本文選題：細(xì)胞芯片　切入點(diǎn)：CD抗體　出處：《中國(guó)醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的 腫瘤標(biāo)志物(tumor marker, TM),是指在腫瘤發(fā)生和增殖過(guò)程中,由腫瘤細(xì)胞所產(chǎn)生或分泌并釋放到血液、體液中,反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)。腫瘤標(biāo)志物可以分成以下幾大類：①腫瘤胚胎性抗原；②酶和同工酶；③血漿蛋白；④細(xì)胞代謝產(chǎn)物；⑤腫瘤抗原；⑥癌基因和抑癌基因蛋白產(chǎn)物及微量元素。腫瘤抗原(tumor antigen)泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中新出現(xiàn)或者過(guò)度表達(dá)的一些抗原物質(zhì)。 免疫應(yīng)答過(guò)程有賴于免疫系統(tǒng)中細(xì)胞間的相互作用,一種是通過(guò)細(xì)胞間的直接接觸,另一種是通過(guò)分泌細(xì)胞因子或其他活性分子而介導(dǎo)的相互作用。細(xì)胞表面功能分子是免疫細(xì)胞之間相互識(shí)別的物質(zhì)基礎(chǔ),包括細(xì)胞表面的多種抗原、受體和其他分子。應(yīng)用單克隆抗體鑒定為主的方法,將來(lái)自不同實(shí)驗(yàn)室的單克隆抗體所識(shí)別的同一分化抗原決定簇,統(tǒng)稱為CD (cluster of differentiation)。些研究者研究發(fā)現(xiàn),正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞所表達(dá)的CD抗原不同,并且CD與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密不可分的聯(lián)系。 本課題研究制備的細(xì)胞芯片就是用來(lái)高通量檢測(cè)細(xì)胞表面CD抗原的表達(dá)情況。將六十四種CD抗原單克隆抗體固定于載體上,首先形成抗體點(diǎn)陣,隨后利用抗原、抗體特異性結(jié)合的原理,不同的單克隆抗體能夠自動(dòng)識(shí)別和捕獲表達(dá)相應(yīng)表面分化抗原的細(xì)胞,從而檢測(cè)多種腫瘤細(xì)胞表面相應(yīng)CD表型的表達(dá)情況。細(xì)胞芯片技術(shù)可快速地分析正常與癌細(xì)胞表面CD抗原表型的差異,不僅有助于腫瘤發(fā)病機(jī)制的闡明,還能篩選腫瘤細(xì)胞CD抗原表型標(biāo)志物,在腫瘤的發(fā)生機(jī)制研究、診斷和治療方面,具有廣闊的應(yīng)用前景。 方法 1、細(xì)胞培養(yǎng) 培養(yǎng)9種細(xì)胞備用,人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1、人胃腺癌細(xì)胞系7901、人正常肝上皮細(xì)胞系L-02、人肝癌細(xì)胞系Bel7404、人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1、人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H446、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460、人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和人大腸癌細(xì)胞系HT29； 2、應(yīng)用細(xì)胞芯片捕獲腫瘤細(xì)胞并檢測(cè)其細(xì)胞表面CD抗原表型的表達(dá)； 3、驗(yàn)證細(xì)胞芯片檢測(cè)腫瘤細(xì)胞表面CD抗原表型表達(dá)的特異性； (1)應(yīng)用RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)方法驗(yàn)證細(xì)胞芯片對(duì)人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1、人胃腺癌細(xì)胞系7901和人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞表面CD抗原表型的檢測(cè)結(jié)果； (2)基因測(cè)序驗(yàn)證人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1、人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞表面CD抗原表型表達(dá)的RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果； (3)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證細(xì)胞芯片捕獲細(xì)胞的特異性； 4、細(xì)胞芯片陽(yáng)性點(diǎn)熒光標(biāo)記CD的篩選。 結(jié)果 1、細(xì)胞芯片上CD13、CD29、CD49e、CD55、CD44、CD71、CD95、CD133抗體點(diǎn)捕獲到人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H446細(xì)胞；CD9、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD55、CD71、CD133、CD95抗體點(diǎn)捕獲到人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞；CD29、CD44、CD49e、CD55、CD61、CD71、CD133、CD90抗體點(diǎn)捕獲到人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞；CD9、CD15、CD24、CD29、CD44、CD55、CD66、CD31抗體點(diǎn)捕獲到人大腸癌細(xì)胞系HT29細(xì)胞；CD13、CD29、CD44、CD55、CD71抗體點(diǎn)捕獲到人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞；CD9、CD13、CD15、CD29、CD49e、CD44、CD55、CD71、CD77抗體點(diǎn)捕獲到人肝癌細(xì)胞系Bel7404細(xì)胞；CD9、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD55、CD56、CD57、CD71抗體點(diǎn)捕獲到人正常肝上皮細(xì)胞系L-02細(xì)胞；CD9、CD13、CD15、CD24、CD29、CD44、CD49e、CD55、CD71、CD95抗體點(diǎn)捕獲到人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1細(xì)胞；CD9、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD55、CD71、CD95、CD77、CD133、CD103、CD64抗體點(diǎn)捕獲到人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞。 2、RT-PCR檢測(cè)人胃腺癌細(xì)胞系7901和人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1 CD表型mRNA的表達(dá),結(jié)果顯示7901和GES-1均有CD9、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD55、CD71、CD95的表達(dá),與我們的細(xì)胞芯片檢測(cè)CD表型的結(jié)果相一致；RT-PCR檢測(cè)人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1 CD表型：nRNA的表達(dá),結(jié)果顯示CD71、CD55均有表達(dá),與我們的細(xì)胞芯片檢測(cè)CD表型的結(jié)果相一致。 3、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的方法,檢測(cè)人胃癌細(xì)胞系7901與人胃正常細(xì)胞系GES-1細(xì)胞表面CD15、CD24、CD44的表達(dá),流式結(jié)果顯示與我們的細(xì)胞芯片檢測(cè)CD表型的結(jié)果相一致。 4、從FITC-CD14、FITC-CD4、PE-CD3、FITC-CD19、PE-Cy5-CD19、FITC-Cy5-CD2、FITC-CD3、Cy-Chrome-CD22和PE-CD14等9種熒光標(biāo)記的CD中,篩選最佳細(xì)胞芯片陽(yáng)性標(biāo)點(diǎn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)PE-CD13效果最好。 