本文選題：FcγRⅡB　切入點(diǎn)：慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)載體　出處：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2015年08期

【摘要】：目的構(gòu)建大鼠FcγRⅡB慢病毒誘導(dǎo)表達(dá)載體,觀察其對(duì)巨噬細(xì)胞的作用。方法以大鼠肝臟mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄獲得FcγRⅡB基因片段,并將其克隆入慢病毒表達(dá)質(zhì)粒四環(huán)素(Tet)順式應(yīng)答元件(TRE),構(gòu)建TRE-FcγRⅡB慢病毒表達(dá)重組質(zhì)粒。將慢病毒表達(dá)重組質(zhì)粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒調(diào)節(jié)質(zhì)粒Tet分別與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,分別包裝表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒,測(cè)定表達(dá)病毒和可誘導(dǎo)病毒感染滴度。表達(dá)病毒和調(diào)節(jié)病毒共感染巨噬細(xì)胞,經(jīng)梯度濃度強(qiáng)力霉素(DOX)誘導(dǎo),免疫熒光技術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞FcγRⅡB表達(dá),實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)FcγRⅡB mRNA表達(dá),Western blot法檢測(cè)FcγRⅡB蛋白表達(dá)。經(jīng)不同濃度DOX誘導(dǎo)后的腹腔巨噬細(xì)胞分別檢測(cè)吞噬和趨化功能。結(jié)果重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序鑒定正確。表達(dá)和調(diào)節(jié)病毒滴度均達(dá)到106轉(zhuǎn)導(dǎo)單位/m L。巨噬細(xì)胞被病毒感染后經(jīng)DOX誘導(dǎo)表達(dá)FcγRⅡB,免疫熒光染色結(jié)果顯示,FcγRⅡB能夠在巨噬細(xì)胞表達(dá);實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot結(jié)果顯示FcγRⅡB表達(dá)水平與DOX濃度呈正相關(guān)。巨噬細(xì)胞的吞噬和趨化功能與FcγRⅡB表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞FcγRⅡB的表達(dá)可抑制其吞噬和趨化功能。
[Abstract]:Aim to construct rat FC 緯 R 鈪，

本文編號(hào)：1712749