本文選題：凋亡胸腺細胞　切入點：樹突狀細胞　出處：《華中科技大學》2009年碩士論文

【摘要】：已證實凋亡細胞具有免疫調(diào)節(jié)作用,凋亡小體可以調(diào)節(jié)同種異體器官移植免疫排斥反應。研究發(fā)現(xiàn)凋亡細胞首先被吞噬細胞(巨噬細胞和樹突狀細胞為主)吞噬,然后通過釋放一些免疫抑制細胞因子(如TGF-β、IL-10、MIF等)或通過細胞-細胞接觸的方式直接誘導同種反應性T細胞失活來減輕移植物的免疫排斥反應,延長移植物存活。為明確在吞噬細胞吞噬凋亡細胞以及吞噬后誘導免疫耐受中巨噬細胞和DC各自起多大作用,本實驗通過檢測巨噬細胞和DC的吞噬能力,以及吞噬凋亡細胞后各吞噬細胞免疫調(diào)節(jié)能力以闡明凋亡細胞誘導移植免疫耐受的細胞學基礎(chǔ)。 目的:探討供者來源的凋亡胸腺細胞輸注誘導移植免疫耐受機制,為臨床防治移植物排斥和自身免疫病提供實驗基礎(chǔ)。 方法:用地塞米松20μM誘導小鼠(BALB/c, H-2~d)胸腺細胞凋亡;在560C水浴1小時獲得小鼠(BALB/c, H-2~d)壞死胸腺細胞。分別將活的、壞死的、凋亡的BALB/c小鼠胸腺細胞2×10~7個/只,尾靜脈輸注到C57BL/6小鼠體內(nèi),7天后將BALB/c小鼠的皮膚移植給C57BL/6小鼠,觀察各組移植皮膚的存活時間。通過尾靜脈分別將經(jīng)熒光物質(zhì)PKH67或CFSE標記后活的、壞死的、凋亡的BALB/c小鼠胸腺細胞輸注到C57BL/6小鼠體內(nèi),在不同時間點處死小鼠,分離脾臟制備單個細胞,用熒光素標記抗體(APC-CD11c,PE-B220,PE-F4/80)與脾細胞孵育,用流式細胞術(shù)分析C57BL/6小鼠脾臟內(nèi)pDC(CD11c~+B220~+)、DC(CD11c~+ B220~-)、巨噬細胞(F4/80~+)對活的、壞死的、凋亡的胸腺細胞的吞噬能力;混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗觀察分別吞噬了同系或同種異基因凋亡胸腺細胞后C57BL/6小鼠的DC和巨噬細胞對BALB/c小鼠BMDC刺激C57BL/6小鼠T細胞增殖(CFSE標記流式細胞術(shù)分析法)的免疫調(diào)節(jié)效應。 結(jié)果: 1.用Annexin-v/PI染色檢測,地塞米松誘導BALB/c小鼠胸腺細胞早期凋亡可達61.9% ;用水浴加熱法誘導的壞死基本上PI完全陽性。 2.分別輸注供者壞死的、活的或凋亡胸腺細胞對皮膚移植物存活時間的影響:凋亡細胞處理組平均存活時間是15.889±2.088天,活細胞處理組平均存活時間是9.000±1.323天,壞細胞處理組為7.333±1.323天,PBS對照組的平均存活時間是10.111±1.616天。凋亡細胞組皮膚生存時間比其它各組都長(n=9, p0.01),壞細胞組皮膚生存時間短于PBS組(n=9,p0.01)。 3.分析不同時間點C57BL/6小鼠脾臟內(nèi)吞噬細胞對BALB/c小鼠的凋亡胸腺細胞的吞噬情況:結(jié)果表明在輸注凋亡胸腺細胞后60min時,DC和巨噬細胞的吞噬效率都是最高,而且在觀察所有時間點CD11clow B220- DC(imDC)細胞對凋亡細胞的吞噬效率要明顯高于CD11chigh B220- DC (mDC)細胞和CD11c+B220+ DC ( pDC )的細胞; F4/80low M?對凋亡細胞的吞噬效率要比F4/80high M?高。凋亡細胞輸注24小時后脾臟內(nèi)檢測不出凋亡細胞存在。C57BL/6小鼠脾臟內(nèi)吞噬細胞對活的、壞死的和凋亡的BALB/c小鼠的胸腺細胞的吞噬差異情況:在活胸腺細胞尾靜脈輸注時,脾臟內(nèi)吞噬細胞的吞噬率都低于凋亡細胞組,可能由于活細胞在體內(nèi)是不會被吞噬的,只有少量在輸注前就已經(jīng)存在的自然凋亡細胞被吞噬細胞所吞噬;DC對凋亡胸腺細胞的吞噬效率也高于壞死胸腺細胞;F4/80low M?對凋亡細胞的吞噬率為21.3%,對壞死細胞的吞噬率為1.1%,F4/80high M?對凋亡細胞的吞噬率為9.5%,對壞死細胞的吞噬率為12.1%,表現(xiàn)出相反的結(jié)果。 4. DC和巨噬細胞吞噬凋亡細胞后,免疫調(diào)節(jié)能力的差異:通過混合淋巴細胞培養(yǎng)試驗,發(fā)現(xiàn)吞噬了凋亡細胞的巨噬細胞和DC都能明顯抑制同種細胞刺激的T細胞增殖反應,且比沒加入調(diào)節(jié)細胞組和沒有吞噬凋亡的巨噬細胞和DC組的抑制能力強;吞噬細胞吞噬了同種異基因凋亡胸腺細胞對增殖的抑制能力比其吞噬同系凋亡細胞后的抑制能力強,說明凋亡細胞在體內(nèi)吞噬所產(chǎn)生的免疫抑制效應是有抗原特異性的。 結(jié)論: 1.供著來源的凋亡胸腺細胞可以明顯延長皮膚移植物存活時間,而活細胞和壞死胸腺細胞的過繼輸注卻沒有這樣的效果。 2.活細胞在體內(nèi)是不能被吞噬的,而壞死細胞的吞噬卻能誘發(fā)炎癥反應,加速皮膚移植物的排斥。在對脾臟內(nèi)具體細胞的吞噬能力的研究發(fā)現(xiàn),DC中的CD11clow B220+(imDC)的吞噬能力是所有DC亞類中最強的, F4/80low的巨噬細胞對凋亡細胞的吞噬效率高于F4/80high的巨噬細胞,而對壞死細胞的吞噬效率兩者卻相反。 3.混合淋巴細胞培養(yǎng)表明,吞噬了凋亡細胞的巨噬細胞和DC都能明顯抑制同種細胞刺激的T細胞增殖反應。凋亡細胞在體內(nèi)吞噬所產(chǎn)生的免疫抑制效應是有凋亡細胞抗原特異性的。
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【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 劉光偉;夏雪培;趙勇;;Toll樣受體信號傳導途徑的研究進展[J];動物學雜志;2005年06期

2 張文瑾,鄭樹森;In vitro study of immunosuppressive effect of apoptotic cells[J];Journal of Zhejiang University Science;2005年09期

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本文編號：1687154