本文選題：胃腸腫瘤　切入點：胸腺肽α1　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2008年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 胃腸道腫瘤是臨床上最常見惡性腫瘤之一,常規(guī)的治療手段,包括手術(shù)、化療和放療,均未能有效提高病人尤其晚期病人的治愈率和生存率。近年,在腫瘤免疫學(xué)研究領(lǐng)域,樹突狀細胞(DCs)為基礎(chǔ)的免疫治療被認為是諸多腫瘤疫苗策略中最具希望者之一。DCs作為效力最強的抗原呈遞細胞(APCs),具有高效攝取、加工、提呈腫瘤相關(guān)抗原(TAA),并激活初始免疫反應(yīng)的獨特功能。然而,許多研究表明腫瘤具有免疫逃逸的生物學(xué)特性,在腫瘤微環(huán)境中未成熟DCs因分化成熟受限而積聚增加,成熟的功能性DCs數(shù)量下降,誘導(dǎo)T淋巴細胞失能或調(diào)節(jié)性T細胞(Tregs)產(chǎn)生,最終導(dǎo)致抗腫瘤免疫抑制形成。己有大量的人和動物實驗證明,應(yīng)用外周血單核細胞來源的DCs在體外誘導(dǎo)活化,可使其功能從腫瘤微環(huán)境下的免疫抑制狀態(tài)完全恢復(fù),并負載腫瘤抗原制備為DCs疫苗回輸體內(nèi),能夠觀察到TAA-特異性T細胞抗腫瘤免疫反應(yīng),并在部分病人獲得了腫瘤部分消退的臨床效果。盡管這些研究結(jié)果令人鼓舞,但迄今為止,DCs疫苗在癌癥患者體內(nèi)所誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)尚未足以達到非常突出的治愈性的臨床治療作用。所以,DCs疫苗的效力尚需進一步提高,以期成功應(yīng)用于臨床。 增強DCs疫苗抗腫瘤免疫效應(yīng)的策略包括:①調(diào)整DCs的成熟過程;②增強CD4+ T細胞免疫;③阻斷調(diào)節(jié)性免疫抑制途徑;④靶向腫瘤形成中的有效抗原靶點。腫瘤的成功治療需要多種方法結(jié)合,多個步驟依次進行,DCs疫苗與免疫佐劑類活性物聯(lián)合應(yīng)用可以解決其免疫效力不足的問題。實驗表明,輔以CD40L、IL-12、IL-2、熱休克蛋白Hsp70等活性因子治療,可增強并延續(xù)DCs誘導(dǎo)的CD4+Th1細胞反應(yīng)和特異性CTLs殺傷作用,但臨床應(yīng)用存在毒副作用較大的問題。胸腺肽α1(Tα1)是一種功能強大的免疫調(diào)節(jié)劑,已應(yīng)用于臨床多年,毒副作用小,其可促進T淋巴細胞分化成熟和增殖,增加IL-2、IL-6、IFN-γ分泌,且研究報道對小鼠骨髓和正常人外周血來源DCs分化成熟有促進作用,可刺激DCs分泌IL-12和增強Th1反應(yīng)。 DCs疫苗制備大多采用負載腫瘤細胞裂解物或總mRNA等腫瘤細胞全抗原的治療方案。此方案的優(yōu)勢在于疫苗有可能誘導(dǎo)激活多克隆T細胞擴增和多腫瘤抗原特異性的CTLs,而且應(yīng)用病人自體全腫瘤抗原無需進行HLA配型,疫苗的安全性也已得到一定驗證,臨床試驗很少觀察到自身免疫的發(fā)生。構(gòu)建適宜的動物模型是實驗研究的重要組成部分,本研究中經(jīng)尾靜脈注射人T淋巴細胞,借助先天性T細胞免疫功能缺陷的荷瘤裸鼠,構(gòu)建人源化T細胞免疫動物模型,通過體內(nèi)、外實驗,對Tα1促進DCs分化成熟以及增強DCs疫苗的抗腫瘤效應(yīng)進行客觀評估,進一步探討Tα1新的免疫作用途徑和靶細胞,以期為開展臨床DCs疫苗抗腫瘤免疫治療提供一種有效的、具有免疫佐劑活性的輔助免疫因子。 本研究共分以下四個方面: 第一部分胃腸腫瘤患者外周血樹突狀細胞功能學(xué)及其與CD4+CD25+T細胞失衡相關(guān)性的研究 目的:探討胃腸腫瘤(GIC)患者外周血單個核細胞(PBMCs)來源樹突狀細胞和CD4+CD25+T細胞(Tregs)的免疫功能狀態(tài)、兩者的相關(guān)性,以及與腫瘤臨床病理分期和手術(shù)的關(guān)系。 方法:收集早期胃腸癌(Ⅰ/Ⅱ期)患者術(shù)前、術(shù)后第7天、以及晚期癌(Ⅲ/Ⅳ期)患者外周血,以健康成人外周血為對照。提取PBMCs,流式細胞術(shù)(FACS)分別檢測Tregs占CD4+T細胞的比例。PBMCs經(jīng)貼壁法分離提取DCs,經(jīng)rhGM-CSF、rhIL-4體外擴增培養(yǎng)至第5天,獲得未成熟DCs (imDCs),FACS檢測表型;imDCs經(jīng)rhTNF-α誘導(dǎo)培養(yǎng)至第7天,獲得成熟DCs (mDCs),MTT法和ELISA法分別檢測mDCs與自體T細胞混合培養(yǎng)時mDCs刺激T細胞增殖能力以及上清液中IFN-γ的含量。 結(jié)果:晚期胃腸癌患者imDCs表型HLA-DR、CD80及CD86均顯著低于健康成人和早期癌患者(P0.01);早期胃腸癌術(shù)后第7天患者imDCs表型HLA-DR及CD86表達顯著低于健康成人(P0.05)。晚期胃腸癌患者mDCs刺激自體T細胞增殖及分泌IFN-γ的能力與健康成人相比均有所減弱(P=0.073,P= 0.182),CD4+T細胞中Tregs的比例顯著低于健康成人和早期癌患者(P0.001);早期胃腸癌患者術(shù)后Tregs比例略低于術(shù)前(P=0.148)及健康成人(P=0.068)。