發(fā)布時(shí)間：2018-03-11 13:21

  本文選題：仙臺(tái)病毒Tianjin株　切入點(diǎn)：缺損干擾顆粒　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：鑒于仙臺(tái)病毒Tianjin株對(duì)成年人的低致病性,以及先前的實(shí)驗(yàn)表明仙臺(tái)病毒其它基因型對(duì)腫瘤有抑制作用。本課題擬通過仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒對(duì)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)影響,探索不必外源基因的表達(dá)載體和不必具有直接溶瘤能力的病毒,利用仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒輔助治療腫瘤的方法。并且初步研究其治療腫瘤的機(jī)理,以期為腫瘤治療提供新的思路。 方法：1.敏感細(xì)胞的篩選：向所選定的癌細(xì)胞株:A549、MEL526、Libr、C6、 HT2、SW480、A498接種活仙臺(tái)病毒Tianjin株,通過細(xì)胞CPE、細(xì)胞成活率、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞培養(yǎng)液TCID50、PCR等形態(tài)學(xué)、生物學(xué)和分子生物學(xué)方法確定對(duì)該病毒敏感的細(xì)胞系。2.仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒的制備：仙臺(tái)病毒Tianjin株通過雞胚培養(yǎng)法擴(kuò)增,超速離心純化仙臺(tái)病毒Tianjin株活病毒,超速離心蔗糖密度梯度分離缺損干擾顆粒,提純出的缺損干擾顆粒使用雞胚培養(yǎng)法驗(yàn)證是否能夠繼續(xù)增殖,如果不能增殖則為仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒。3.使用仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒按不同濃度接種DC細(xì)胞,檢測(cè)DC細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、TNF-α、IFN-α等有抗腫瘤作用的細(xì)胞因子的量,驗(yàn)證仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒刺激DC細(xì)胞抗腫瘤的能力。4.使用確定出的敏感細(xì)胞系接種適宜的動(dòng)物,制作荷瘤動(dòng)物模型。腫瘤內(nèi)接種仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒,通過直接測(cè)量腫瘤大小、細(xì)胞因子檢測(cè)、PCR、免疫組化等方法評(píng)估仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒治療腫瘤的可行性,并初步確定治療的機(jī)理。 結(jié)果：大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6株對(duì)仙臺(tái)病毒Tianjin株最具高度敏感性,病毒TCID50達(dá)到11.24+0.08.其它被測(cè)試細(xì)胞株均未達(dá)到此值,一般在0-3之間。由此確定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為大鼠,品種為Wistar大鼠。在促進(jìn)DC細(xì)胞體外增值實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組比較,仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆�？梢源碳C細(xì)胞產(chǎn)生抗癌作用的細(xì)胞因子,IL-6、TNF-α、IFN-α有明顯升高(均為P0.001)。在大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組比較,仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆�？梢源碳ふ４笫蟾弑磉_(dá)有抗癌作用的細(xì)胞因子,IL-6、TNF-α、IFN-α有明顯升高(均為P0.001)。大鼠腦瘤模型造模失敗。 結(jié)論：大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞C6株對(duì)仙臺(tái)病毒Tianjin株高度敏感。仙臺(tái)病毒Tianjin株接種C6細(xì)胞后可引起細(xì)胞明顯病變,促進(jìn)凋亡,并且作用持續(xù)。仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒可以促進(jìn)樹突細(xì)胞成熟,高表達(dá)抗癌物質(zhì),有助于消除腫瘤。仙臺(tái)病毒Tianjin株缺損干擾顆粒可以刺激正常大鼠高表達(dá)有抗癌作用的細(xì)胞因子,對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤應(yīng)該有潛在的治療作用。但是大鼠荷瘤失敗,對(duì)活體腫瘤的直接作用效果未得到論證,有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Objective: in view of the low pathogenicity of Sendai virus Tianjin strain to adults, Other genotypes of Sendai virus (Sendai virus) have inhibitory effect on tumor. This study aims to study the biological effects of Sendai virus Tianjin strain defect interference granules on tumor cells. To explore the method of adjuvant therapy of Sendai virus Tianjin strain defect interference granules without the expression vector of exogenous gene and virus without direct tumor lysis ability, and to preliminarily study the mechanism of tumor treatment. In order to provide new ideas for tumor treatment. Methods: 1. Screening of sensitive cells: inoculation of Sendai virus Tianjin strain with selected cancer cell lines: cell line: A549MEL526LibrC6, HT2OSW480A498. Morphology of Sendai virus Tianjin strain was obtained by cell CPE, cell survival rate, cell apoptosis, TCID50 PCR, and so on. Biological and molecular biological methods to determine the sensitive cell line of Sendai virus. 2. Preparation of defective interfering particles of Sendai virus Tianjin strain: Sendai virus Tianjin strain was amplified by chicken embryo culture and purified by ultracentrifugation, and the live virus of Sendai virus Tianjin strain was purified by ultracentrifugation. The defect interference granules were separated by ultracentrifugation sucrose density gradient. The purified defective interference granules were tested by chicken embryo culture method to see if they could continue to proliferate. If Sendai virus Tianjin strain is not proliferative, it is the defect interfering particle of Sendai virus Tianjin strain. DC cells are inoculated with different concentration of Sendai virus Tianjin strain defect interference granules to detect the amount of cytokines produced by DC cells such as IL-6 TNF- 偽 IFN- 偽, and so on, which have anti-tumor effect, such as IL-6, TNF- 偽, IFN- 偽, and so on. To test the ability of Sendai virus Tianjin strain to stimulate DC cells to resist tumor. 4. To establish a tumor-bearing animal model by inoculating the identified sensitive cell lines with appropriate animal models. The tumor was inoculated with Sendai virus Tianjin strain defect interference particles. The feasibility of Sendai virus (Sendai virus) Tianjin strain defect interference granules in the treatment of tumor was evaluated by direct measurement of tumor size, detection of cytokines and immunohistochemical method, and the mechanism of treatment was preliminarily determined. Results: the C6 strain of glioma cells was most sensitive to Sendai virus Tianjin strain, the virus TCID50 reached 11.240.08.The other tested cell lines did not reach this value, generally in the range of 0-3. The experimental animals were identified as rats. Sendai virus Tianjin strain defect interference granule can stimulate DC cells to produce anticancer effect, the cytokine, IL-6, TNF- 偽 and IFN- 偽 (all are P0.001), are significantly increased in the experiment of promoting DC cell proliferation in vitro, compared with the control group, in vivo, Sendai virus strain Tianjin strain can stimulate DC cells to produce anti-cancer effect. Compared with the control group, the Sendai virus Tianjin strain defect interference granule could stimulate the high expression of IL-6 TNF- 偽 and IFN- 偽 in normal rats (all P0.001). The rat brain tumor model failed. Conclusion: C6 strain of rat brain glioma cells is highly sensitive to Sendai virus Tianjin strain. Sendai virus Tianjin strain inoculated with C6 cells can cause obvious cytopathic changes and promote apoptosis. Sendai virus Tianjin strain defect interference granule can promote dendritic cell maturation and high expression of anticancer substances. Sendai virus Tianjin strain can stimulate high expression of anti-cancer cytokines in normal rats, which should have potential therapeutic effect on glioma in rats. The direct effect on tumor in vivo has not been demonstrated and further research is needed.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R373;R739.41

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本文編號(hào)：1598342