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與SNSRH相關(guān)的主韌帶精細(xì)顯微組織結(jié)構(gòu)的定性及定量研究

發(fā)布時(shí)間:2018-04-04 17:52

  本文選題:Ⅲ型子宮切除術(shù) 切入點(diǎn):主韌帶 出處:《南方醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文


【摘要】: 隨著宮頸癌患者的日趨年輕化及術(shù)后生存率的提高,改善患者術(shù)后生活質(zhì)量已成為宮頸癌治療的發(fā)展趨勢(shì)。經(jīng)典的宮頸癌根治術(shù)歷經(jīng)百余年的歷史目前向保留器官生理功能的階段發(fā)展,系統(tǒng)保留盆腔自主神經(jīng)的根治性子宮切除術(shù)(Systematic Nerve-sparing radical hysterectomy,SNSRH)應(yīng)勢(shì)而生。SNSRH手術(shù)的經(jīng)典術(shù)式是“Tokyo術(shù)式”,即“東京術(shù)式”,該術(shù)式術(shù)中保留神經(jīng)的關(guān)鍵是對(duì)主韌帶(Cardinal ligament,CL)的處理。由于Tokyo術(shù)式手術(shù)步驟繁瑣,操作難度大,部分學(xué)者隨后對(duì)其進(jìn)行了改良。但不論是經(jīng)典的Tokyo術(shù)式,還是其改良術(shù)式,術(shù)中主韌帶中神經(jīng)組織的保留主要依靠觸覺、經(jīng)驗(yàn)和解剖學(xué)標(biāo)志,缺乏更詳細(xì)的理論依據(jù)。主韌帶組織學(xué)結(jié)構(gòu)方面的研究,主要集中于蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)染色(簡(jiǎn)稱HE染色)的研究,雖然HE染色能看出組織的基本結(jié)構(gòu),但對(duì)于組織的進(jìn)一步分類不能區(qū)分。有學(xué)者對(duì)主韌帶中的神經(jīng)組織進(jìn)行定性研究,但得出的結(jié)論相反。關(guān)于神經(jīng)的定量研究,只有極少數(shù)學(xué)者進(jìn)行研究,多局限于半定量水平,而且結(jié)果存在矛盾和爭(zhēng)議。至于主韌帶中重要組成成份如血管、淋巴管的定性定量研究未見文獻(xiàn)報(bào)道。然而,神經(jīng)、血管在主韌帶中分布的位置對(duì)SNSRH手術(shù)至關(guān)重要。因此,目前對(duì)主韌帶具有重要意義的組織結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)研究不夠深入,缺乏針對(duì)性的應(yīng)用指標(biāo),對(duì)臨床中存在的問題難以起到指導(dǎo)作用。鑒于此種情況,本課題收集Ⅲ型子宮切除術(shù)后的離體主韌帶標(biāo)本,詳細(xì)進(jìn)行標(biāo)本切分,采用HE染色、免疫組織化學(xué)染色及特殊染色方法進(jìn)行定性研究,以期闡明主韌帶的精細(xì)顯微組織結(jié)構(gòu)特征。同時(shí),利用生物體視學(xué)方法對(duì)主韌帶各部、各段中的重要組成成份進(jìn)行定量測(cè)定,提供量化數(shù)值。從而在微觀水平,為臨床提供主韌帶的組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 本研究分兩部分進(jìn)行,具體如下: 第一部分主韌帶精細(xì)顯微組織結(jié)構(gòu)的定性研究 【目的】 研究主韌帶的精細(xì)顯微組織結(jié)構(gòu)特征。 【方法】 收集13例Ⅲ型子宮切除術(shù)后切除的主韌帶標(biāo)本22條,每條主韌帶標(biāo)本自宮頸附著處由里向外以1cm間距切分為3段,命名為近段、中段和遠(yuǎn)段,近段和中段各1cm,其余為遠(yuǎn)段,共66塊組織。