HLA-DR、CD86表達與Tregs比例呈負相關(guān)性。 結(jié)論:胃腸腫瘤患者尤其晚期和術(shù)后患者外周血DCs功能失調(diào)以及Tregs失衡可能和機體抗腫瘤細胞免疫耐受密切相關(guān)。 第二部分胸腺肽α1對胃腸腫瘤患者外周血樹突狀細胞功能和CD4+CD25+ T細胞失衡影響的實驗研究 目的:探討Tα1治療前、后GIC患者外周血PBMCs來源DCs的免疫功能狀態(tài)及CD4+CD25+ T細胞失衡的變化。 方法:早期胃腸癌(Ⅰ/Ⅱ期)手術(shù)患者于術(shù)后第1~6天連續(xù)皮下注射Tα1,1.6mg/次/日,于術(shù)日和術(shù)后第7天晨分別采集外周靜脈血;晚期患者入院后第4~9天連續(xù)皮下注射Tα1,1.6mg/次/日,并于入院后第4、10天晨分別采集外周靜脈血。提取PBMCs,FACS分別檢測Tregs占CD4+T細胞的比例。PBMCs經(jīng)貼壁法分離提取DCs,經(jīng)rhGM-CSF、rhIL-4體外擴增培養(yǎng)至第5天,獲得未成熟imDCs,FACS檢測表型;imDCs經(jīng)rhTNF-α誘導(dǎo)培養(yǎng)至第7天,獲得mDCs,MTT法和ELISA法分別檢測mDCs與自體T細胞混合培養(yǎng)時mDCs刺激T細胞增殖能力以及上清液中IFN-γ的含量。 結(jié)果:晚期胃腸癌患者imDCs表型HLA-DR、CD80及CD86治療后均顯著高于治療前(P0.01);早期胃腸癌術(shù)后第7天患者imDCs表型HLA-DR及CD86治療后均顯著高于治療前(P0.05)。晚期胃腸癌患者mDCs刺激自體T細胞增殖及分泌IFN-γ的能力治療后與治療前相比均顯著增強(P0.01),CD4+T細胞中Tregs的比例治療后略低于治療前(P=0.065);早期胃腸癌術(shù)后第7天患者mDCs刺激自體T細胞增殖及分泌IFN-γ的能力治療后與治療前和未治療組相比均顯著增強(P0.05),Tregs比例較治療前及治療組基本無變化。 結(jié)論:Tα1治療胃腸腫瘤患者尤其晚期和術(shù)后患者外周血可以改善DCs免疫功能。 第三部分胸腺肽α1對負載結(jié)腸癌腫瘤抗原的樹突狀細胞功能影響的體外實驗研究 目的:觀察Tα1對結(jié)腸癌細胞裂解物(TuLy)負載DCs(LyDCs)的表型和功能的影響。 方法:從健康人外周血單個核細胞中常規(guī)誘導(dǎo)培養(yǎng)imDCs,并負載TuLy后制備LyDCs疫苗。Tα1體外刺激imDCs、LyDCs,FACS檢測DCs表型變化;ELISA法檢測LyDCs與自體T細胞共培養(yǎng)時,Tα1對LyDCs分泌IL-12以及活化T細胞分泌IFN-γ水平的影響;MTT法檢測LyDCs經(jīng)Tα1刺激后所誘導(dǎo)的細胞毒活性的變化。 結(jié)果:Tα1刺激后的imDCs、LyDCs表型HLA-DR、CD80、CD86、CD83均上調(diào)(P㩳0.01);Tα1刺激組上清液中細胞因子IL-12和IFN-γ的水平較未刺激組增加(P㩳0.05,P㩳0.01);LyDCs經(jīng)Tα1刺激后誘導(dǎo)的CTLs細胞毒活性較未經(jīng)Tα1刺激組增強(P㩳0.01)。 結(jié)論:Tα1可促進DCs分化成熟,并能增強LyDCs誘導(dǎo)的CD4+Th1細胞反應(yīng)和CTLs的殺傷效應(yīng)。Tα1與LyDCs疫苗聯(lián)合應(yīng)用時具有較好的免疫佐劑活性。 第四部分胸腺肽α1聯(lián)合樹突狀細胞疫苗對人源化免疫重建裸鼠結(jié)腸癌免疫抑制效應(yīng)的體內(nèi)實驗研究 目的:觀察Tα1聯(lián)合結(jié)腸癌細胞裂解物致敏樹突狀細胞LyDCs對人源化免疫重建裸鼠結(jié)腸癌的免疫治療效應(yīng)。 方法:常規(guī)未成熟DCs負載結(jié)腸癌細胞裂解物制備LyDCs疫苗。HT-29結(jié)腸癌裸鼠成瘤后,經(jīng)尾靜脈注射人外周血T淋巴細胞6×106/只,2天后,流式細胞儀檢測裸鼠人源性CD4+、CD8+T細胞;將人源化免疫重建裸鼠隨機分為3組,分別用LyDCs+Tα1、LyDCs和生理鹽水皮下免疫注射治療;治療后7天,體外觀察各組裸鼠脾臟淋巴細胞的腫瘤殺傷作用及IFN-γ、IL-4分泌水平,實驗結(jié)束時,觀察LyDCs聯(lián)合Tα1對結(jié)腸癌裸鼠的體內(nèi)抑瘤作用。 結(jié)果:免疫重建裸鼠均檢測到人源性CD4+、CD8+T細胞;LyDCs+Tα1組裸鼠脾臟T淋巴細胞的腫瘤殺傷作用與LyDCs組比較差異顯著(P㩳0.01),LyDCs+Tα1組T細胞的IFN-γ分泌水平與LyDCs組比較差異顯著(P㩳0.01);接種HT-29細胞58天后,LyDCs+Tα1組、LyDCs組抑瘤率分別為60.41%、37.20%,兩組之間抑瘤效應(yīng)比較差異顯著(P㩳0.01),兩組的抑瘤效應(yīng)與對照組比較分別(P㩳0.01)。 結(jié)論:Tα1能增強LyDCs誘導(dǎo)的CD4+Th1細胞反應(yīng)和CTLs殺傷效應(yīng),對DCs疫苗的抗腫瘤免疫治療功效具有明顯的放大作用。
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【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【參考文獻】

