本文選題：白血病耐藥　切入點：消減免疫　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2010年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目前化學(xué)治療仍是臨床治療白血病的主要手段,也是造血干細(xì)胞移植的基礎(chǔ)。近年來盡管有多種新的藥物和治療方案推出,但大多數(shù)急性白血病患者最終因治療失敗而死亡。腫瘤細(xì)胞對抗癌藥物產(chǎn)生抗藥性是化療失敗的一個主要原因。導(dǎo)致治療失敗的原因是多方面的,其中多藥耐藥性(multi-drug resistance,MDR)是最重要的一種。MDR又稱多藥抗藥性(pleiotropic durg resistnace),是指惡性腫瘤細(xì)胞對一種化療藥物產(chǎn)生耐藥現(xiàn)象后,產(chǎn)生了對多種結(jié)構(gòu)不同、作用靶點和作用機(jī)制各異的其他抗癌藥物的抗藥性。 白血病耐藥的產(chǎn)生是多因素的,隨誘導(dǎo)藥物、細(xì)胞種類、分化階段、及細(xì)胞所處微環(huán)境的不同而表現(xiàn)出不同的耐藥表型。雖然已有的研究揭示了一些腫瘤多藥耐藥的機(jī)制,但目前仍然不能完全解釋腫瘤多藥耐藥現(xiàn)象并有效逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥。目前在白血病耐藥的臨床治療方面主要以抑制P-糖蛋白功能的耐藥逆轉(zhuǎn)劑為主,但其臨床效果也不理想,至今無一獲得FDA批準(zhǔn)上市。雖然急性白血病耐藥的發(fā)生機(jī)制已經(jīng)被廣泛的研究,但耐藥機(jī)制仍不明了,與白血病耐藥相關(guān)的細(xì)胞膜新靶點的篩選方法仍未得以建立。 事實上白血病患者耐藥產(chǎn)生并非單一機(jī)制,此外,臨床上患者間的個體差異也為治療帶來了困難�？梢姲l(fā)現(xiàn)更多的白血病耐藥相關(guān)的治療靶點以實現(xiàn)多靶點聯(lián)合檢測與治療、豐富白血病耐藥機(jī)理從多角度全面闡明白血病耐藥機(jī)制以綜合制定白血病耐藥治療方案,建立治療和預(yù)后指標(biāo)是解決上述問題的對策。細(xì)胞膜蛋白暴露于細(xì)胞外表面,特別容易被抗體等試劑識別,作為靶點特異的檢測、診斷和治療的標(biāo)志物；此外細(xì)胞膜蛋白還特別適于作為較為分散的血液腫瘤的治療靶點。鑒于此,本文著力于尋找新的白血病耐藥相關(guān)的細(xì)胞膜蛋白,考察其與白血病耐藥的相關(guān)性并探討其可能的機(jī)制。 為尋找白血病耐藥相關(guān)的細(xì)胞膜靶點,本研究首先應(yīng)用消減免疫法,以人早幼粒細(xì)胞HL60活細(xì)胞作為耐受原誘導(dǎo)Balb/c小鼠免疫耐受,然后以阿霉素耐藥株HL60/ADR細(xì)胞作為免疫原免疫小鼠,得到能特異識別差異表達(dá)的耐藥株與敏感株HL60細(xì)胞膜表面蛋白的雜交瘤細(xì)胞庫。通過對HL60和HL60/ADR兩種靶細(xì)胞的選擇性篩選和亞克隆培養(yǎng)、抗體的制備與純化等過程,我們最終獲得五株與兩種靶細(xì)胞結(jié)合能力不同的單克隆抗體,這些抗體攜帶特定的耐藥蛋白的標(biāo)志信息。 為了進(jìn)一步獲得相應(yīng)抗原的信息,我們通過免疫沉淀和蛋白電泳技術(shù)分離敏感和耐藥的HL60差異表達(dá)的細(xì)胞膜蛋白,并通過MALDI-TOF-MS鑒定抗原。最終我們獲知單抗5D12的靶抗原為SFPQ,該蛋白高表達(dá)于敏感的HL60細(xì)胞膜表面,在阿霉素耐藥株細(xì)胞膜其表達(dá)降低。通過siRNA干擾SFPQ,我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜高表達(dá)該蛋白的HL60細(xì)胞其膜SFPQ表達(dá)水平降低,由此確認(rèn)SFPQ確為單抗5D12的靶抗原。此結(jié)果系首次發(fā)現(xiàn)SFPQ可表達(dá)在腫瘤細(xì)胞膜表面。 通過實驗我們發(fā)現(xiàn)5D12為有生物學(xué)活性的細(xì)胞膜蛋白SFPQ的特異性抗體。在以5D12作為研究SFPQ的功能的實驗中我們發(fā)現(xiàn),細(xì)胞膜SFPQ可增強細(xì)胞對阿霉素的敏感性。進(jìn)一步的研究顯示,細(xì)胞膜SFPQ可能通過抑制細(xì)胞增殖和克隆形成能力而減緩細(xì)胞生長,從而維持HL60細(xì)胞對阿霉素的敏感性。在對影響細(xì)胞增殖能力可能機(jī)制的研究中我們發(fā)現(xiàn),細(xì)胞膜SFPQ通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和減少細(xì)胞S期比例減少DNA復(fù)制而抑制細(xì)胞增殖。該結(jié)果系首次報道HL60細(xì)胞膜表面蛋白SFPQ為一耐藥相關(guān)蛋白。 綜上結(jié)果,我們認(rèn)為細(xì)胞膜SFPQ可作為人早幼粒細(xì)胞白血病阿霉素耐藥的新的細(xì)胞膜靶點,并且該靶點有可能成為檢測和診斷該類白血病阿霉素耐藥的新指標(biāo),為針對多因素耐藥而采取的多靶點治療和新的耐藥機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:At present, chemotherapy is the primary treatment of leukemia, but also the basis for hematopoietic stem cell transplantation. In recent years, despite the introduction of new drugs and treatment programs, but most of the patients with acute leukemia died of treatment failure and death eventually. Tumor cells produce resistance to anticancer drugs is a major cause of chemotherapy failure causes. Treatment failure is in many aspects, including multi drug resistance (multi-drug, resistance, MDR) is one of the most important.MDR multiple drug resistance (pleiotropic durg resistnace), refers to the malignant tumor cell resistance to a chemotherapy drug, has a variety of different structures of other anticancer drug targets and the mechanism of different resistance.
Leukemia resistance is multifactorial, with the induction of drugs, cell types, cell differentiation stage, and the micro environment of different show different resistance phenotype. Although the existing research reveals the mechanism of multidrug resistance in some tumors, but is still can not fully explain the phenomenon of multidrug resistance and multi drug resistance to effectively reverse tumor cells. The clinical treatment for leukemia drug resistance mainly to the resistance reversal agent inhibits P- glycoprotein function, but its clinical effect is not ideal, one has been approved by the FDA. Although the pathogenesis of acute leukemia drug resistance has been extensively studied, but the mechanism of drug resistance is still unknown, yet the screening method of cell membrane associated with leukemia resistant new targets have been established.
