本文選題：活性氧　切入點(diǎn)：N-乙酰半胱氨酸　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景和目的：活性氧(reactive oxygen species, ROS)是線粒體氧化代謝過(guò)程中產(chǎn)生的具有高度活性的一類化學(xué)物質(zhì),參與調(diào)控生物體的諸多生理功能。本學(xué)位論文旨在通過(guò)對(duì)孕期和哺乳期母鼠給予抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine, NAC)處理,觀察其對(duì)子代出生后腦生長(zhǎng)和發(fā)育的影響。材料和方法：二月齡C57BL/6背景小鼠按照1雄鼠：2雌鼠的比例進(jìn)行合籠后,再將小鼠隨機(jī)分為2組：NAC給藥組(飲水中添加NAC6.523g/L)和正常對(duì)照組。取子代小鼠于P1、P3、P7、P14、P21進(jìn)行下列比較研究：(1)測(cè)量其體重、腦重,觀察整體與腦的大體發(fā)育狀況；(2)尼氏染色觀察腦組織學(xué)發(fā)育變化；(3)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá),以觀察腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞增殖情況(4)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)神經(jīng)元核蛋白(NeuN)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、髓鞘堿性蛋白(MBP)的表達(dá),以明確腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的分化情況；(5)取P3小鼠,腹腔內(nèi)注射二氫乙啶4小時(shí)后,采用冰凍切片,熒光顯微鏡下檢測(cè)小鼠腦內(nèi)ROS水平。結(jié)果：(1)P1、P3,兩組小鼠的體重和腦重及外形并無(wú)顯著差異；而在P7、P14,給藥組小鼠體重和腦重輕于正常組；至P21,兩者之間又無(wú)明顯差異。(2)尼氏染色結(jié)果顯示,在P1、P3,兩組小鼠的腦嘴尾徑并無(wú)明顯差異；但在P7和P14天,NAC組小鼠腦小于正常對(duì)照組；至P21,兩者之間無(wú)顯著性差異。此外,正常小鼠CA錐狀細(xì)胞層和DG的顆粒細(xì)胞層面積從P1-P7逐漸增大,至P7,海馬的大小和外形與P14和P21趨于一致；而NAC給藥組小鼠在P3和P7明顯小于正常小鼠,其他各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組趨于一致。NAC給藥組小鼠小腦在P1、P3并無(wú)明顯差異,在P7-P21小腦截面積稍小于正常對(duì)照組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但至P21,NAC小鼠小腦各葉的葉片發(fā)育仍稍遜于正常對(duì)照組。(3)兩組小鼠在P1大腦皮層、海馬和小腦內(nèi)均有PCNA免疫陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),至P3達(dá)到高峰后逐漸下調(diào)。在P3,NAC組上述腦區(qū)PCNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和染色強(qiáng)度要低于對(duì)照組。(4)Neun染色結(jié)果顯示,在出生后腦內(nèi)逐漸表達(dá)增強(qiáng)。在p 3, NAC組小鼠的大腦皮層、海馬內(nèi)Neun陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度與數(shù)量均低于對(duì)照組,但在小腦兩者之間的差異不明顯；其余各時(shí)間點(diǎn)兩者之間無(wú)明顯差異。NAC組小鼠海馬和小腦皮質(zhì)內(nèi)GFAP表達(dá)水平在P3和P7低于對(duì)照組,其他各時(shí)間點(diǎn)差異不明顯。正常小鼠小腦在P3開始出現(xiàn)少量MBP陽(yáng)性纖維,但NAC組小鼠未見表達(dá)。而前腦在P14才出現(xiàn)MBP免疫陽(yáng)性信號(hào),且NAC組的表達(dá)強(qiáng)度低于對(duì)照組小鼠。(5)二氫乙啶熒光染色結(jié)果顯示NAC組小鼠海馬及小腦ROS水平明顯低于對(duì)照組。結(jié)論：孕期和哺乳期給予抗氧化劑NAC,導(dǎo)致子代小鼠出生后腦大小和重量增長(zhǎng)、神經(jīng)前體細(xì)胞增殖以及向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的分化時(shí)程一過(guò)性延遲。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,內(nèi)源性ROS對(duì)腦發(fā)育是不可或缺的,孕期和哺乳期不恰當(dāng)?shù)奶砑涌寡趸瘎┯锌赡苡绊懩X發(fā)育的正常進(jìn)程。
[Abstract]:Background and objective: reactive oxygen species (Ros) are highly active chemicals produced during mitochondrial oxidative metabolism. This dissertation aims to regulate the physiological functions of organisms through the administration of the antioxidant N-acetyl-cysteine (NACC-) on pregnant and lactating mothers. Materials and methods: two month old C57BL / 6 background mice were caged in proportion of 1 male to 2 female mice. Then the mice were randomly divided into two groups: the control group (supplemented with NAC 6.523g / L in drinking water) and the control group. To observe the gross development of the whole and the brain, the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was detected by immunohistochemical staining. The expression of neuronal nuclear protein (Neu Nu), glial fibrillary acidic protein (GFAP), myelin basic protein (MBP) were detected by immunohistochemical staining to determine the differentiation of neurons in brain. After intraperitoneal injection of dihydroethidime for 4 hours, frozen sections were used to detect the ROS level in the brain of mice. Results there was no significant difference in body weight, brain weight and appearance between the two groups. However, in P7 P14, the body weight and brain weight of the mice in the administration group were lighter than those in the normal group, but there was no significant difference between the two groups in the body weight and brain weight at P21.The results showed that there was no significant difference in the brain mouth and tail diameters between the two groups. However, the brain of NAC group was smaller than that of normal control group on P7 and P14 days, but there was no significant difference between them at P21. In addition, the area of CA pyramidal cell layer and granular cell layer of DG in normal mice increased from P1-P7 to P1-P7. At P7, the hippocampal size and shape were similar to those of P14 and P21, while those in NAC group were significantly lower than those in normal mice, and there was no significant difference between the other time points and the control group in the cerebellum of the mice treated with P14 and P21. The cerebellar cross-sectional area of P7-P21 was slightly smaller than that of the normal control group, but there was no statistical significance. However, the leaf development of the cerebellar lobes of P21 NAC mice was still slightly inferior to that of the normal control group.) in the P1 cerebral cortex, hippocampus and cerebellum, the expression of PCNA immunoreactive cells was found in the cortex, hippocampus and cerebellum of the two groups. The number and intensity of PCNA positive cells in the above mentioned brain regions in the P3 + NAC group were lower than those in the control group. The results showed that the expression increased gradually in the postnatal brain, and increased gradually in the cerebral cortex of the mice in the p3 + NAC group. The staining intensity and quantity of Neun positive cells in hippocampus were lower than those in control group, but there was no significant difference between them. The expression of GFAP in hippocampus and cerebellar cortex in NAC group was lower than that in control group, but there was no significant difference at other time points. A small amount of MBP positive fibers began to appear in cerebellum of normal mice at P3. However, no expression was found in NAC mice, and MBP immunopositive signals appeared in the forebrain at P14. The expression of ROS in hippocampus and cerebellum in NAC group was lower than that in control group. Conclusion: during pregnancy and lactation, the level of ROS in hippocampus and cerebellum of mice in NAC group was significantly lower than that in control group. The brain grows in size and weight after birth, The proliferation of neural precursor cells and the transient delay in differentiation into neurons, astrocytes and oligodendrocytes. These results suggest that endogenous ROS is essential for brain development. Improper supplementation of antioxidants during pregnancy and lactation may affect the normal course of brain development.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R338

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本文編號(hào)：1637180