本文選題：鼻咽癌　切入點(diǎn)：轉(zhuǎn)移　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 腫瘤是危害人類健康的重大疾病之一,特別是惡性腫瘤,最易發(fā)生轉(zhuǎn)移,遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移是腫瘤病人死亡的首要原因。鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我國發(fā)病率最高的十大惡性腫瘤之一,嚴(yán)重危害著我國人民的健康。NPC發(fā)病隱匿,發(fā)現(xiàn)之前常常已有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,臨床確診的患者據(jù)報(bào)道約64.1%發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在某些癌癥如頭頸部腫瘤發(fā)生在口腔和口咽時(shí)的治療過程中,早期探測原發(fā)瘤的區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是選擇合適治療方案的核心問題。因此,探索癌癥淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移候選基因,對深入了解腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移機(jī)制有著重要的意義。 腫瘤并不是均一的整體,是由各種不同轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞亞群構(gòu)成的。腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程,轉(zhuǎn)移的發(fā)生發(fā)展是宿主因子與惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)在的特性相互作用的結(jié)果,是一個(gè)高選擇性的過程,只有具有轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞亞群才能發(fā)生轉(zhuǎn)移。腫瘤的定向轉(zhuǎn)移是指特定的腫瘤能夠向特定的器官轉(zhuǎn)移,是轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞與特定的器官微環(huán)境相互作用的結(jié)果。根據(jù)腫瘤轉(zhuǎn)移的這一特性,有不少研究人員實(shí)驗(yàn)性的施加選擇壓力,分離出適宜特定器官微環(huán)境的腫瘤轉(zhuǎn)移亞群,為研究腫瘤的定向轉(zhuǎn)移提供更為純凈的研究對象。 腫瘤細(xì)胞原位移植技術(shù)的出現(xiàn),極大的推動了腫瘤動物模型的發(fā)展。將人類腫瘤組織或腫瘤細(xì)胞原位種植到免疫缺陷的動物體內(nèi),能夠很好的模擬腫瘤在體內(nèi)的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移過程,復(fù)制出與患者十分接近的臨床特征,為研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及開展實(shí)驗(yàn)性的治療干預(yù),提供了良好的研究對象。近年來新興的腫瘤分子成像技術(shù),使人們能夠在活體動物體內(nèi)觀察腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程,提高人們對微小腫瘤和腫瘤微轉(zhuǎn)移的認(rèn)識。綠色熒光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)廣泛應(yīng)用于可視化動物模型的研究,使得人們可以在活體狀態(tài)下觀察腫瘤的演進(jìn)規(guī)律,極大地推動了腫瘤的早期生長、發(fā)展規(guī)律的研究,有效的彌補(bǔ)了人體腫瘤僅能通過活檢、手術(shù)標(biāo)本和尸檢等進(jìn)行分析的不足。大多數(shù)其它的惡性腫瘤可以從手術(shù)切除標(biāo)本中獲得較大量組織以供研究,但NPC研究僅能依賴微小的活檢組織。本實(shí)驗(yàn)通過對已標(biāo)記GFP的人鼻咽癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株5-8F-EGFP進(jìn)行裸鼠體內(nèi)連續(xù)傳代,建立鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移動物模型并且篩選獲得高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛能的鼻咽癌5-8F-LN(EGFP)NPC細(xì)胞,對進(jìn)一步探索淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有重要的作用。人為地施加選擇壓力,成功的建立了人鼻咽癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移動物模型,并篩選到高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛能的鼻咽癌5-8F-LN細(xì)胞。 基因芯片(Gene Chip)技術(shù)是基于核酸探針互補(bǔ)雜交的原理而開發(fā)的一種檢測基因表達(dá)水平的新技術(shù)。