本文選題：無機(jī)鹽 + 人工腦脊液��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：廣州管圓線蟲(Angiostrongylus cantonensis, AC)是引起人體嗜酸性粒細(xì)胞增多性腦膜炎或腦膜腦炎(亦稱為廣州管圓線蟲病)的重要病原體。一般而言,人類生食或半生食帶有AC感染期幼蟲(三期幼蟲,L3)的水產(chǎn)或蔬果而感染廣州管圓線蟲病。廣州管圓線蟲病散發(fā)流行于熱帶與亞熱帶地區(qū),主要的病例報道集中在南太平洋諸島、東南亞、中國等國家及地區(qū)。直至2011年,中國(包括港臺地區(qū))已有超過1000例廣州管圓線蟲病病例報告。近年來,隨著該病疫源地的擴(kuò)大、人們膳食結(jié)構(gòu)的改變,而且人類的各種文化交流的日益頻繁,該病的發(fā)病人數(shù)持續(xù)上升,甚至連非疫源地的地區(qū)(如歐洲,北美地區(qū))也出現(xiàn)零星病例報告。廣州管圓線蟲病已給人類健康、公共衛(wèi)生和社會安定帶來嚴(yán)重危害,引起了政府部門的高度重視和社會的廣泛關(guān)注。然而,作為一種新發(fā)傳染病,廣州管圓線蟲病許多病原生物學(xué)特性和機(jī)制還不清楚,廣州管圓線蟲病的防制工作面臨極大的挑戰(zhàn)。 在線蟲家族中,已發(fā)現(xiàn)多種線蟲有不同程度的化學(xué)趨向性。作為線蟲模式生物的秀麗隱桿線蟲,在化學(xué)趨避活動觀察及其神經(jīng)元參與通路和作用已經(jīng)達(dá)到一定的深度。Bargmann認(rèn)為神經(jīng)元趨化作用在秀麗隱桿線蟲的趨化活動與外部環(huán)境感知、覓食、生長發(fā)育、凋亡、活動導(dǎo)航等行為有關(guān)。經(jīng)過數(shù)百種化學(xué)物質(zhì)的篩選,Ward總結(jié)出5類秀麗隱桿線蟲的吸引劑：(一)環(huán)核苷酸：cAMP, cGMP等；(二)陰離子：Cl-,Br-,I-等；(三)陽離子：Na+,Li+,K+,Mg2+等：(四)OH-；(五)其他：賴氨酸,組氨酸,半胱氨酸等。Tobata-Kudo等證實在NaCl梯度濃度平板上鼠類圓線蟲L3幼蟲具有吸引作用的梯度范圍為20mmM-230mM,其中80mM區(qū)域尤為適應(yīng)。Koga通過對鼠類圓線蟲幼蟲的化學(xué)趨化性及大鼠體內(nèi)移行的研究,發(fā)現(xiàn)幼蟲在到達(dá)小腸發(fā)育為成蟲之前必然會途經(jīng)腦部,并在體外實驗中見幼蟲對Na+以及血清白蛋白具有趨向性。Forbes等發(fā)現(xiàn)低濃度的NaCl可吸引糞類圓線蟲感染期幼蟲,而高濃度的NaCl對糞類圓線蟲又有驅(qū)避作用。Adachi等發(fā)現(xiàn)秀麗隱桿線蟲對氯化鈉或異戊醇均有趨向性,且化學(xué)趨向性隨著溫度的增加而增強(qiáng)。Kusaba等發(fā)現(xiàn)許多動物(包括哺乳類,爬行類,魚類以及無脊椎動物)的血清或血液對彭亨布魯絲蟲(Brugia pahangi)感染期幼蟲具有顯著的趨化活性,趨化指數(shù)(C.I.)達(dá)0.562～0.960(經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化),而生理鹽水對照組的C.I.僅為0.045(經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化)。Liao等證實秀麗隱桿線蟲對稀釋至1000倍后的丙酮、2-丁酮、硝基甲烷、環(huán)己酮、RDX、烏洛托品等6種化合物有趨向性,而對稀釋至1000倍后的H202、高氯酸鉀、硫和硝化鉀等4種化合物有驅(qū)避性；其中H202稀釋100倍后仍具有驅(qū)避作用。 AC感染大鼠等適宜宿主后,L3穿過腸壁經(jīng)血腦屏障移行入腦,經(jīng)過一定發(fā)育過程后,將再次經(jīng)血腦屏障移行至肺動脈發(fā)育為成蟲；AC L3感染人、小鼠等非適宜宿主后,幼蟲穿過腸壁經(jīng)血腦屏障移行入腦并停留在腦內(nèi)�？梢�,幼蟲進(jìn)入宿主腦內(nèi)是其生活史中不可缺少的過程。什么因素驅(qū)使了廣州管圓線蟲幼蟲的腸-腦-肺趨向性移行?研究發(fā)現(xiàn)秀麗隱桿線蟲對氯化鈉或異戊醇均有趨向性。低濃度的氯化鈉可引誘糞類圓線蟲感染性幼蟲,而高濃度的氯化鈉對幼蟲有驅(qū)避作用。在相似領(lǐng)域中,尚未見有關(guān)廣州管圓線蟲幼蟲化學(xué)趨向活動的文獻(xiàn)或者實驗報道。 研究目的： 本研究以不同濃度倍數(shù)(1、3、5、10倍)人工腦脊液以及不同濃度(20mM、50mM、100mM和150mM)的無機(jī)鹽與葡萄糖對廣州管圓線蟲三期幼蟲進(jìn)行體外趨化實驗,并在體視顯微鏡下觀察對AC L3幼蟲的趨化效果。并根據(jù)上述不同溶液在趨化平板中溶液區(qū)和對照區(qū)的AC L3數(shù)進(jìn)行人工收集并通過統(tǒng)計分析,最終總結(jié)出不同濃度倍數(shù)人工腦脊液以及不同濃度的無機(jī)鹽與葡萄糖對AC L3的趨向活動一般影響規(guī)律。 