本文選題：白介素-　切入點(diǎn)：綠色熒光蛋白　出處：《實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志》2015年09期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:構(gòu)建白介素-37(interleukin-37,IL-37)與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合基因真核表達(dá)載體,并檢測(cè)其在293T細(xì)胞中的表達(dá)。方法 :通過PCR分別擴(kuò)增出IL-37和EGFP基因,經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定正確后,克隆入真核表達(dá)載體pc DNA3.1,用Linker(G4S)3連接2個(gè)目的基因片段,構(gòu)建IL-37-GFP融合基因真核表達(dá)質(zhì)粒pc DNA3.1/IL-37-EGFP,將其轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中,觀察熒光產(chǎn)生情況,用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)IL-37的表達(dá)情況。結(jié)果:經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定,由linker連接的IL-37-GFP融合基因正確克隆入表達(dá)載體pc DNA3.1,重組表達(dá)質(zhì)粒pc DNA3.1/IL-37-EGFP轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后,用熒光顯微鏡檢測(cè)顯示熒光蛋白在細(xì)胞中表達(dá),RT-PCR與Western blot均檢測(cè)到高水平IL-37 m RNA和IL-37蛋白的表達(dá)。結(jié)論:成功構(gòu)建了IL-37-融合報(bào)告基因EGFP的真核表達(dá)載體,并在293T細(xì)胞中得到了有效表達(dá),為進(jìn)一步研究IL-37的功能和表達(dá)調(diào)控奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to construct the eukaryotic expression vector of interleukin-37 interleukin-37 (IL-37) fusion gene with enhanced green fluorescent protein (EGFP), and to detect its expression in 293T cells. Methods: IL-37 and EGFP genes were amplified by PCR and identified correctly by restriction endonuclease digestion and sequencing. The eukaryotic expression vector pcDNA3.1 was cloned, and two target gene fragments were ligated with Linker(G4S)3. The eukaryotic expression plasmid of IL-37-GFP fusion gene, pcDNA3.1% IL-37-EGFP, was constructed and transfected into 293T cells, and the fluorescence production was observed. The expression of IL-37 was detected by real-time fluorescence quantitative RT-PCR and Western blot. Results: by restriction endonuclease digestion and sequencing, the IL-37-GFP fusion gene linked with linker was correctly cloned into the expression vector PC DNA3.1, and the recombinant expression plasmid PC DNA3.1/IL-37-EGFP was transfected into 293T cells. Fluorescence microscopy showed that high level IL-37 m RNA and IL-37 protein were detected by RT-PCR and Western blot. Conclusion: the eukaryotic expression vector of IL-37- fusion reporter gene EGFP was constructed successfully. It was expressed effectively in 293T cells, which laid an experimental foundation for further study on the function and regulation of IL-37.
【作者單位】： 廣東省醫(yī)學(xué)分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣東醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81302244) 廣東省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):1057113038)
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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