本文選題：沖擊波　切入點(diǎn)：間充質(zhì)干細(xì)胞　出處：《中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)》2009年49期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：背景:目前,沖擊波療法被廣泛的用于治療骨不連、骨折延遲愈合和股骨頭壞死以及運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)慢性勞損性疾病,取得了很好的療效,但其作用機(jī)制并不明確。目的:觀察體外沖擊波作用于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后c-Fos、c-Jun蛋白表達(dá)的變化情況。設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn):隨機(jī)分組設(shè)計(jì),對(duì)比觀察,于2007-03/2008-03在吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成。材料:骨髓來源于健康志愿者。方法:體外培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,取P4代細(xì)胞,加入2.5g/L胰蛋白酶消化制成細(xì)胞懸液,用無血清低糖DMEM培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度在1.0×109L-1的水平,然后取6mL細(xì)胞懸液,分裝入6個(gè)1.5mL的Eerrendorf管內(nèi),1管為對(duì)照組,5管為誘導(dǎo)組。將誘導(dǎo)組Eerrendorf管置入體外液電沖擊波碎石機(jī)中,采用最佳沖擊波強(qiáng)度(工作電壓8.5kV,脈沖次數(shù)為120次)作用于細(xì)胞,分別在作用后5,15,30min,1,2h提取蛋白質(zhì)。主要觀察指標(biāo):倒置顯微鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)變化;四甲基偶氮唑鹽法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;Western Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)c-Fos、c-Jun蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果:①骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于培養(yǎng)板,細(xì)胞呈圓形,24h后,細(xì)胞開始緩慢分裂、增殖,半量換液后見貼壁細(xì)胞形態(tài)呈梭形。第3天后細(xì)胞增殖加快,呈團(tuán)簇集落樣生長(zhǎng)。10～14d各個(gè)細(xì)胞克隆增大,直至鋪滿培養(yǎng)板底面達(dá)到融合狀態(tài)。傳代培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈圓形,24h內(nèi)完全貼壁,形態(tài)與原代培養(yǎng)的細(xì)胞類似,1周左右達(dá)到完全融合,呈漩渦狀排列。傳至10代以后,細(xì)胞分裂增殖速度明顯減慢,細(xì)胞逐漸老化。②四甲基偶氮唑鹽結(jié)果顯示:原代及P2、P3代的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈S型,在第3～5天為增殖旺盛期。③體外沖擊波誘導(dǎo)后,人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中c-Fos、c-Jun的磷酸化水平開始增高,分別于30,15min后達(dá)高峰,分別為對(duì)照組的2.56倍,1.68倍(P0.01),之后逐漸下降;c-Fos、c-Jun的總量未見明顯變化(P0.05)。結(jié)論:體外沖擊波作用于體外培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后,呈現(xiàn)了細(xì)胞內(nèi)c-Fos、c-Jun蛋白活性增高的變化。
[Abstract]:Background: at present, shock wave therapy has been widely used in the treatment of nonunion, delayed union of fracture and necrosis of femoral head, and chronic strain disease of motor system. Objective: to observe the changes of c-Fosn c-Jun protein expression in bone marrow mesenchymal stem cells treated with extracorporeal shock wave. Completed in the State key Laboratory of Pathology, College of basic Medicine, Jilin University, 2007-03 / 2008-03. Materials: bone marrow derived from healthy volunteers. Methods: human bone marrow mesenchymal stem cells were cultured in vitro and P4 passage cells were taken. The cell suspension was digested with 2.5g/L trypsin. The cell density was adjusted to 1. 0 脳 109L-1 with serum free low glucose DMEM medium. Then the 6mL cell suspension was obtained. Six 1.5 mL Eerrendorf tubes were divided into 5 tubes of the control group. The Eerrendorf tubes of the induction group were placed in the extracorporeal hydroelectric shock wave lithotriptor. The optimal shock wave intensity (working voltage 8.5 kV, pulse number 120 times) was applied to the cells. Main outcome measures: morphological changes of bone marrow mesenchymal stem cells were observed by inverted microscope. The expression of c-Fossin-c-Jun protein was detected by Western Blot. Results the bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were inoculated into the culture plate for 24 hours, and the cells began to divide slowly and proliferate. The morphology of adherent cells was fusiform after half fluid exchange, and the proliferation of adherent cells accelerated after 3 days, and each cell clone increased after 10 ~ 14 days of cluster growth. The cultured bone marrow mesenchymal stem cells were completely adhered to the wall within 24 hours, and the morphology was similar to that of the primary cultured cells for about 1 week. The mesenchymal stem cells were arranged in a whirlpool shape. After 10 passage, the mesenchymal stem cells were arranged in a whirlpool shape. The cell division and proliferation slowed down obviously. The results showed that the growth curve of primary bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) of primary generation and P2P3-generation was S-shaped, and the proliferation exuberant phase was 3. 3 in vitro shock wave induction on the 3rd day. The phosphorylation level of c-Fosn c-Jun in human bone marrow mesenchymal stem cells began to increase and reached its peak after 30 minutes. It was 2.56 times as much as 1.68 times that of the control group (P0.01), and then decreased gradually. The total amount of c-Fossin-c-Jun did not change significantly. Conclusion: the activity of c-Fosn c-Jun protein increased after cultured human bone marrow mesenchymal stem cells were exposed to shock wave in vitro.
【作者單位】： 吉林大學(xué)第一醫(yī)院脊柱外科;吉林大學(xué)第一醫(yī)院骨關(guān)節(jié)二科;
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1644920