本文關(guān)鍵詞： 炭疽芽孢桿菌 芽孢蛋白 營養(yǎng)體蛋白 抗原 免疫蛋白質(zhì)組學(xué)　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 炭疽是由炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis, BA)引起的一種烈性人畜共患傳染病。由于炭疽芽孢易于大量培養(yǎng)、極難被殺滅、可通過氣溶膠途徑傳播,并且引起的吸入性肺炭疽死亡率較高等特點,所以長期以來一直被某些國家認為是首選的生物戰(zhàn)劑。自美國“911”事件發(fā)生后,BA研究再次成為世界各國關(guān)注的熱點。而預(yù)防炭疽最有效的方法是疫苗,所以炭疽疫苗的研究成為目前研究的熱點,而從BA中篩選具有免疫原性的蛋白質(zhì)則是疫苗設(shè)計的關(guān)鍵。本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法,大規(guī)模篩選BA營養(yǎng)體和芽孢蛋白中可能存在的免疫原性蛋白質(zhì),這將為我們深化炭疽芽孢桿菌的認識,以及檢測、診斷炭疽芽孢桿菌與對炭疽的早期治療提供靶標(biāo)。主要研究結(jié)果如下： 以BA A16R菌株為實驗菌株,采用固態(tài)培養(yǎng),在含有200 mL的LB固態(tài)培養(yǎng)基的羅氏瓶內(nèi)進行培養(yǎng),先放于37℃的培養(yǎng)箱內(nèi)正置一天后,再倒置于30℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)10-15 d,用4℃滅菌純水清洗培養(yǎng)基表面,8000r／min離心10 min收集芽孢,直至復(fù)紅美蘭染色觀察芽孢純度達到98%為止。然后將收集的芽孢用2 mL的4℃滅菌純水重懸,稀釋涂板計數(shù),得到芽孢濃度為5.5×109CFU／mL。 以收集純化的芽孢免疫4只新西蘭大白兔,首次家兔腹股溝免疫,間隔14d后耳靜脈免疫2次,后來采用皮下多點免疫,且免疫相隔7d,共免疫5次,以間接ELISA測定血清效價達到12800。免疫印跡實驗驗證了,所制備的血清可以與炭疽蛋白發(fā)生反應(yīng),所以制備出的血清為下一步篩選具有免疫原性的蛋白點提供了材料。 采用超聲裂解方法分別制備BAA16R菌株的營養(yǎng)體和芽孢蛋白樣品,蛋白樣品經(jīng)雙向電泳分離,電轉(zhuǎn)膜后,用上述制備的多克隆抗體進行免疫印跡。然后將雙向電泳的考馬斯亮藍染色膠圖與免疫印跡曝光圖匹配比對,找出匹配的蛋白點后,進行膠內(nèi)酶切和質(zhì)譜鑒定。結(jié)果表明,BA的營養(yǎng)體蛋白樣品中有86個具有免疫原性的蛋白點,BA的芽孢蛋白樣品中有13個具有免疫原性的蛋白點。在這些免疫原性的蛋白點中,19種蛋白質(zhì)在以前的文獻中被報導(dǎo)外,其他的蛋白質(zhì)均未見報道。本研究結(jié)果為BA新疫苗的研發(fā)提供了新線索。
[Abstract]:Anthrax is a potent zoonotic infectious disease caused by Bacillus anthracis (BA). And the mortality rate of inhaled lung anthrax is relatively high. So it has long been regarded by some countries as the preferred biological warfare agent. Since the 9 / 11 incident in the United States, the research of BA has once again become a hot spot in the world. The most effective way to prevent anthrax is vaccine. Therefore, the research of anthrax vaccine has become a hot topic, and the screening of immunogenicity proteins from BA is the key of vaccine design. Screening for possible immunogenic proteins in BA nutrients and spore proteins on a large scale will deepen our understanding and detection of Bacillus anthracis. Diagnosis of Bacillus anthracis and early treatment of anthrax. The main findings are as follows:. BA A16R strain was used as the experimental strain. The culture was carried out in a Roche flask containing 200 mL LB solid culture medium and was placed in a culture box at 37 鈩，

本文編號：1553563