In fact, drug resistant leukemia patients are not a single mechanism. In addition, the clinical individual differences between patients for treatment of difficult. It found more drug-resistant leukemia related therapeutic targets to achieve the target of joint detection and treatment, rich in drug-resistant leukemia from the multi angle comprehensive mechanism to clarify the mechanism of resistance to develop a comprehensive treatment of drug-resistant leukemia for the treatment and prognosis of leukemia, the establishment of indicators is the countermeasures to solve these problems. The cell membrane proteins are exposed on the outer surface of the cells, are particularly susceptible to antibody reagent identification, targeting specific marker detection, diagnosis and treatment; in addition treatment target cell membrane protein is particularly suited as scattered blood tumor in view of this, this paper focuses on the search for leukemia drug resistance associated membrane protein, to study its correlation with drug resistance of leukemia and to explore its possible The mechanism.
The cell membrane target for leukemia drug resistance related, in this study we used subtractive immunization, human promyelocytic HL60 living cells as tolerogen Balb/c induced immune tolerance of mice, then to adriamycin resistant HL60/ADR cell line used to immunize mice, obtain hybridoma cell library specific expression to identify differentially resistant strains with the sensitive strain of HL60 cell surface membrane protein. Through selective screening of HL60 and HL60/ADR two kinds of target cells and sub clone culture, preparation and purification process of antibody, we finally obtained five strains and two target cell binding ability of different monoclonal antibodies, these antibodies carrying resistance protein marker specific information.
In order to obtain the corresponding antigen, cell membrane protein expression of HL60 we isolated sensitive and resistant by immunoprecipitation and protein electrophoresis, and identified by MALDI-TOF-MS antigen. Finally we know target antigen monoclonal antibody 5D12 for SFPQ, the protein expression of HL60 cell membrane surface sensitive, reduce its expression in the cell membrane adriamycin resistant strains by siRNA interference. SFPQ, we found that the protein HL60 cell membrane SFPQ membrane expression level decreased, thereby confirming the target antigen of SFPQ mAb 5D12. This is the first discovery of SFPQ expressed on tumor cell surface membrane.
Through the experiment we found that the specific antibody 5D12 for biological activity of cell membrane protein SFPQ. 5D12 was used as the study on the function of SFPQ in the experiment we found that the cell membrane of SFPQ could enhance the sensitivity of cells to adriamycin. Further studies showed that the cell membrane SFPQ may through inhibition of cell proliferation and clone formation ability and slow down cell growth, thus maintaining the sensitivity of HL60 cells to adriamycin. The possible mechanism of effect on cell proliferation, we found that the inhibition of cell proliferation cell apoptosis induced by SFPQ and decreased the proportion of cells in S phase reduced DNA replication. This is the first report of HL60 cell membrane surface protein SFPQ as a resistance related protein.
In summary, we believe that SFPQ can be used as the cell membrane of human promyelocytic cell membrane new target myeloid leukemia adriamycin resistant, and the target may become a new indicator for the detection and diagnosis of the adriamycin resistant leukemia, lay the foundation for studying multi targets and take to several factors of drug treatment and new drug resistance the mechanism.

