本文選題：凋亡胸腺細(xì)胞　切入點(diǎn)：樹突狀細(xì)胞　出處：《華中科技大學(xué)》2009年碩士論文

【摘要】：已證實(shí)凋亡細(xì)胞具有免疫調(diào)節(jié)作用,凋亡小體可以調(diào)節(jié)同種異體器官移植免疫排斥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)凋亡細(xì)胞首先被吞噬細(xì)胞(巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞為主)吞噬,然后通過(guò)釋放一些免疫抑制細(xì)胞因子(如TGF-β、IL-10、MIF等)或通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞接觸的方式直接誘導(dǎo)同種反應(yīng)性T細(xì)胞失活來(lái)減輕移植物的免疫排斥反應(yīng),延長(zhǎng)移植物存活。為明確在吞噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞以及吞噬后誘導(dǎo)免疫耐受中巨噬細(xì)胞和DC各自起多大作用,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)巨噬細(xì)胞和DC的吞噬能力,以及吞噬凋亡細(xì)胞后各吞噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)能力以闡明凋亡細(xì)胞誘導(dǎo)移植免疫耐受的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。 目的:探討供者來(lái)源的凋亡胸腺細(xì)胞輸注誘導(dǎo)移植免疫耐受機(jī)制,為臨床防治移植物排斥和自身免疫病提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:用地塞米松20μM誘導(dǎo)小鼠(BALB/c, H-2~d)胸腺細(xì)胞凋亡;在560C水浴1小時(shí)獲得小鼠(BALB/c, H-2~d)壞死胸腺細(xì)胞。分別將活的、壞死的、凋亡的BALB/c小鼠胸腺細(xì)胞2×10~7個(gè)/只,尾靜脈輸注到C57BL/6小鼠體內(nèi),7天后將BALB/c小鼠的皮膚移植給C57BL/6小鼠,觀察各組移植皮膚的存活時(shí)間。通過(guò)尾靜脈分別將經(jīng)熒光物質(zhì)PKH67或CFSE標(biāo)記后活的、壞死的、凋亡的BALB/c小鼠胸腺細(xì)胞輸注到C57BL/6小鼠體內(nèi),在不同時(shí)間點(diǎn)處死小鼠,分離脾臟制備單個(gè)細(xì)胞,用熒光素標(biāo)記抗體(APC-CD11c,PE-B220,PE-F4/80)與脾細(xì)胞孵育,用流式細(xì)胞術(shù)分析C57BL/6小鼠脾臟內(nèi)pDC(CD11c~+B220~+)、DC(CD11c~+ B220~-)、巨噬細(xì)胞(F4/80~+)對(duì)活的、壞死的、凋亡的胸腺細(xì)胞的吞噬能力;混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)觀察分別吞噬了同系或同種異基因凋亡胸腺細(xì)胞后C57BL/6小鼠的DC和巨噬細(xì)胞對(duì)BALB/c小鼠BMDC刺激C57BL/6小鼠T細(xì)胞增殖(CFSE標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)分析法)的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。 結(jié)果: 1.用Annexin-v/PI染色檢測(cè),地塞米松誘導(dǎo)BALB/c小鼠胸腺細(xì)胞早期凋亡可達(dá)61.9% ;用水浴加熱法誘導(dǎo)的壞死基本上PI完全陽(yáng)性。 2.分別輸注供者壞死的、活的或凋亡胸腺細(xì)胞對(duì)皮膚移植物存活時(shí)間的影響:凋亡細(xì)胞處理組平均存活時(shí)間是15.889±2.088天,活細(xì)胞處理組平均存活時(shí)間是9.000±1.323天,壞細(xì)胞處理組為7.333±1.323天,PBS對(duì)照組的平均存活時(shí)間是10.111±1.616天。凋亡細(xì)胞組皮膚生存時(shí)間比其它各組都長(zhǎng)(n=9, p0.01),壞細(xì)胞組皮膚生存時(shí)間短于PBS組(n=9,p0.01)。 3.