發(fā)布時間：2018-03-19 00:23

  本文選題：輪狀病毒　切入點(diǎn)：KMB17細(xì)胞　出處：《昆明醫(yī)學(xué)院》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 輪狀病毒(rotavirus, RV)是引起世界范圍內(nèi)嬰幼兒急性腹瀉最主要的病原之一,也是造成發(fā)展中國家嬰幼兒死亡的重要原因,占所有腸道感染病因的50%以上¨。按照內(nèi)層衣殼蛋白VP-6的組特異性抗原表位不同,可將RV分為A-G7個組,其中A組RV是引起嬰幼兒重癥腹瀉的主要原因。目前尚無治療RV腹瀉的特效藥物,口服補(bǔ)液(ORS)治療的效果也是有限的,特別對重癥患兒并不能明顯降低其死亡率。因此,世界衛(wèi)生組織(WHO)認(rèn)為,研發(fā)優(yōu)質(zhì)高效安全的RV疫苗是預(yù)防、控制RV感染唯一有效的手段。對于任何一種疫苗而言,其安全性和有效性都是疫苗本身最重要的基本要素,在研制疫苗時最大限度地考慮安全性非常重要。影響疫苗安全性的因素很多,其中用于制備疫苗的細(xì)胞基質(zhì)是重要影響因素之一。一般而言,人源性細(xì)胞較其他動物源性細(xì)胞其安全性要高,但限于多方面的原因,許多疫苗尚不能用人源性細(xì)胞制備；但使用人源性細(xì)胞取代非人源性細(xì)胞制備疫苗是發(fā)展方向。輪狀病毒疫苗在預(yù)防RV感染中發(fā)揮了重要作用,但目前國內(nèi)外RV疫苗主要是在動物源性細(xì)胞制備的,用一種人源性細(xì)胞來制備RV疫苗是一值得研究的課題。 本研究基于這一思路開展了相關(guān)探索,我們分別將在Vero細(xì)胞上培養(yǎng)的猴輪狀病毒P[2]G3株(SA11株)和人輪狀病毒P[8]G1株(Wa株)在KMB17細(xì)胞(一株用于人用疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞株)上進(jìn)行適應(yīng)培養(yǎng),各連續(xù)傳代10代。結(jié)果顯示,輪狀病毒SA11株和Wa株經(jīng)在KMB17細(xì)胞上適應(yīng)培養(yǎng)后,隨著傳代代次的增高,細(xì)胞病變逐漸增快,病毒感染性滴度呈遞增趨勢,并穩(wěn)定在較高水平。用熒光灶法測得SA1l株病毒滴度峰值達(dá)到7.751gCCID50／ml,Wa株病毒滴度峰值達(dá)到7.331gCCID50／ml。在連續(xù)傳代的過程中,確定了病毒接種的最佳感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection, MOI)為0.05。電鏡下觀察可見典型的輪狀病毒顆粒；免疫熒光證實(shí)了病毒能在KMB17細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖；且兩株適應(yīng)于KMB17細(xì)胞的病毒均可在MA104細(xì)胞中形成蝕斑。通過RT-PCR分別擴(kuò)增兩株病毒第1代和第10代的VP7基因測序表明,SA11株病毒VP7基因在傳代過程中基因序列未發(fā)生改變,保持了良好的遺傳穩(wěn)定性；Wa株病毒VP7基因在傳代過程中僅發(fā)生了一處基因突變,且為無義突變。用在KMB17細(xì)胞上適應(yīng)培養(yǎng)的RV病毒免疫小鼠,經(jīng)皮下注射和口服兩種免疫途徑均獲得了針對病毒的特異性抗體,其中SA11株經(jīng)皮下注射獲得的抗體滴度達(dá)20480±8192,明顯高于經(jīng)口服免疫的抗體滴度(10240±4096),經(jīng)t檢驗,P0.05；Wa株經(jīng)皮下注射獲得的抗體滴度為7186±2048,口服免疫獲得的抗體滴度為6144±2364,經(jīng)t檢驗,P0.05,無顯著差異。 本研究成功地將兩個血清型的輪狀病毒SAll株和Wa株適應(yīng)至KMB17細(xì)胞,并獲得了較高感染性滴度的子代病毒,用復(fù)制的病毒免疫小鼠,經(jīng)證實(shí)具有較好的免疫原性,為日后輪狀病毒的大規(guī)模制備以及研制一種對人體更為安全的輪狀病毒疫苗奠定了重要的基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1632013