【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張義成;白血病耐藥的生物化學(xué)基礎(chǔ)[J];華中醫(yī)學(xué)雜志;1996年04期

2 胡曉梅,鄧成珊,麻柔;逆轉(zhuǎn)白血病耐藥的研究進(jìn)展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2000年09期

3 吳東升,楊碧云,李慧慧,湯愛萍;異搏定逆轉(zhuǎn)急性白血病耐藥一例[J];實用臨床醫(yī)學(xué);2003年02期

4 楊仁池;褚建新;;白血病耐藥性的研究進(jìn)展[J];國際輸血及血液學(xué)雜志;1989年03期

5 楊仁池,卞壽庚,楊天楹;逆轉(zhuǎn)白血病耐藥性的研究進(jìn)展[J];臨床血液學(xué)雜志;1993年01期

6 陳子興;;人類白血病耐藥特征、機(jī)理和逆轉(zhuǎn)及其應(yīng)用的研究[J];醫(yī)學(xué)研究通訊;2001年12期

7 陸運鑫;羅昌國;;試析白血病耐藥的中醫(yī)病機(jī)[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2008年05期

8 龔玉萍,劉霆,賈永前,陳方源,韓潔英,鄧承祺,歐陽仁榮;核酶對白血病耐藥細(xì)胞株K562/A02耐藥性逆轉(zhuǎn)的研究[J];中華血液學(xué)雜志;2001年12期

9 周圓;譚耀紅;許元富;肖瑛;齊靜;劉芳;楊純正;;Sorcin過表達(dá)——白血病多藥耐藥的一種新機(jī)制[J];中國藥理學(xué)通報;2005年12期

