本文選題：河蝦過敏原組分 + 單克隆抗體�。� 參考：《暨南大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： [目的]鑒定河蝦的過敏原組分,對(duì)主要過敏原進(jìn)行分離純化并分析其致敏性強(qiáng)弱；制備河蝦主要過敏原的單克隆抗體；分析河蝦不同過敏原及海蝦、河蝦、蟹過敏原之間的交叉反應(yīng)和共同表位；以期為蝦過敏癥臨床診斷和蝦過敏原疫苗設(shè)計(jì)提供基礎(chǔ)。 [方法]用磷酸鹽緩沖液制備河蝦粗提液,經(jīng)硫酸銨沉淀、G-50凝膠層析和陰離子交換層析等方法純化其主要過敏原組分；應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗原肌球蛋白的單克隆抗體；間接ELISA,間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定腹水型單克隆抗體的效價(jià)和親和力；運(yùn)用間接ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA和Western Blot等方法分析河蝦不同過敏原組分及河蝦、海蝦、蟹過敏原之間的交叉反應(yīng)和共同表位。 [結(jié)果]分離純化獲得21kD、36kD和80kD 3種河蝦過敏原,純度分別為97.5%,94.2%和85.3%,與患者血清IgE的反應(yīng)率分別為43.3%,76.7%,36.7%。應(yīng)用雜交瘤技術(shù)共獲得1D11、2C4、3C4、4A3、4E3、4A5B11、4A5C10、4A5D5等8株單克隆抗體,其中1D11,3C4,4E33株單抗效價(jià)為1：64000,1：128000,1：6400。1D11、3C4和4E33株單抗能抑制蝦過敏患者血清與蝦過敏源的結(jié)合；1D11、2C4,4A5B11和4A5D54株單抗能與河蝦其它的過敏原組分發(fā)生特異性反應(yīng)；間接ELISA抑制結(jié)果顯示,河蝦、海蝦和蟹的過敏原組分之間存在明顯的相互抑制反應(yīng)。 [結(jié)論]河蝦中至少存在9種過敏原組分,21kD、36kD、80kD等3種蛋白組分為河蝦的主要過敏原組分,其中以36kD過敏原組分致敏率和致敏性最強(qiáng)。獲得8株36kD特異性單克隆抗體。河蝦21kD、36kD的過敏原組分之間具有共同過敏原表位,21kD、36kD和80kD過敏原之間具有共同表位；河蝦、海蝦和蟹的過敏原之間具有交叉反應(yīng),河蝦36kD的原肌球蛋白與海蝦的原肌球蛋白及蟹的26kD、36kD和70kD的蛋白組分具有共同表位。
[Abstract]:[objective] to identify the allergen components of prawn, to isolate and purify the main allergens and to analyze their sensitivities; to prepare monoclonal antibodies against main allergens of prawns; to analyze the different allergens of prawns and prawns and prawns. The cross reaction and common epitopes among the allergens in crabs are expected to provide a basis for the clinical diagnosis of shrimp allergen and the design of shrimp allergen vaccine. [methods] the crude extract of prawn was prepared from phosphate buffer solution and purified by ammonium sulfate precipitation G-50 gel chromatography and anion exchange chromatography, and the monoclonal antibody against myosin antigen was prepared by hybridoma technique. Indirect Elisa, indirect competitive ELISA was used to determine the titer and affinity of monoclonal antibodies against ascites, and indirect Elisa, competitive ELISA and Western Blot were used to analyze the cross reaction and common epitopes among different allergens of prawn, prawn and crab. [results] three species of shrimp allergens, 21kD36kD and 80kD, were isolated and purified, with the purity of 97.55.2% and 85.3%, respectively, and the reaction rate with serum IgE was 43.37.776.776.76.7. Using hybridoma technique, 8 monoclonal antibodies, such as 1D11C4C4C4C4A4A4A4A3A3A5B114A5C10A5D5 and so on, were obtained. The titer of 1D113C4C4E33 strain McAbs was 1: 64000: 1: 128000: 1 6400.1D113C4 and 4E33 strain McAb could inhibit the binding of the sera of shrimp allergens to shrimp allergens (1D112C4C4A5B11 and 4A5D54 strains), and indirect ELISA inhibition showed that, There was a significant reciprocal inhibition reaction between the allergen components of shrimp and crab. [conclusion] there are at least 9 kinds of allergens and 3 protein components, including 21kD ~ 36kD ~ (80kD), which are the main allergen components of prawns, among which 36kD allergen is the most sensitive and sensitive component. Eight 36kD specific monoclonal antibodies were obtained. There was a common epitope between 21kD 36kD allergen and 80kD allergen among the allergen components of 21 KD, and the cross reaction was found among the allergens of prawn, prawn and crab. The promyosin of 36kD has a common epitope with that of prawn and the protein component of 26kD / 36kD and 70kD of crab.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1776627