發(fā)布時間：2018-04-17 10:20

  本文選題：白細胞介素15 + 克隆��； 參考：《吉林大學》2014年碩士論文

【摘要】：白細胞介素15（Interleukin-15,IL-15）是一種多能的細胞因子，能夠促進淋巴細胞和NK細胞的增殖且對免疫系統中各種免疫細胞都具有重要的調節(jié)作用。IL-15表現出與IL-2在抗腫瘤、免疫調節(jié)等方面相似的生物學作用而備受關注。 本實驗利用RT-PCR技術從人外周血單個核細胞中克隆了人IL-15cDNA部分序列，并以其為模板分別擴增出IL-15編碼序列（coding sequence，CDS）以及引入CD8α跨膜肽的IL-15編碼序列，利用基因組技術構建分泌型人IL-15克隆載體pMD T-IL-15、表達載體pVITRO2-IL-15以及膜結合型IL-15克隆載體pMD T-mbIL-15、表達載體pVITRO2-mbIL-15。分別將表達載體轉染K562細胞，檢測分泌型IL-15在K562細胞中表達情況，并通過細胞流式技術鑒定，以期獲得能穩(wěn)定表達的膜結合IL-15的K562細胞株。對進一步研究其在免疫系統中的重要作用，并為其在腫瘤基因治療、免疫治療等奠定了基礎。 結果表明，本實驗成功克隆了人IL-15CDS序列，，在此基礎上正確構建了重組人IL-15分泌型真核表達載體pVITRO2-IL-15和重組人IL-15跨模型真核表達載體pVITRO2-mbIL-15。最后通過將重組真核表達載體分別轉染K562細胞，檢測了分泌型IL-15在K5625細胞中的表達，并獲得穩(wěn)定表達膜結合IL-15蛋白的重組K562細胞株。
[Abstract]:Interleukin 15 Interleukin-15 (IL-15) is a multipotent cytokine that promotes the proliferation of lymphocytes and NK cells and plays an important role in regulating all immune cells in the immune system. IL-15 is associated with IL-2 in anti-tumor activity.Immunomodulation and other similar biological functions have attracted much attention.In this study, we cloned human IL-15cDNA partial sequence from human peripheral blood mononuclear cells by RT-PCR technique, and used it as template to amplify the coding sequence of IL-15 coding sequence sequence sequence and the IL-15 coding sequence that introduced CD8 偽 transmembrane peptide.The secretory human IL-15 clone vector pMD T-IL-15, the expression vector pVITRO2-IL-15 and the membrane-binding IL-15 clone vector pMD T-mbIL-15 were constructed by genomic technique. The expression vector pVITRO2-mbIL-15 was constructed.The expression vectors were transfected into K562 cells, and the expression of secretory IL-15 in K562 cells was detected. The expression of secretory IL-15 in K562 cells was identified by flow cytometry.It can be used to further study its important role in the immune system and lay a foundation for its application in tumor gene therapy and immunotherapy.The results showed that the human IL-15CDS sequence was cloned successfully, and the recombinant human IL-15 secreted eukaryotic expression vector pVITRO2-IL-15 and the recombinant human IL-15 transmodel eukaryotic expression vector pVITRO2-mbIL-15 were constructed.Finally, the recombinant eukaryotic expression vector was transfected into K562 cells, and the expression of secretory IL-15 in K5625 cells was detected, and a recombinant K562 cell line with stable expression of membrane binding IL-15 protein was obtained.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392

【參考文獻】

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本文編號：1763189