本文選題：流感病毒減株　切入點(diǎn)：A/17/California/2009/38　出處：《吉林大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：流行性感冒是由甲（A）、乙（B）、丙（C）三型流感病毒分別感染引起的急性呼吸道傳染病。甲、乙兩型流感病毒基因組由8個單鏈負(fù)鏈RNA節(jié)段組成，丙型流感病毒則缺少一個編碼NA的RNA節(jié)段。不同的RNA節(jié)段編碼不同的蛋白質(zhì)，擁有特定的生物學(xué)功能，進(jìn)而決定流感病毒的遺傳特性。 流感病毒的變異，包括致病性變異、抗原性變異、相變異等方面。致病性變異包括宿主適應(yīng)性變異、條件致病性變異和冷適應(yīng)變異，抗原性變異主要是指HA和NA抗原的變異，主要有抗原漂移和抗原轉(zhuǎn)換兩種形式。因流感病毒的抗原易發(fā)生變異，曾多次引起過世界性的流感大流行，給人類帶來巨大災(zāi)難。 預(yù)防流感和控制其流行的最有效措施就是接種流感疫苗。根據(jù)流感滅活疫苗的有效成分，可將其分為流感全病毒滅活疫苗、流感病毒裂解疫苗、流感病毒亞單位疫苗。目前使用的流感滅活疫苗主要是針對A型H1N1、A型H3N2和B型流感病毒的三聯(lián)疫苗，使用安全，，且具有較好的免疫效果。 流感減毒活疫苗是將親代減毒株（常為冷適應(yīng)株）的六個內(nèi)部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)和目前流行病毒株的兩個基因（HA和NA）進(jìn)行重配后得到的流感病毒減毒株制得的，既具有供體冷適應(yīng)病毒株的溫度敏感、冷適應(yīng)、減毒的特點(diǎn),又有流行病毒株的抗原特性。目前已批準(zhǔn)上市的流感減毒活疫苗有美國的FluMistTM和俄羅斯的LAIV。 由于流感病毒屬于節(jié)段性RNA病毒，基因重組率高，非常容易發(fā)生突變而改變其抗原。流感疫苗減毒株制備成流感減毒活疫苗應(yīng)用于人群后，必須保證其基因的遺傳穩(wěn)定性，才能保證疫苗作用于人體仍然能維持其基本特征，使用后不能使人致病，且能產(chǎn)生良好的免疫保護(hù)。因此流感病毒減毒株基因的遺傳穩(wěn)定性對于疫苗生產(chǎn)用毒株來說是非常重要，只有基因遺傳穩(wěn)定才能保證疫苗的安全性和有效性。 本實(shí)驗(yàn)研究的目的就是研究流感減毒活疫苗生產(chǎn)用毒株基因的遺傳穩(wěn)定性。 本實(shí)驗(yàn)將A/17/California/2009/38(H1N1)、 A/17/Perth/09/87(H3N2)及B/56/Brisbane/60/08三株流感病毒減毒株分別接種于雞胚尿囊腔中進(jìn)行連續(xù)傳代培養(yǎng)，選取第2、3、5、10代毒株，采用分子生物學(xué)的方法，提取病毒的全部基因RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，PCR擴(kuò)增后連入載體構(gòu)建質(zhì)粒，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌后提取陽性單克隆進(jìn)行培養(yǎng)，再提取質(zhì)粒送測序。 將A/17/California/2009/38、A/17/Perth/09/87、B/56/Brisbane/60/08這3種病毒4個代次共12株病毒株的PB2、PB1、PA、NP、M、NS等6個基因與其親本減毒株A/Leningrad/134/17/57(H2N2)、B/USSR/60/69相同基因進(jìn)行基因全序列和氨基酸全序列比對；將A/17/California/2009/38、 A/17/Perth/09/87、B/56/Brisbane/60/08這3種病毒4個代次共12株病毒株的HA和NA這2個基因與WHO推薦的適用于北半球的2011～2012年相應(yīng)流感減毒病毒株anA/California/07/2009(H1N1)-like virus、an A/Perth/16/2009(H3N2)-likevirus、a B/Brisbane/60/2008-like virus進(jìn)行基因全序列和氨基酸全序列比對，比對結(jié)果顯示，病毒在傳代的過程中出現(xiàn)了核苷酸和氨基酸的突變，但突變率非常低，甲型流感病毒的總突變率僅為0.035%，乙型流感病毒的總突變率僅為0.022%，說明該病毒株與[戎暉蔥源笥

本文編號：1670893