發(fā)布時間：2018-03-29 20:27

  本文選題：甲型副傷寒沙門菌　切入點：特異性轉(zhuǎn)移因子　出處：《遵義醫(yī)學(xué)院》2009年碩士論文

【摘要】： 目的:初步研制一種用于緊急預(yù)防和輔助治療甲型副傷寒的新型生物制劑,并探索其制備工藝。方法:(1)體內(nèi)免疫法制備甲型副傷寒特異性轉(zhuǎn)移因子(PA-STF):制備甲型副傷寒沙門菌(SPA)免疫原,采取皮下多點注射免疫山羊,免疫成功后分別取脾臟和淋巴結(jié)制備PA-STF。(2)體外免疫法制備PA-STF:采用SPA體外免疫脾細(xì)胞技術(shù),探索PHA刺激的合適劑量、免疫原最佳濃度及最佳作用時間、免疫羊脾細(xì)胞最適培養(yǎng)時間,按優(yōu)化條件培養(yǎng)羊脾細(xì)胞,制備PA-STF。(3)PA-STF的理化性質(zhì)檢定:采用紫外分光光度計進(jìn)行多波長掃描,以苔黑酚法和改良Lowry法分別檢測PA-STF的核糖及多肽含量,并進(jìn)行無菌試驗、熱原質(zhì)試驗和安全試驗等。(4) PA-STF的免疫學(xué)活性檢定:取昆明小鼠,隨機(jī)分成實驗1組、實驗2組、對照1組、對照2組和NS組,分別以體內(nèi)法制備的PA-STF、體外法制備的PA-STF、體內(nèi)法制備的非特異性轉(zhuǎn)移因子(nTF)、體外法制備的nTF、生理鹽水灌胃,采用淋巴細(xì)胞增殖試驗、白細(xì)胞粘附抑制試驗(LAIT)、吞噬細(xì)胞吞噬功能試驗、吞噬細(xì)胞殺菌功能試驗和免疫保護(hù)性試驗等檢定PA-STF的免疫學(xué)活性。免疫保護(hù)性試驗中,SPA攻擊后第4天仍然存活的小鼠,取5只觀察攻擊后2周時的一般情況,剩余小鼠在攻擊后第7天處死,剪取3cm的回腸用4%甲醛固定后,HE染色,鏡檢,觀察腸粘膜的病理學(xué)改變。結(jié)果:(1)以淋巴結(jié)制備的PA-STF的多肽濃度為1.83±0.17mg/ml,核糖濃度為0.572±0.024mg/ml,以脾臟制備的PA-STF的多肽濃度為1.59±0.22 mg/ml,核糖濃度為0.493±0.015mg/ml,兩者相比,多肽之間及核糖之間濃度沒有顯著差異(P＞0.05)。(2) 100μg/ml的PHA與脾細(xì)胞培養(yǎng)6h后,加入0.2ng/ml的SPA免疫原,繼續(xù)培養(yǎng)至96h條件下制備的PA-STF的多肽和核糖的含量,明顯高于其他劑量、時間等條件下制備的PA-STF(P＜0.05)。(3)兩種方法制備的PA-STF的氨基酸、多肽、核糖的含量無顯著性差異(P＞0.05),無菌試驗均為陰性,熱原質(zhì)試驗和安全試驗均合格。(4)兩種方法制備的PA-STF在多肽濃度為0.60mg/ml時,對淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)(SI)明顯高于其它濃度時的SI(P＜0.05);兩實驗組的LAIR均高于兩對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);兩實驗組之間比較,LAIR無顯著性差異(P＞0.05);吞噬細(xì)胞的吞噬功能和殺菌功能試驗中,實驗組與對照組之間以及兩實驗組之間比較,吞噬率和殺菌率均無顯著性差異(P＞0.05),各組吞噬率與殺菌率的相關(guān)系數(shù)均大于0.8;免疫保護(hù)性試驗中,兩實驗組分別與兩對照組比較,實驗組小鼠存活率均明顯高于對照組(P＜0.05),兩實驗組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。實驗組存活小鼠2周時一般情況明顯好于其它組,且病理學(xué)結(jié)果顯示小鼠回腸粘膜的炎性程度較其它組輕。結(jié)論:(1)體內(nèi)免疫法成功制備PA-STF,脾臟和淋巴結(jié)均可作為制備原料;體外免疫法成功制備PA-STF,以100μg/ml的PHA與脾細(xì)胞共同培養(yǎng)6h,然后加入濃度為0.2ng/ml的PA免疫原,第96h終止培養(yǎng)為最佳制備條件。(2)兩種方法制備的PA-STF口服制劑的理化性質(zhì)均符合《中國藥典》(2005版)的要求標(biāo)準(zhǔn)。(3)兩種方法制備的PA-STF口服制劑均可以增強(qiáng)小鼠的非特異性免疫應(yīng)答,能夠轉(zhuǎn)移針對SPA的特異性免疫效應(yīng)。
[Abstract]:Objective : To develop a new biological preparation for emergency prevention and adjuvant treatment of paratyphoid A of type A . ( 4 ) The immunological activity assay of PA - stf was determined by means of PA - stf prepared by in vitro method , non - specific transfer factor ( nTF ) prepared by in vitro method , lymphocyte proliferation assay , leukocyte adhesion inhibition test ( LAIT ) , phagocyte phagocytic function test , phagocyte bactericidal function test and immune protective test . There was no significant difference between the two experimental groups ( P > 0.05 ) . The results showed that both the phagocytosis rate and the bactericidal rate of the experimental group were significantly higher than those in the control group ( P > 0.05 ) . The results showed that both the phagocytic rate and the bactericidal rate of the mice were significantly higher than those in the control group ( P > 0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R392

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本文編號：1682717