本文選題：實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎　切入點(diǎn)：濾泡輔助性T細(xì)胞　出處：《瀘州醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）小鼠中觀察濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh)的變化，探討Tfh細(xì)胞與EAE的關(guān)系。方法：60只雌性清潔級(jí)C57BL/6J小鼠隨機(jī)分成3組：正常對照組、EAE對照組及甲潑尼龍防治組，每組20只。用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白35-55（MOG35-55）及完全弗氏佐劑制成免疫抗原，皮下注射制作EAE模型。模型建立后第二天起，甲潑尼龍防治組以甲潑尼龍25mg/kg劑量腹腔注射，每日給藥1次，連續(xù)給藥14天。同時(shí)，予以EAE對照組、正常對照組小鼠腹腔注射等體積生理鹽水。記錄三組小鼠的發(fā)病率、發(fā)病潛伏期、進(jìn)展期及發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評分。于免疫誘導(dǎo)后第30天后處死小鼠。留取小鼠腦脊髓組織、動(dòng)脈血。小鼠腦脊髓組織處理后做HE染色進(jìn)行病理檢查，用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定血清白細(xì)胞介素-21(IL-21)及趨化因子配體13（CXCL13）水平，腦組織使用放射免疫法檢測白細(xì)胞介素-4(IL-4)及白細(xì)胞介素-10(IL-10)含量，通過流式細(xì)胞儀測定外周血Tfh細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例。結(jié)果：（1）C57BL/6J小鼠發(fā)病情況：正常對照組小鼠未發(fā)�。籈AE對照組及甲潑尼龍防治組發(fā)病率100％。EAE對照組發(fā)病潛伏期12.95±1.28天，甲潑尼龍防治組發(fā)病潛伏期16.10±1.29天，甲潑尼龍防治組發(fā)病潛伏期比EAE對照組長（P＜0.01）。EAE對照組發(fā)病進(jìn)展期4.70±0.92天，甲潑尼龍防治組進(jìn)展期為3.00±0.97天，甲潑尼龍防治組發(fā)病進(jìn)展期比EAE對照組縮短（P＜0.01）。EAE對照組神經(jīng)功能障礙評分為3.60±1.27，甲潑尼龍防治組發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評分為2.35±0.88，甲潑尼龍防治組發(fā)病高峰期神經(jīng)功能障礙評分較EAE對照組評分低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（2）正常對照組、EAE對照組及甲潑尼龍防治組小鼠腦及脊髓病理學(xué)改變情況：正常對照組小鼠腦組織無異常。EAE對照組及甲潑尼龍防治組小鼠腦組織實(shí)質(zhì)內(nèi)血管周圍有明顯炎性細(xì)胞浸潤，其中主要為淋巴細(xì)胞和少量的單核細(xì)胞，典型者形成“袖套”樣的改變。甲潑尼龍防治組炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重程度與EAE對照組相比病理改變減輕。（3）正常對照組、EAE對照組及甲潑尼龍防治組小鼠外周血中Tfh細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例及CXC趨化因子受體5（CXCR5）、可誘導(dǎo)性共刺激因子（ICOS）比例：正常對照組小鼠外周血中CD4+CXCR5+細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例為5.00±1.82%， EAE對照組小鼠為25.97±3.14%，甲潑尼龍防治組小鼠為15.15±1.67%。正常對照組小鼠外周血中CD4+ICOS+細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例為17.31±1.96%，EAE對照組小鼠為34.91±2.74%，甲潑尼龍防治組小鼠為23.09±2.39%。正常對照組小鼠外周血中Tfh細(xì)胞占CD4+細(xì)胞的比例為2.81±0.62%， EAE對照組小鼠為8.58±1.27%，甲潑尼龍防治組小鼠為5.70±1.02%。 