本文選題：PTD-SARA融合蛋白　切入點(diǎn)：表達(dá)　出處：《中國(guó)生物制品學(xué)雜志》2009年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的在大腸桿菌中表達(dá)PTD-SARA融合蛋白,并對(duì)其進(jìn)行純化和鑒定。方法使用大腸桿菌偏愛密碼子合成PTD-SARA全長(zhǎng)基因,將其克隆入載體pQE-30中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pQE-30-PTD-SARA,轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌M15,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni2+-NTA親和層析純化后,進(jìn)行Western blot鑒定及N-端測(cè)序。結(jié)果重組表達(dá)質(zhì)粒pQE-30-PTD-SARA經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定證明構(gòu)建正確。1.0mmol/LIPTG誘導(dǎo)4h,目的蛋白的表達(dá)量最高,約占菌體總蛋白的25%,主要以包涵體形式存在。純化的融合蛋白純度為94%,濃度為0.2mg/ml,且具有良好的反應(yīng)原性,N-端有14個(gè)氨基酸。結(jié)論已成功表達(dá)并純化了PTD-SARA融合蛋白,為其功能的研究奠定了基礎(chǔ),也為臨床防治腎臟纖維化提供了一個(gè)新的策略。
[Abstract]:Objective to express and identify the PTD-SARA fusion protein in Escherichia coli. Methods the full-length PTD-SARA gene was synthesized by using the preferred codon of Escherichia coli and cloned into the vector pQE-30. The recombinant expression plasmid pQE-30-PTD-SARAwas constructed, and the expression was induced by M15TG-induced expression. The expression product was purified by Ni2 -NTA affinity chromatography. Results the recombinant expression plasmid pQE-30-PTD-SARA was identified by double enzyme digestion and sequencing. It was proved that the recombinant plasmid was constructed correctly. 1.0 mmol / L IPTG was induced for 4 h, and the expression of the target protein was the highest. The purity of purified fusion protein is 94 mg / ml, the concentration is 0.2 mg / ml, and there are 14 amino acids in the N- terminal of the N- terminal protein. Conclusion the PTD-SARA fusion protein has been successfully expressed and purified. It lays a foundation for the study of its function and provides a new strategy for clinical prevention and treatment of renal fibrosis.
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院老年病科;第四軍醫(yī)大學(xué)生物技術(shù)中心;
【分類號(hào)】：Q786

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本文編號(hào)：1563358