本文選題：腸致病性大腸埃希菌 + eae基因��； 參考：《長春理工大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】： 根據(jù)腸致病性大腸埃希菌(EPEC)eae基因序列,設(shè)計引物,并通過PCR方法從腸致病性大腸埃希菌(EPEC)總DNA中擴增eae基因的高度保守序列,獲得約1800bp的eae基因片段。 通過TA克隆技術(shù),將PCR產(chǎn)物克隆至pMD18-T Vector中,轉(zhuǎn)化至受體菌DH5α中,通過質(zhì)粒提取、限制性內(nèi)切酶酶切、PCR、序列測定等方法鑒定構(gòu)建出重組陽性克隆質(zhì)粒pMD18T-eae。經(jīng)DNASTAR軟件分析核苷酸和氨基酸序列,結(jié)果顯示與GenBank上EPEC eae基因比較,核苷酸同源性均在99.8%以上,氨基酸同源性均在99.5%以上。 應(yīng)用基因體外重組技術(shù),將回收純化的EPEC eae基因融合入大腸桿菌-乳酸菌穿梭表達載體pW425t中,通過質(zhì)粒提取、限制性內(nèi)切酶酶切、PCR等方法鑒定表明構(gòu)建出重組陽性克隆質(zhì)粒pW425t-eae,并在DH5α內(nèi)表達此eae蛋白,通過SDS-PAGE檢測,pW425t-eae在重組大腸桿菌DH5α內(nèi)表達eae蛋白。
[Abstract]:According to the sequence of EPEC-eae gene of Escherichia coli, primer was designed, and the highly conserved sequence of eae gene was amplified from the total DNA of Escherichia coli by PCR method, and the eae gene fragment of about 1800bp was obtained.The PCR product was cloned into pMD18-T Vector and transformed into DH5 偽. The recombinant plasmid pMD18T-eaee was identified by plasmid extraction, restriction endonuclease digestion and sequencing.The nucleotide and amino acid sequences were analyzed by DNASTAR software. The results showed that the nucleotide homology was over 99.8% and the amino acid homology was over 99.5% compared with the EPEC eae gene on GenBank.The purified EPEC eae gene was fused into Escherichia coli-lactic acid bacteria shuttle expression vector pW425t by in vitro recombination technique.The recombinant plasmid pW425t-eaewas constructed and expressed in DH5 偽 by restriction endonuclease digestion. The recombinant plasmid pW425t-eae was detected by SDS-PAGE to express eae protein in DH5 偽 of recombinant Escherichia coli.
【學(xué)位授予單位】：長春理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R378

【參考文獻】

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本文編號：1750483