復(fù)性好的皮膚角朊細(xì)胞與表皮干細(xì)胞蛋白質(zhì)組圖譜,二者存在一定的差異,這對獲取組織工程皮膚的種子細(xì)胞及探索體外調(diào)控表皮干細(xì)胞的增殖分化機(jī)制具有重要意義。
[Abstract]:Objective: to improve the technique of isolation, culture and identification of epidermal stem cells in vitro, to establish a two-dimensional electrophoresis map of the total proteins of skin keratinocytes and epidermal stem cells, and to analyze the differences between the two proteins. It provides clues for further study on the regulation of proliferation and differentiation of epidermal stem cells in vitro. Methods: single epidermal cell suspension was obtained by enzyme digestion, epidermal stem cells were separated by type 鈪，

本文編號：1825183