10 解靜榮;張斌;;干擾素聯(lián)合MAE方案治療復(fù)發(fā)難治性急性白血病療效觀察[J];白血病.淋巴瘤;2007年03期

相關(guān)會議論文 前6條

1 張江;朱麗丹;孔佩艷;陳幸華;張曦;劉紅;李杰平;曾東風(fēng);;白血病耐藥及預(yù)后相關(guān)研究進(jìn)展[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

2 江雪杰;孟凡義;周紅升;王薔;吳福群;黃凱凱;;LBH589聯(lián)合Bortezomib逆轉(zhuǎn)髓系白血病耐藥及其分子機(jī)制研究[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

3 李冬云;陳信義;田劭丹;;難治性急性白血病診斷與治療[A];全國中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 許露露;劉曉力;杜慶鋒;許娜;張晉芳;黃彬濤;駱許靜;肖曉珍;;EphB4受體參與急性髓系白血病細(xì)胞耐藥的初步研究[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

5 ;北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院血液腫瘤科簡介[A];全國中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

6 于艷艷;王季石;;腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體與伊馬替尼聯(lián)合誘導(dǎo)K562/A02細(xì)胞凋亡的研究[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 河北醫(yī)大附屬以嶺醫(yī)院血液科醫(yī)學(xué)博士 劉澤林;中西醫(yī)結(jié)合可使難治性急性白血病有效緩解[N];石家莊日報;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 任思楣;白血病耐藥相關(guān)膜蛋白SFPQ的發(fā)現(xiàn)及其耐藥機(jī)制的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

2 楊楊;骨髓基質(zhì)細(xì)胞在急性淋巴細(xì)胞白血病耐藥中的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2011年

3 馮丹丹;白血病耐藥及復(fù)發(fā)相關(guān)miRNAs的篩選與功能探究[D];中山大學(xué);2011年

4 王瑋;逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)在白血病耐藥機(jī)理研究中的應(yīng)用[D];蘇州大學(xué);2002年

5 江雪杰;聯(lián)合信號傳導(dǎo)通路抑制劑逆轉(zhuǎn)急性髓系白血病耐藥及其機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

6 黃彬濤;EphB4/Rac1/Cdc42/RhoA通路介導(dǎo)髓系白血病耐藥與高三尖杉酯堿阻斷機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

7 王娜;藥物代謝、轉(zhuǎn)運相關(guān)基因單核苷酸多態(tài)性與初治急性髓系白血病治療結(jié)局的關(guān)系的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

8 楊良春;內(nèi)源性HMGB1介導(dǎo)的自噬反應(yīng)對白血病細(xì)胞化療敏感性的影響及機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前9條

1 閆雪;復(fù)方浙貝顆粒逆轉(zhuǎn)白血病耐藥研究綜述[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

2 許露露;EphB4受體分子介導(dǎo)急性髓系白血病細(xì)胞耐藥的初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

3 張楊楊;白血病耐藥細(xì)胞中GCS對MDR1mRNA表達(dá)及P-gp藥物泵出功能的影響[D];蘇州大學(xué);2011年

4 白青偉;microRNA let-7f，miR-451，，miR-221在髓系白血病中的表達(dá)和意義及l(fā)et-7f在K562/A02細(xì)胞耐藥性中的作用[D];中南大學(xué);2010年

5 李光耀;環(huán)孢菌素A（CsA）逆轉(zhuǎn)白血病和多發(fā)性骨髓瘤耐藥的研究[D];青島大學(xué);2002年

6 王永勝;納米雄黃對藥物敏感和耐藥的白血病細(xì)胞及其白血病干細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用[D];蘭州大學(xué);2010年

7 李新;通過急性髓性白血病干細(xì)胞表面CD123導(dǎo)入溶瘤腺病毒的研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

8 李錄克;威靈仙皂苷誘導(dǎo)MR_2細(xì)胞凋亡的實驗研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2010年

9 陳磊;通過急性髓性白血病干細(xì)胞表面CD123導(dǎo)入攜帶IL-24基因溶瘤腺病毒的實驗研究[D];浙江理工大學(xué);2011年

本文編號：1639716