本文選題：羊膜 + 間充質干細胞　； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學院》2008年博士論文

【摘要】：目的： 1.分離、培養(yǎng)和鑒定人羊膜間充質干細胞,觀察其生物學特性,探討其應用于神經(jīng)再生治療的可行性。 2.通過體外誘導分化實驗,探討人羊膜間充質干細胞向視網(wǎng)膜細胞分化的可能性。 3.對人羊膜間充質干細胞體外誘導前后鈉離子通道的電生理特性進行研究,探討其在向視網(wǎng)膜神經(jīng)元樣細胞分化過程中細胞功能的變化情況。 方法： 1.經(jīng)產(chǎn)婦知情同意,無菌采集健康足月剖腹產(chǎn)胎盤6份。采用機械法將羊膜從胎盤組織上剝離,PBS沖洗后剪成碎片,加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液37℃消化10mmin,共4次,收集細胞,用DMEM/F12/10%FBS/10ng/mL EGF培養(yǎng)基進行培養(yǎng)和純化。 2.倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)；記錄生長曲線；用流式細胞儀鑒定傳1-3代人羊膜間充質干細胞的表面標志CD45、CD90(Thy1)和CD49d；免疫熒光細胞化學法和流式細胞儀檢測神經(jīng)干／祖細胞標記蛋白Nestin、Vimentin和Musash-1的表達。 3.用2%DMSO/200μmol/L BHA/10ng/mL bFGF誘導第3代人羊膜間充質干細胞,用免疫熒光細胞化學法和流式細胞儀檢測誘導前后神經(jīng)譜系標記蛋白Nestin、MAP2、NSE、GFAP和光感受器細胞標記蛋白Rhodopsin的表達；實時熒光定量PCR檢測誘導0、3和7天Nestin、Rhodopsin和SCN2A mRNA的表達；通過全細胞膜片鉗技術記錄誘導前后細胞表面鈉離子電流。 結果： 1.人羊膜間充質干細胞為貼壁細胞,表現(xiàn)為成纖維細胞樣,可在體外大量擴增并純化；表型分析結果顯示：CD90(Thyl)、CD49d陽性表達,CD45陰性表達；人羊膜間充質干細胞表達神經(jīng)干／祖細胞的標記蛋白,流式細胞儀顯示從傳1代至4代,Nestin陽性和Vimentin陽性細胞百分數(shù)均在80-90%,而Musashi-1陽性細胞百分數(shù)則維持在95%以上。 2.誘導分化后,大部分細胞變成具有細長突起的神經(jīng)元樣形態(tài)；流式細胞儀檢測顯示：誘導7d后Nestin陽性細胞從81.3%下降至24.9%,而MAP2陽性細胞從15.7%上升至91.3%,Rhodopsin陽性細胞從10.3%上升至97.1%,NSE陽性細胞從20.9%上升至94.3%,GFAP陽性細胞從1.4%上升至18.0%,經(jīng)統(tǒng)計學分析有顯著性差異(P0.05)；實時熒光定量PCR檢測顯示：誘導3天后,Nestin的mRNA迅速下降為原來的0.19倍,7天后下降為0.15倍；誘導3天后,Rhodopsin的mRNA上升為原來的1.62倍,7天后上升為2.06倍；誘導3天后,SCN2A的mRNA上升為原來的1.24倍,7天后上升為1.83倍；人羊膜間充質干細胞在誘導前未記錄到瞬時鈉內向電流(0/13),誘導后部分細胞受去極化刺激時記錄到鈉離子內向電流(4/12),細胞表面鈉離子電流出現(xiàn)率的差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.039)。 結論： 1.人羊膜間充質干細胞可成功在體外培養(yǎng)、擴增和純化,生物學性狀穩(wěn)定,含有豐富的神經(jīng)前體細胞,可以作為一種優(yōu)良的神經(jīng)再生醫(yī)學領域中組織工程、細胞治療和基因治療的種子細胞來源。 2.人羊膜間充質干細胞能夠在體外誘導分化為表達視網(wǎng)膜光感受器細胞的標記蛋白、具有可興奮性的神經(jīng)元樣細胞。
[Abstract]:Objective:
1. isolation, culture and identification of human amniotic mesenchymal stem cells, observe its biological characteristics, and explore its feasibility in the treatment of nerve regeneration.
2. to explore the possibility of human amniotic mesenchymal stem cells differentiating into retinal cells through in vitro induced differentiation experiments.
3. the electrophysiological characteristics of the sodium channel of amniotic mesenchymal stem cells were studied before and after induction in vitro, and the changes of cell function during the differentiation of the retinal neuron like cells were investigated.
Method錛，

本文編號：1784870