分析不同時(shí)間點(diǎn)C57BL/6小鼠脾臟內(nèi)吞噬細(xì)胞對(duì)BALB/c小鼠的凋亡胸腺細(xì)胞的吞噬情況:結(jié)果表明在輸注凋亡胸腺細(xì)胞后60min時(shí),DC和巨噬細(xì)胞的吞噬效率都是最高,而且在觀察所有時(shí)間點(diǎn)CD11clow B220- DC(imDC)細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬效率要明顯高于CD11chigh B220- DC (mDC)細(xì)胞和CD11c+B220+ DC ( pDC )的細(xì)胞; F4/80low M?對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬效率要比F4/80high M?高。凋亡細(xì)胞輸注24小時(shí)后脾臟內(nèi)檢測(cè)不出凋亡細(xì)胞存在。C57BL/6小鼠脾臟內(nèi)吞噬細(xì)胞對(duì)活的、壞死的和凋亡的BALB/c小鼠的胸腺細(xì)胞的吞噬差異情況:在活胸腺細(xì)胞尾靜脈輸注時(shí),脾臟內(nèi)吞噬細(xì)胞的吞噬率都低于凋亡細(xì)胞組,可能由于活細(xì)胞在體內(nèi)是不會(huì)被吞噬的,只有少量在輸注前就已經(jīng)存在的自然凋亡細(xì)胞被吞噬細(xì)胞所吞噬;DC對(duì)凋亡胸腺細(xì)胞的吞噬效率也高于壞死胸腺細(xì)胞;F4/80low M?對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬率為21.3%,對(duì)壞死細(xì)胞的吞噬率為1.1%,F4/80high M?對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬率為9.5%,對(duì)壞死細(xì)胞的吞噬率為12.1%,表現(xiàn)出相反的結(jié)果。 4. DC和巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞后,免疫調(diào)節(jié)能力的差異:通過(guò)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)吞噬了凋亡細(xì)胞的巨噬細(xì)胞和DC都能明顯抑制同種細(xì)胞刺激的T細(xì)胞增殖反應(yīng),且比沒(méi)加入調(diào)節(jié)細(xì)胞組和沒(méi)有吞噬凋亡的巨噬細(xì)胞和DC組的抑制能力強(qiáng);吞噬細(xì)胞吞噬了同種異基因凋亡胸腺細(xì)胞對(duì)增殖的抑制能力比其吞噬同系凋亡細(xì)胞后的抑制能力強(qiáng),說(shuō)明凋亡細(xì)胞在體內(nèi)吞噬所產(chǎn)生的免疫抑制效應(yīng)是有抗原特異性的。 結(jié)論: 1.供著來(lái)源的凋亡胸腺細(xì)胞可以明顯延長(zhǎng)皮膚移植物存活時(shí)間,而活細(xì)胞和壞死胸腺細(xì)胞的過(guò)繼輸注卻沒(méi)有這樣的效果。 2.活細(xì)胞在體內(nèi)是不能被吞噬的,而壞死細(xì)胞的吞噬卻能誘發(fā)炎癥反應(yīng),加速皮膚移植物的排斥。在對(duì)脾臟內(nèi)具體細(xì)胞的吞噬能力的研究發(fā)現(xiàn),DC中的CD11clow B220+(imDC)的吞噬能力是所有DC亞類中最強(qiáng)的, F4/80low的巨噬細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬效率高于F4/80high的巨噬細(xì)胞,而對(duì)壞死細(xì)胞的吞噬效率兩者卻相反。 3.混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)表明,吞噬了凋亡細(xì)胞的巨噬細(xì)胞和DC都能明顯抑制同種細(xì)胞刺激的T細(xì)胞增殖反應(yīng)。凋亡細(xì)胞在體內(nèi)吞噬所產(chǎn)生的免疫抑制效應(yīng)是有凋亡細(xì)胞抗原特異性的。
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【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 劉光偉;夏雪培;趙勇;;Toll樣受體信號(hào)傳導(dǎo)途徑的研究進(jìn)展[J];動(dòng)物學(xué)雜志;2005年06期

2 張文瑾,鄭樹森;In vitro study of immunosuppressive effect of apoptotic cells[J];Journal of Zhejiang University Science;2005年09期

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本文編號(hào)：1687154