本文關(guān)鍵詞： 碘過量 FRTL細(xì)胞 線粒體 超氧化物 凋亡 細(xì)胞色素C　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 研究過量碘化鉀(potassium iodide, KI)對Fisher大鼠甲狀腺細(xì)胞(Fisher rat thyroid cell line, FRTL)線粒體超氧化物生成、細(xì)胞活力及細(xì)胞凋亡的影響,探討碘過量對FRTL細(xì)胞過氧化損傷的發(fā)生、發(fā)展過程和機(jī)制,并用促甲狀腺激素(thyrotropin, TSH)或丙基硫氧嘧啶(propylthiouracil, PTU)進(jìn)行干預(yù),研究其對碘過量導(dǎo)致的FRTL細(xì)胞過氧化損傷的影響。 1.應(yīng)用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色法檢測不同濃度(10-7mol/L～10-2mol/L) KI對FRTL細(xì)胞活力的影響,相應(yīng)濃度氯化鉀(potassium chloride, KCl)作為滲透壓對照。 2.分別用10-4 mol/L、10-2mol/L KI處理2h、4h、24h,利用MitoSOX通過流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡檢測FRTL細(xì)胞線粒體超氧化物生成,利用免疫細(xì)胞化學(xué)法和酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測FRTL細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞色素C(cytochrome c, cyt c)釋放,利用乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)測定試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)液上清的LDH活力,利用碘化丙啶(propidium iodide, PI)通過流式細(xì)胞術(shù)檢測死亡細(xì)胞百分比(percent of dead cells),DNA瓊脂糖電泳檢測DNA斷裂片段,透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)改變。 3.用10"4mol/LKI加或不加10U/L TSH處理24h,檢測FRTL細(xì)胞線粒體超氧化物生成和細(xì)胞活力。 4.用10-4mol/LKI加或不加300μmol/L PTU處理2h、24h,檢測FRTL細(xì)胞線粒體超氧化物生成和細(xì)胞活力。 1.處理30min,10-7～10-2mol/LKI或KCl不影響FRTL細(xì)胞活力(p0.05)；處理24h,10-5～10-2mol/LKI明顯降低FRTL細(xì)胞活力(p0.05),10-7～10-2 mol/LKCl不影響細(xì)胞活力(p0.05)。 2.碘過量對FRTL細(xì)胞過氧化損傷的時(shí)效性 (1)處理2h、4h、24h,FRTL細(xì)胞內(nèi)超氧化物生成增加,以2h增加最明顯。 (2)處理2h、4h、24h,cyt c釋放增加(p0.01),4h最明顯。 (3)處理4h、24h,培養(yǎng)液上清LDH活力明顯增加(p0.01),死亡細(xì)胞百分比升高。 (4)處理24h,出現(xiàn)DNA ladder。 (5)電鏡下處理2h,線粒體腫脹,4h細(xì)胞膜、線粒體膜溶解、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、髓磷體形成,24h凋亡小體出現(xiàn)。 3. TSH或PTU對碘過量導(dǎo)致的FRTL細(xì)胞過氧化損傷的影響 (1)處理24h,KI+TSH組線粒體超氧化物生成明顯低于KI組(p0.05),細(xì)胞活力明顯高于KI組(p0.05)。 (2)處理2h,KI+PTU組線粒體超氧化物生成明顯低于KI組(p0.01),處理24h,KI+PTU組細(xì)胞活力明顯高于KI組(p0.05)。 1.KI對FRTL細(xì)胞活力的影響具有濃度依賴性。 2.碘過量對FRTL細(xì)胞過氧化損傷具有時(shí)效性,2h導(dǎo)致線粒體氧化損傷,伴有cyt c釋放,4h細(xì)胞膜受損,線粒體膜溶解,24h細(xì)胞損傷進(jìn)一步加重,并出現(xiàn)細(xì)胞凋亡。 3. TSH(10U/L)在一定程度上可以減輕碘過量對FRTL細(xì)胞的過氧化損傷。 4.PTU可以減輕碘過量對FRTL細(xì)胞過氧化損傷。
[Abstract]:To study the effects of excessive potassium iodium iodide (Ki) on the production of mitochondrial superoxide, cell viability and apoptosis in Fisher rat thyroid cells, and to explore the occurrence, development and mechanism of excessive iodine on the peroxidation injury of FRTL cells. The effects of thyrotropin (TSH) or propylthiouracil (PTU) on the peroxidation of FRTL cells induced by iodine excess were studied. 1.Methylthiazolyl thiazolyl tetrazolium (MTT) colorimetric assay was used to detect the effects of different concentrations of 10 ~ (-7) mol / L ~ (-2) mol / L ~ (-1) Ki on the viability of FRTL cells, and potassium chloride potassium chloride (KCl) was used as osmotic pressure control. 