研究方法： 1.廣州管圓線蟲感染宿主模型建立：取洗凈的綠葉蔬菜2-3葉置于搪瓷方盤內(nèi),完成感染的白玉蝸牛(Achatina fulica)置于蔬菜上。盤內(nèi)需留置少量蒸餾水,水位以剛剛浸沒蔬菜為宜,同時加蓋以防白玉蝸牛上爬而影響AC幼蟲收獲效果。白玉蝸牛室溫下自由活動2～4h后,收集方盤內(nèi)所有液體和粘液以及對方盤內(nèi)蔬菜表面稍作沖洗的蒸餾水,2500r/min離心5min,去上清；用蒸餾水洗滌沉淀,2500r/min離心5min,重復(fù)2次。取沉渣解剖鏡下分離3期幼蟲。取活力良好的3期幼蟲,解剖鏡下計數(shù)后分裝。所獲幼蟲用三蒸水洗滌兩次。以其中每只100條廣州管圓線蟲感染期幼蟲感染大鼠,成功建立廣州管圓線蟲感染大鼠動物模型并建立實驗室AC感染循環(huán)。 2.趨向?qū)嶒灥膶嵤喝‰x心后重懸的ACL320～30μ1置趨化平皿的中心,室溫避光孵化8小時后,在解剖鏡下計數(shù)試驗區(qū)與對照區(qū)內(nèi)的幼蟲(緩沖區(qū)的幼蟲不計入)。為避免操作誤差,每種濃度的溶液平行做3個趨化平皿。為便于鏡下準(zhǔn)確計數(shù),于平皿底部放置一張小方格紙片,每個平板幼蟲計數(shù)三次,取其平均值。 3.趨化指數(shù)(chemotaxis index, C.I.)的計算：趨化指數(shù)是一項描述線蟲在不同外在環(huán)境因素的影響下趨勢活動程度的常用衡量指標(biāo)。若C.I.∈(0,1],表示相較于三蒸水,溶液區(qū)該濃度溶液對AC L3具有吸引作用；若C.I.∈[-1,0),則表示相較于三蒸水,溶液區(qū)該濃度溶液對AC L3具有趨避作用；若C.I.=0,表示AC L3在作隨機(jī)自由活動,溶液區(qū)和三蒸水區(qū)均無特異性作用。并將C.I.根據(jù)下列4個方面進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較： 1)不同濃度倍數(shù)人工腦脊液的趨向活動比較； 2)同一濃度不同無機(jī)鹽與葡萄糖的趨向活動比較； 3)同一無機(jī)鹽與葡萄糖溶劑不同濃度的趨向活動比較； 4)按離子作用區(qū)分的趨向活動比較。 4.本實驗數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示。SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件包進(jìn)行各組數(shù)據(jù)的醫(yī)學(xué)統(tǒng)計。溶液組和三蒸水組的原始實驗數(shù)據(jù)首先進(jìn)行方差齊性檢驗,若兩組差值服從正態(tài)分布(P0.05),則采用配對t檢驗方法進(jìn)行統(tǒng)計分析；若兩組差值不服從正態(tài)分布(P≤0.05),則采用Wilcoxon符號秩和檢驗方法進(jìn)行統(tǒng)計分析。顯著性水平為P≤0.05。 結(jié)果： 1.5倍ACSF溶液對AC L3有吸引作用。 2.按濃度區(qū)分：在1.0cm范圍內(nèi),20mMKC1、Na2HPO4、NaHCO3、MgCl2等溶液對AC L3有吸引作用；50mM NaCl溶液對AC L3有吸引作用；100mM KCl溶液對AC L3有驅(qū)避作用,同濃度的CaCl2溶液對AC L3有吸引作用；150mMNaCl溶液對AC L3有驅(qū)避作用,該濃度的KC1、NaHCO3、MgCl2溶液對AC L3有吸引作用。 3.按溶劑區(qū)分：在1.0cm范圍內(nèi),KCl溶液在20mM、150mM濃度時有吸引作用,在100mM濃度時有驅(qū)避作用；NaCl溶液在50mM濃度時有吸引作用,150mM濃度時有驅(qū)避作用；Na2HPO4溶液在20mmM濃度時有吸引作用；NaHCO3溶液在20mM、150mM濃度時有吸引作用；CaCl2溶液在100mM濃度時有吸引作用；MgCl2溶液在20mmM、150mM濃度時有吸引作用。 4.按離子作用區(qū)分：在1.0cm范圍內(nèi),K+離子溶液在20mM、150mM濃度時有吸引作用,在100mM濃度時有驅(qū)避作用；Na+離子溶液在40mM、50mM濃度時有吸引作用；Cl-離子溶液在200mM濃度時有吸引作用。 結(jié)論： 1. ACSF溶液對廣州管圓線蟲三期幼蟲具有一定的趨化作用,并且與ACSF溶液的濃度相關(guān)。 2. NaCl、Na2HPO4、KCl等無機(jī)鹽對廣州管圓線蟲三期幼蟲具有一定的趨化作用,并且與無機(jī)鹽的濃度相關(guān)。 3.Na+離子對廣州管圓線蟲三期幼蟲具有一定的趨化作用,并且與Na+離子的濃度相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R383.19

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本文編號：1735980