每塊組織經(jīng)10%福爾馬林固定、常規(guī)石蠟包埋、切片4張,分別運(yùn)用HE染色、免疫組織化學(xué)染色、特殊染色方法對(duì)主韌帶各組織成份進(jìn)行定性研究。 【結(jié)果】 1.HE染色結(jié)果:可見大量纖維結(jié)締組織、脂肪組織;豐富的血管(包括中、小、微動(dòng)靜脈)、神經(jīng)組織;散在淋巴管;偶見淋巴組織和淋巴結(jié)。 2.免疫組織化學(xué)染色和特殊染色結(jié)果: 1)纖維結(jié)締組織:Masson氏三色染色法的改良法顯示膠原纖維呈天藍(lán)色至深藍(lán)色,肌纖維呈紅色;Unna氏地衣紅染色技術(shù)顯示彈力纖維為棕紅色。主韌帶中膠原纖維含量較多,彈力纖維和肌纖維很少,呈散在分布。 2)神經(jīng)組織:S-100抗體特異標(biāo)記神經(jīng),證實(shí)主韌帶中富含神經(jīng)。改良的Loyes氏特殊染色顯示神經(jīng)髓鞘陰性,提示主韌帶內(nèi)的神經(jīng)為自主神經(jīng)。進(jìn)一步用免疫組織化學(xué)染色區(qū)分神經(jīng)類型,TH抗體特異標(biāo)記交感神經(jīng)結(jié)果陽性,VIP抗體特異標(biāo)記副交感神經(jīng)結(jié)果陽性,證明主韌帶中的自主神經(jīng)包括交感神經(jīng)和副交感神經(jīng),還包括交感神經(jīng)節(jié)和副交感神經(jīng)節(jié)。主韌帶中的神經(jīng)較為豐富,呈散在分布,有一定的規(guī)律,相對(duì)集中于主韌帶的下半部。 3)血管:特異標(biāo)記血管的CD34抗體免疫組化染色證實(shí)主韌帶中存在動(dòng)靜脈,醛品紅—高碘酸Schiff氏雙染色改良法顯示動(dòng)脈為玫瑰紅色。主韌帶中的動(dòng)靜脈均較豐富,可以看到中小微動(dòng)靜脈,內(nèi)含大量紅細(xì)胞。分布相對(duì)集中于主韌帶的上半部。 4)淋巴管:特異標(biāo)記淋巴管抗體D2-40免疫組化染色結(jié)果陽性,淋巴管呈散在分布,無明顯規(guī)律,包括粗細(xì)不等的各級(jí)分支。 【小結(jié)】 主韌帶中含大量纖維結(jié)締組織,包括膠原纖維、彈力纖維和肌纖維,以膠原纖維為主;含大量脂肪組織;富含神經(jīng)組織,為自主神經(jīng),包括交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)以及交感神經(jīng)節(jié)和副交感神經(jīng)節(jié),分布相對(duì)集中于主韌帶的下半部;富含各級(jí)血管,主要集中于主韌帶的上半部。淋巴管分布分散,包括各級(jí)淋巴管;偶見淋巴組織和淋巴結(jié)。 第二部分子宮主韌帶重要組成成份的生物體視學(xué)定量測(cè)定 【目的】 研究主韌帶內(nèi)的交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)、血管及淋巴管的含量及其分布情況。 【方法】 1.主韌帶分部:為方便描述和比較,將主韌帶分為上半部和下半部。撈片時(shí)主韌帶切片上緣(近心側(cè))均與玻片的上緣吻合。將玻片置于OLYMPUS BX51型號(hào)顯微鏡系統(tǒng),在顯微鏡下找出玻片的上下緣,按照顯微鏡上的刻度值,于正中部位,將主韌帶分為上半部和下半部。與前面取材的近、中、遠(yuǎn)分段共形成6個(gè)區(qū)間。 2.圖像采集:玻片置于OLYMPUS BX 51型號(hào)顯微鏡系統(tǒng),在低倍鏡下選擇視野后轉(zhuǎn)20倍下微調(diào)至圖像清晰,再調(diào)至電腦顯示的圖像清晰后隨機(jī)選擇視野取圖,每張玻片上下半部各隨機(jī)取10個(gè)視野,共取20個(gè)視野。22條主韌帶交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)、血管和淋巴管各有玻片66張,因此,各指標(biāo)分別采集圖像1320張,共采集圖像5280張。 