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1 王歡;周芳堅;王其京;秦自科;黃麗惜;劉卓煒;韓輝;李永強;陳詩萍;夏建川;;負載自體腫瘤細胞裂解物的DC疫苗聯(lián)合CIK治療晚期腎癌的臨床觀察——附10例報告[J];癌癥;2006年05期

2 張久聰;董茜;邵彬;;胸腺肽α1的作用機制和臨床應(yīng)用[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2006年04期

3 程樹群,吳孟超,陳漢,沈鋒,楊家和,趙玉祥,莫莜衛(wèi);胸腺肽α_1對原發(fā)性肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的影響[J];中華肝膽外科雜志;2004年09期

4 蔡建輝,劉三光;樹狀細胞誘導(dǎo)的腫瘤免疫治療[J];中華實驗外科雜志;2004年08期

5 梁朝霞,程琪,陳懷增,謝幸,葉大風(fēng);人免疫重建荷人人乳頭瘤病毒16陽性宮頸癌-嚴重聯(lián)合免疫缺陷鼠模型的建立及其免疫學(xué)特性研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2004年17期

6 楊云梅,呂雪英,黃衛(wèi)東,沈美亞;胸腺肽α1對老年晚期惡性腫瘤患者細胞免疫功能的影響[J];浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2003年04期

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本文編號：1568873