2.It was treated with 10-4 mol / L 10-2mol / L Ki for 2 h ~ 4 h ~ (-1) for 24 h respectively. Mitochondrial superoxide production in FRTL cells was detected by flow cytometry and fluorescence microscope by MitoSOX. The release of cytochrome C (cyt c) from FRTL cells was detected by immunocytochemistry and enzyme linked immunosorbent assay.Lactic dehydrogenase lactate dehydrogenase (LDH) was used to detect the activity of LDH in supernatant of cell culture medium. Using propidium iodide (Pi), the percent percent of dead cells were detected by flow cytometry to detect the fragmentation of DNA fragments by agarose electrophoresis. The ultrastructural changes were observed by transmission electron microscopy (TEM). 3. FRTL cells were treated with 10 "4mol / L Ki plus or without 10 U / L TSH for 24 h to detect mitochondrial superoxide production and cell viability. 4. FRTL cells were treated with 10-4 mol / L LKI for 2 h or without 300 渭 mol/L PTU for 24 h to detect mitochondrial superoxide production and cell viability. 1. Treatment of 10-7 mol / L LKI or KCl for 30 min did not affect the viability of FRTL cells (p0.05), but the treatment of 10-5 mol / LKI for 24 h significantly decreased the viability of FRTL cells (p0.05 ~ 10-7 / 10 ~ (-2) mol/LKCl), and did not affect the viability of FRTL cells (P _ (0.05) ~ (-1) ~ (-1) ~ (-1) ~ (-1) ~ (-1) ~ (-1) ~ (-1)). 2. Effect of iodine excess on peroxidation injury of FRTL cells. 1) the superoxide production in FRTL cells was increased at 2 h, 2 h and 24 h, especially at 2 h. (2) the release of cyt c increased at 4 h after treatment for 4 h and increased significantly for 4 h after treatment. (3) the activity of LDH in supernatant of culture medium increased significantly at 4 h or 24 h, and the percentage of dead cells increased. 4) DNA ladder appeared after 24 h treatment. Under electron microscope for 2 h, mitochondria swelled at 4 h of cell membrane, mitochondria membrane dissolved, endoplasmic reticulum dilated, myelophosphorus formed 24 h apoptotic corpuscles appeared. 3. Effects of TSH or PTU on peroxidation injury of FRTL cells induced by iodine excess. (1) the mitochondrial superoxide production in Ki TSH group was significantly lower than that in Ki group at 24 h, and the cell viability was significantly higher than that in Ki group. (2) the mitochondrial superoxide production in Ki PTU group was significantly lower than that in Ki group at 2 h, and the cell viability in Ki PTU group was significantly higher than that in Ki group at 24 h. 1. The effect of Ki on FRTL cell viability was concentration-dependent. 2. The oxidative damage of FRTL cells was induced by iodine overdose for 2 h, accompanied by the damage of cyt c release cell membrane for 4 h, the damage of mitochondria membrane dissolved for 24 h was further aggravated, and apoptosis occurred. 3. TSH 10 U / L can alleviate the peroxidation damage of FRTL cells induced by iodine excess to some extent. 4. PTU could reduce the peroxidation injury of FRTL cells induced by iodine excess.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R363

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