2.Imagepro圖像分析:將采集的圖像輸入計(jì)算機(jī),用Imagepro醫(yī)學(xué)圖像分析軟件測(cè)試陽性觀測(cè)指標(biāo)面積,同時(shí)測(cè)每幅照片面積。 3.體積密度計(jì)算:利用生物體視學(xué)公式,體積密度(Vv)=觀測(cè)陽性指標(biāo)的測(cè)試面積/參照空間面積,計(jì)算出各陽性指標(biāo)的體積密度。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示,主韌帶上下兩半部各指標(biāo)數(shù)據(jù)比較采用Independent-Samples T檢驗(yàn)。主韌帶上半部和下半部的近、中、遠(yuǎn)段以及主韌帶近、中、遠(yuǎn)段間指標(biāo)數(shù)據(jù)比較采用One-way ANOVA方差分析。 【結(jié)果】 (一)主韌帶內(nèi)的神經(jīng)體積密度(Vv): 1.主韌帶內(nèi)的交感神經(jīng)體積密度(Vv): 1)主韌帶內(nèi)的交感神經(jīng)總體積密度為(0.0608±0.0620) 2)上半部(0.0326+0.0431)和下半部(0.0890±0.0826),下半部交感神經(jīng)體積密度高于上半部(t=-2.182,P=0.039)。 3)近段(0.0637±0.0524)、中段(0.0886±0.0775)和遠(yuǎn)段(0.1098±0.1115),三段間交感神經(jīng)體積密度無顯著性差異(F=0.980,P=0.385)。 4)上半部近段(0.0315±0.0452)和下半部近段(0.0617±0.0417),交感神經(jīng)體積密度無顯著性差異(t=1.766,P=0.09); 上半部中段(0.0297±0.0577)和下半部中段(0.0968±0.0765),下半部交感神經(jīng)體積密度高于上半部(t=-2.523,P=0.019); 上半部遠(yuǎn)段(0.0367±0.0399)和下半部遠(yuǎn)段(0.1087+0.1519),交感神經(jīng)體積密度無顯著性差異(t=1.654,P=0.111); 5)上半部近、中和遠(yuǎn)三段間交感神經(jīng)體積密度無顯著性差異(F=0.090,P=0.914); 下半部近、中和遠(yuǎn)三段間交感神經(jīng)體積密度無顯著性差異(F=1.169,P=0.322)。 2.主韌帶內(nèi)的副交感神經(jīng)體積密度(Vv): 1)主韌帶內(nèi)副交感神經(jīng)總體積密度為(0.0225±0.0126). 2)上半部(0.0092±0.0081)和下半部(0.0578±0.0419),下半部副交感神經(jīng)體積密度高于上半部(t=-3.935,P=0.002)。 3)近段(0.0349±0.0305)、中段(0.0357±0.0334)和遠(yuǎn)段(0.0640±0.0392),三段間副交感神經(jīng)體積密度無顯著性差異(F=2.756,P=0.078)。 4)上半部近段(0.0091±0.0124)和下半部近段(0.0448±0.0347),下半部副交感神經(jīng)體積密度高于上半部(t=-3.350,P=0.005); 上半部中段(0.0048±0.0070)和下半部中段(0.0504±0.0482),下半部副交感神經(jīng)體積密度高于上半部(t=-3.246,P=0.007); 上半部遠(yuǎn)段(0.0105±0.0132)和下半部遠(yuǎn)段(0.0815±0.0631),下半部副交感神經(jīng)體積密度高于上半部(t=-3.811,P=0.002); 5)上半部近、中、遠(yuǎn)三段間副交感神經(jīng)體積密度無顯著性差異(F=1.239,P=0.203); 下半部近、中、遠(yuǎn)三段間副交感神經(jīng)體積密度有顯著性差異(F=3.724,P=0.035):下半部遠(yuǎn)段副交感神經(jīng)體積密度高于近段(P=0.018);下半部遠(yuǎn)段副交感神經(jīng)體積密度高于中段(P=0.035)。 3.主韌帶內(nèi)交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)的比例為2.8:1。 (二)主韌帶內(nèi)的血管體積密度(Vv): 1)主韌帶內(nèi)血管總體積密度(0.1424±0.1030)。 2)上半部(0.2153±0.0992)和下半部(0.0696±0.0275);上半部血管體積密度高于下半部(t=5.104,P=0.000)。 3)近段(0.1729±0.1100)、中段(0.1843±0.1119)和遠(yuǎn)段(0.1767±0.0770),三段間血管體積密度無顯著性差異(F=0.043,P=0.958)。 4)上半部近段(0.2289±0.1837)和下半部近段(0.0538±0.0399),上半部血管積密度高于下半部(t=3.358,P=0.005); 上半部中段(0.2137±0.1504)和下半部中段(0.0765±0.0441),上半部血管體積密度高于下半部(t=3.157,P=0.007); 上半部遠(yuǎn)段(0.2034±0.0756)和下半部遠(yuǎn)段(0.0784±0.0443),上半部血管體積密度高于下半部(t=5.144,P=0.000); 5)上半部近、中、遠(yuǎn)三段間血管體積密度無顯著性差異(F=0.103,P=0.902): 下半部近、中、遠(yuǎn)三段組間血管體積密度無顯著性差異(F=1.327,P=0.278)。 (三)主韌帶內(nèi)的淋巴管體積密度(Vv): 1)主韌帶內(nèi)的淋巴管總體積密度(0.0050±0.0049)。 2)上半部(0.0067±0.0056)和下半部(0.0033±0.0035),兩部間淋巴管體積密度無顯著性差異(t=1.798,P=0.089)。 3)近段(0.0054±0.0062)、中段(0.0044±0.0054)和遠(yuǎn)段(0.0077±0.0085),三段間淋巴管體積密度無顯著性差異(F=0.762,P=0.475)。 4)上半部近段(0.0065±0.0084)和下半部近段(0.0030±0.0043),淋巴管體積密度無顯著性差異(t=1.282,P=0.213); 上半部中段(0.0044±0.0063)和下半部中段(0.0031±0.0042),淋巴管體積密度無顯著性差異(t=0.606,P=0.550); 上半部遠(yuǎn)段(0.0093±0.0019)和下半部遠(yuǎn)段(0.0039±0.0060),淋巴管體積密度無顯著性差異(t=1.404,P=0.174); 5)上半部近、中、遠(yuǎn)三段間淋巴管體積密度無顯著性差異(F=0.842,P=0.440); 下半部近、中、遠(yuǎn)三段間淋巴管體積密度無顯著性差異(F=0.116,P=0.891)。 【小結(jié)】 (一)自主神經(jīng)的分布: 1.交感神經(jīng)的分布:①下半部>上半部(P=0.039); ②中段:下半部>上半部(P=0.019); ③下半部由近及遠(yuǎn)有增高趨勢(shì)。 2.副交感神經(jīng)的分布:①下半部>上半部(P=0.002); ②呈下半部遠(yuǎn)段最多,中段次之,近段最少分布規(guī)律。 3.交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)的比例為2.8:1。 (二)血管的分布: ①上半部>下半部(P=0.000); ②中小細(xì)血管均有; ③近段、中段、遠(yuǎn)段分布無規(guī)律。 (三)淋巴管的分布: 存在于主韌帶各部各段,分布無規(guī)律。 (四)我們的研究結(jié)果支持將主韌帶分為血管部和神經(jīng)部。 (五)根據(jù)我們的研究結(jié)果證實(shí)主韌帶切除越長(zhǎng),切除的神經(jīng)越多。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2009
【分類號(hào)】:R737.33;R322

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):1711035

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