它具有靈敏度高、檢測量大等優(yōu)點(diǎn),可同時(shí)檢測成千上萬個(gè)基因的表達(dá)情況或平行對比這些基因在不同樣本中的表達(dá),被認(rèn)為是一種高通量檢測基因表達(dá)水平的方法。因此,基因芯片技術(shù)可以成為探討腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制的主要手段。 鼻咽癌5-8F細(xì)胞株成瘤且具有高轉(zhuǎn)移潛能,6-10B細(xì)胞株成瘤不發(fā)生轉(zhuǎn)移,將兩株細(xì)胞作芯片分析獲得307個(gè)差異性表達(dá)基因,它們的表達(dá)差異均在兩倍以上;我們通過文獻(xiàn)挖掘近5年的資料獲得大量癌癥如:乳腺癌,頭頸部鱗癌等腫瘤的基因芯片分析得到的轉(zhuǎn)移標(biāo)簽基因1638個(gè)和42個(gè)其它文獻(xiàn)公布淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因共計(jì)1680個(gè)。將這些文獻(xiàn)篩選得到的腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移簽名基因和我們5-8F/6-10B差異性表達(dá)基因做比較得到21個(gè)重疊的基因(來源于10篇文獻(xiàn))。接著利用MILANO軟件進(jìn)行文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)TPM2、ADM、IRF1、KRT19、EGR1、CAV1和IGFBP6在腫瘤的研究方面的出現(xiàn)的文獻(xiàn)較多(表1)。當(dāng)我們結(jié)合GenCLIP3.3軟件分析這21個(gè)基因后,得到IGFBP6,ELF3,DUSP1,CXCL2,CAV1,EGR1,IRF1,GAS1,ADM,KRT19和KRT13文獻(xiàn)聯(lián)系比較密切(圖1.)。最后,我們結(jié)合基因功能分析篩選獲得與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)的3個(gè)高表達(dá)的簽名基因ADM,IRF1和CAV1可能和鼻咽癌5-8F細(xì)胞株高轉(zhuǎn)移特性有關(guān)。 采用SYBR Green I qRT-PCR(quantitatie realtime PCR)技術(shù)對靶基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量分析是近年來發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù)。SYBR Green I是一種能與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)光的熒光染料。因此,它的熒光信號強(qiáng)度與雙鏈DNA的數(shù)量相關(guān),可以根據(jù)熒光信號檢測出PCR體系中存在的雙鏈DNA數(shù)量,并且通過熔解曲線的分析,排除非特異性擴(kuò)增的干擾,對靶基因進(jìn)行定量分析,準(zhǔn)確性和靈敏性都比普通RT-PCR高。通過△△Ct方法利用SYBR Green I qRT-PCR技術(shù)能夠很好的分析基因表達(dá)相對差異。用△△CT統(tǒng)計(jì)分析基因表達(dá)相對定量的方法在很多文獻(xiàn)中有報(bào)道,由于這種方法無需做標(biāo)準(zhǔn)曲線,因此比絕對定量方法更加簡便可行。 使用qRT-PCR的方法驗(yàn)證ADM,IRF1和CAV1在5-8F-EGFP,6-10B-EGFP,5-8F-LN和NP69四種細(xì)胞中的表達(dá)情況,我們發(fā)現(xiàn)CAV1在5-8F細(xì)胞株的表達(dá)比其在6-10B細(xì)胞株中的表達(dá)高2.153±0.120倍,且兩者之間表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(p=0.014);而IRF1在3株細(xì)胞(5.8F-EGFP,6-10B-EGFP和5-8F-LN)中表達(dá)均明顯高出永生化細(xì)胞株NP69的4.823±1.131、3.390±1.004和4.263±0.965倍;ADM在四種細(xì)胞中的表達(dá)情況無明顯差別。 結(jié)合qRT-PCR對鼻咽癌細(xì)胞株的分析結(jié)果,在5-8F和6-10B鼻咽癌組織中用免疫組織化學(xué)的方法檢測IRF1和CAV1的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)IRF1在5-8F腫瘤組織塊中的表達(dá)強(qiáng)于在6-10B中的表達(dá);而CAV1在5-8F腫瘤組織的邊緣表達(dá)明顯強(qiáng)于6-10B,CAV1在5-8F腫瘤組織邊緣相對高表達(dá)可能與其高轉(zhuǎn)移和侵襲能力有關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R-332;R739.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 易煒;夏云飛;;鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)基礎(chǔ)研究[J];中華腫瘤防治雜志;2007年22期

2 游紹進(jìn),姚開泰,曹亞,胡維新;Epstein-Barr病毒潛伏狀態(tài)與鼻咽癌的關(guān)系[J];中華腫瘤雜志;1996年01期

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本文編號：1576435