EAE對照組小鼠外周血中Tfh細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例、CD4+CXCR5+細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例、CD4+ICOS+細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例較正常對照組增高(P＜0.01)；甲潑尼龍防治組小鼠外周血中Tfh細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例、CD4+CXCR5+細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例、CD4+ICOS+細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例較EAE對照組降低(P＜0.01)，，較正常對照組增高(P＜0.01)。（4）正常對照組、EAE對照組及甲潑尼龍防治組小鼠血清IL-21及CXCL13水平：正常對照組小鼠血清IL-21水平為1.62±0.29pg/ml，EAE對照組小鼠為3.47±0.35pg/ml，甲潑尼龍防治組小鼠為2.45±0.27pg/ml。正常對照組小鼠血清CXCL13水平為1.73±0.43pg/ml，EAE對照組小鼠為3.75±0.52pg/ml，甲潑尼龍防治組小鼠為2.64±0.27pg/ml。EAE對照組小鼠血清IL-21及CXCL13水平較正常對照組增高(P＜0.01)；甲潑尼龍防治組血清IL-21及CXCL13水平較EAE對照組降低(P＜0.01)，較正常對照組增高(P＜0.01)。（5）正常對照組、EAE對照組及甲潑尼龍防治組小鼠腦組織中IL-4和IL-10含量的變化：正常對照組腦組織IL-4含量為24.98±2.23pg/ml，EAE對照組腦組織IL-4含量為11.17±2.07pg/ml，甲潑尼龍防治組腦組織IL-4含量為18.48±2.23pg/ml。EAE對照組較正常對照組明顯降低（P 0.01）；甲潑尼龍防治組較EAE對照組顯著升高,較正常對照組降低（P 0.01）。正常對照組腦組織IL-10含量為2.60±0.17pg/ml，EAE對照組腦組織IL-10含量為1.14±0.13pg/ml，甲潑尼龍防治組腦組織IL-10含量為2.05±0.15pg/ml。EAE對照組較正常對照組明顯降低（P 0.01）；甲潑尼龍防治組較EAE對照組顯著升高,較正常對照組降低（P 0.01）。（6）相關(guān)性分析：正常對照組、EAE對照組及甲潑尼龍防治組腦組織中IL-4、IL-10含量與Tfh細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)，(P0.01)；IL-21、CXCL13水平與Tfh細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例呈正相關(guān)(P0.01)。EAE對照組及甲潑尼龍防治組Tfh細(xì)胞及IL-21、CXCL13的表達(dá)與潛伏期呈負(fù)相關(guān)((P0.01)，與進(jìn)展期、神經(jīng)功能障礙評分呈正相關(guān)((P0.01)。腦組織IL-10含量與EAE對照組及甲潑尼龍防治組潛伏期呈正相關(guān)（(P0.01），與進(jìn)展期、神經(jīng)功能障礙評分呈負(fù)相關(guān)（(P0.01）。結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)以MOG35-55作為免疫誘導(dǎo)原誘導(dǎo)C57BL/6小鼠制作EAE模型，EAE小鼠神經(jīng)功能障礙明顯，中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管周圍炎性細(xì)胞浸潤、脫髓鞘改變明顯，說明本法造模成功。2.EAE對照組小鼠腦組織中IL-4、IL-10含量較正常對照組明顯降低，IL-4、IL-10含量與Tfh細(xì)胞占CD4+細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)、與EAE小鼠發(fā)病潛伏期、進(jìn)展期和神經(jīng)功能障礙評分密切相關(guān)，說明IL-4和IL-10在EAE發(fā)病起著抑制作用。3.EAE對照組小鼠體內(nèi)Tfh及IL-21、CXCL13的水平較正常對照組明顯增加，且與發(fā)病潛伏期、進(jìn)展期和神經(jīng)功能障礙評分密切相關(guān)，說明Tfh細(xì)胞的異常增高參與了EAE發(fā)病。4.甲潑尼龍對EAE小鼠發(fā)病具有防治作用，其機(jī)制可能通過抑制Tfh細(xì)胞比例及IL-21、CXCL13水平的異常增高和促進(jìn)IL-4和IL-10的產(chǎn)生而發(fā)揮對EAE的防治作用。
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【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R-332;R744.51

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉光偉;趙勇;;CD4~+T細(xì)胞的新亞型:Th17細(xì)胞及其生物效應(yīng)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2007年04期

本文編號(hào)：1651806