結(jié)論 1、細(xì)胞芯片CD29、CD44、CD49e、CD55、CD71、CD133抗體點(diǎn)均捕獲人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H446細(xì)胞、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞和人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞；CD13、CD95抗體點(diǎn)捕獲到人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H446細(xì)胞和人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞,未捕獲到人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞；CD9抗體點(diǎn)僅捕獲到人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞,未捕獲到人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H446細(xì)胞和人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞；CD61、CD90抗體點(diǎn)僅捕獲到人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞,未捕獲到人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H446細(xì)胞和人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞。 2.、細(xì)胞芯片CD29、CD44、CD55、CD71抗體點(diǎn)均捕獲到消化系腫瘤細(xì)胞系細(xì)胞,人大腸癌細(xì)胞系HT29細(xì)胞、人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞、人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系Bel7404細(xì)胞；CD9抗體點(diǎn)捕獲到人大腸癌細(xì)胞系HT29細(xì)胞、人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系Bel7404細(xì)胞,未捕獲到人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞；CD13抗體點(diǎn)捕獲到人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞、人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系Bel7404細(xì)胞,未捕獲到人大腸癌細(xì)胞系HT29細(xì)胞；CD15抗體點(diǎn)捕獲到人大腸癌細(xì)胞系HT29細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系Bel7404細(xì)胞,未捕獲到人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞和人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞；CD49e、CD77抗體點(diǎn)捕獲到人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系Bel7404細(xì)胞,未捕獲到人大腸癌細(xì)胞系HT29細(xì)胞和人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞；CD24、CD66、抗體點(diǎn)僅捕獲到人大腸癌細(xì)胞系HT29細(xì)胞；CD95、CD133、CD103、CD64抗體點(diǎn)僅捕獲到人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞。 3.、細(xì)胞芯片CD29、CD44、CD55、CD71抗體點(diǎn)均捕獲到人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H446細(xì)胞、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H460細(xì)胞、人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞、人大腸癌細(xì)胞系HT29細(xì)胞、人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1細(xì)胞、人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞系Be17404細(xì)胞。 4、細(xì)胞芯片CD9、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD55、CD71抗體點(diǎn)捕獲到人肝癌細(xì)胞系Be17404細(xì)胞和人正常肝上皮細(xì)胞系L-02細(xì)胞；CD15、CD77抗體點(diǎn)僅捕獲到人肝癌細(xì)胞系Be17404細(xì)胞,未捕獲到人肝上皮細(xì)胞系L-02細(xì)胞；CD56、CD57抗體點(diǎn)僅捕獲到人正常肝上皮細(xì)胞系L-02細(xì)胞,未捕獲到人肝癌細(xì)胞系Bel7404細(xì)胞。 5、細(xì)胞芯片CD9、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD55、CD71、CD95抗體點(diǎn)均捕獲到人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1細(xì)胞和人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞；CD15、CD24抗體點(diǎn)僅捕獲到人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1細(xì)胞,未捕獲到人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞；CD77、CD133、CD103、CD64抗體點(diǎn)僅捕獲到人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞,未捕獲到人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1細(xì)胞；CD15和CD24可能是人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1細(xì)胞的表面標(biāo)志物,CD77、CD133、CD103、CD64可能是人胃癌細(xì)胞系7901細(xì)胞的標(biāo)志物。 6、RT-PCR檢測(cè)人胃腺癌細(xì)胞系7901和人正常胃粘膜細(xì)胞系GES-1 CD表型mRNA的表達(dá),結(jié)果顯示7901和GES-1均有CD9、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD55、CD77、CD95 mRNA的表達(dá),與我們的細(xì)胞芯片檢測(cè)CD表型的結(jié)果相一致；RT-PCR檢測(cè)人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1 CD表型mRNA的表達(dá),結(jié)果顯示CD71、CD55均有表達(dá),與我們的細(xì)胞芯片檢測(cè)CD表型的結(jié)果相一致。 7、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的方法,檢測(cè)人胃腺癌細(xì)胞系7901與人胃正常細(xì)胞系GES-1細(xì)胞表面表達(dá)CD15、CD24、CD44,結(jié)果顯示,人胃腺癌細(xì)胞系7901細(xì)胞表面不表達(dá)CD15、CD24,表達(dá)CD44；人胃正常細(xì)胞系GES-1細(xì)胞表面表達(dá)CD15、CD24、CD44,與我們的細(xì)胞芯片檢測(cè)CD表型的結(jié)果相一致。 8、確定最佳細(xì)胞芯片陽(yáng)性標(biāo)點(diǎn)試劑是PE-CD13。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392.12

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳廣平,侯偉建,趙雨杰,王恩華,方長(zhǎng)青,劉樹立,宋今丹;細(xì)胞芯片捕獲胸腔積液中癌細(xì)胞的應(yīng)用價(jià)值[J];中國(guó)肺癌雜志;2005年03期

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本文編號(hào)：1634643