發(fā)布時(shí)間：2018-03-10 12:37

  本文選題：登革病毒　切入點(diǎn)：NS1蛋白　出處：《暨南大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的 通過制備登革病毒NS1蛋白多克隆抗體及單克隆抗體,并研究其特異性,初步建立登革病毒NS1抗原檢測(cè)技術(shù)。 方法 1.在已成功構(gòu)建的登革病毒NS1蛋白畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上,利用該系統(tǒng)進(jìn)行NS1蛋白的分泌表達(dá)；并免疫BALB/C小鼠,制備多克隆抗體。 2.將獲得的多克隆抗體,用ELISA與免疫熒光法,研究其特異性。 3.復(fù)蘇登革病毒NS1單克隆抗體細(xì)胞株,培養(yǎng)擴(kuò)增,制備腹水抗體,并純化,用ELISA與免疫熒光法,研究其特異性。 4.以登革病毒NS1單克隆抗體為競(jìng)爭(zhēng)抗體,采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA初步建立了登革病毒NS1抗原檢測(cè)技術(shù)。 結(jié)果 1.由轉(zhuǎn)化子Pichia Pastoris-NS 1經(jīng)過復(fù)蘇、誘導(dǎo)表達(dá)、鑒定和低溫真空凍干,成功獲得重組表達(dá)的NS1蛋白凍干粉。 2.將重組表達(dá)的蛋白純化對(duì)BALB/C小鼠進(jìn)行免疫,經(jīng)鑒定得到特異性針對(duì)NS1的高免血清抗體,ELISA測(cè)定多克隆抗體的效價(jià)為1：13500。經(jīng)ELISA與免疫熒光兩種方法檢測(cè),該多克隆抗體與四型登革病毒有交叉反應(yīng),。為下一步進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞融合,成功篩選出另外一株抗四型登革病毒單克隆抗體奠定基礎(chǔ) 3.成功復(fù)蘇已有的登革病毒NS1單克隆抗體細(xì)胞株,制備出腹水型單克隆抗體,用ELISA與免疫熒光法證明,該單克隆抗體與四型登革病毒有交叉反應(yīng)。 4.采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法初步建立了登革病毒NSl抗原檢測(cè)技術(shù)。 結(jié)論 由轉(zhuǎn)化子Pichia Pastoris-NS1表達(dá)的重組蛋白具有較強(qiáng)的免疫原性,成功制備與四型病毒有交叉反應(yīng)的鼠抗NSl多克隆抗體。登革病毒NSl單克隆抗體,與四型登革病毒有交叉反應(yīng)。初步建立了登革病毒NSl抗原檢測(cè)技術(shù)。
[Abstract]:Purpose. The polyclonal antibody and monoclonal antibody against dengue virus NS1 protein were prepared and its specificity was studied. The detection technique of dengue virus NS1 antigen was established. Method. 1. On the basis of the successfully constructed Pichia pastoris expression system of dengue virus NS1 protein, the system was used to secrete and express NS1 protein, and the polyclonal antibody was prepared by immunizing BALB/C mice. 2. The specificity of polyclonal antibody was studied by ELISA and immunofluorescence. 3.The resuscitation dengue virus NS1 monoclonal antibody cell line was cultured and amplified, the ascites antibody was prepared and purified, and its specificity was studied by ELISA and immunofluorescence. 4. Using the monoclonal antibody of dengue virus NS1 as the competitive antibody, an indirect competitive ELISA technique was established for the detection of dengue virus NS1 antigen. Results. 1. The recombinant NS1 protein freeze-dried powder was successfully obtained by resuscitation, induction, expression, identification and vacuum freeze-drying of the transformant Pichia Pastoris-NS 1. 2. BALB/C mice were immunized by purification of recombinant protein. The titer of polyclonal antibody was 1: 13500 by Elisa, which was specific to NS1, and was detected by ELISA and immunofluorescence. The polyclonal antibody has cross reaction with dengue virus type IV. It lays the foundation for the further fusion of hybridoma cells and the screening of another monoclonal antibody against dengue virus type IV successfully. 3. After successfully resuscitating the existing NS1 monoclonal antibody cell line, ascites monoclonal antibody was prepared. It was proved by ELISA and immunofluorescence that the monoclonal antibody interacted with dengue virus type IV. 4. The detection technique of dengue virus NSl antigen was established by indirect competitive ELISA method. Conclusion. The recombinant protein expressed by transformant Pichia Pastoris-NS1 has strong immunogenicity. Mouse polyclonal antibody against NSl and NSl monoclonal antibody against dengue virus were successfully prepared. The technique of NSl antigen detection of dengue virus was preliminarily established by cross reaction with type IV dengue virus.
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392.1

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本文編號(hào)：1593369