本文關(guān)鍵詞： 慢性移植物抗宿主病 移植物抗白血病效應(yīng) 供者淋巴細(xì)胞輸注 混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 研究背景與目的 造血干細(xì)胞移植技術(shù)的不斷發(fā)展,為許多惡性血液病、血液系統(tǒng)遺傳性疾病、重型再生障礙性貧血及一部分實(shí)體瘤提供了治愈的機(jī)會,但其嚴(yán)重的并發(fā)癥——移植物抗宿主病(GVHD),特別是慢性移植物抗宿主病(cGVHD)是目前造血干細(xì)胞移植所面臨的一大難題,慢性GVHD的發(fā)病機(jī)制尚不明確,累及范圍和嚴(yán)重程度仍不可預(yù)示,目前尚無系統(tǒng)、有效的預(yù)防和治療方案。因此闡明慢性GVHD的發(fā)病機(jī)理,尋找降低慢性GVHD、同時(shí)保留GVL效應(yīng)、誘導(dǎo)免疫耐受的治療方法,是目前亟待解決的關(guān)鍵問題。而建立標(biāo)準(zhǔn)化的慢性GVHD動物模型,為慢性GVHD的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究建立平臺是解決這一問題的基礎(chǔ)。 T細(xì)胞活化和反應(yīng)的雙信號理論的建立和信號傳遞途徑的分子基礎(chǔ)與網(wǎng)絡(luò)學(xué)說的揭示,為建立對被識別抗原的特異性移植免疫耐受,降低慢性GVHD的發(fā)生,保留GVL效應(yīng)提供了新的靶點(diǎn)。Martin在一項(xiàng)臨床實(shí)驗(yàn)中證實(shí),去除移植物中的CD4~+T細(xì)胞及部分CD8~+T細(xì)胞,可降低GVHD的發(fā)生率,但同時(shí)白血病復(fù)發(fā)率增高,因此,單純依靠去除移植物中T細(xì)胞的方法并不能延長造血干細(xì)胞移植患者的生存期,而阻斷CD4~-T細(xì)胞活化的雙信號系統(tǒng),誘導(dǎo)移植后免疫耐受將有可能降低慢性GVHD,同時(shí)保留GVL效應(yīng)。故本研究:1.建立單倍體相合供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的小鼠慢性GVHD動物模型:2.利用所建立的模型評估阻斷CD4~+T細(xì)胞活化的雙信號系統(tǒng)對慢性GVHD的作用;3.移植后100天各組小鼠體內(nèi)接種小鼠紅白血病細(xì)胞,估阻斷CD4~+T細(xì)胞活化的雙信號系統(tǒng)對GVL效應(yīng)的影響。4.單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)5天后檢測各組小鼠的脾細(xì)胞刺激供者的T淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)、對同種異體移植物的殺傷效應(yīng)和對白血病細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。 本研究旨在探討TJU103和CTLA4-Ig阻斷CD4~+T細(xì)胞活化的雙信號系統(tǒng),對供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的慢性GVHD和GVL效應(yīng)的影響,為臨床預(yù)防和治療慢性GVHD探索新的思路。 方法: 1.建立MHC單倍體相合供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的小鼠慢性GVHD動物模型。 以近交系8—10周的雄性Balb/c~(H-2d)、C57BL/6J~(H-2b)小鼠為供者,以雌性6-8周CB6F1小鼠(Balb/c×C57BL/6J F1~(H-2d/b))為受者;輸注等體積的RPMI1640的受者小鼠為陰性對照組,A、B、C實(shí)驗(yàn)組分別輸注3×10~7、6×10~7、9×10~7個Balb/C小鼠脾細(xì)胞誘導(dǎo)MHC單倍體相合的小鼠慢性GVHD,D組輸注6×10~7個C57BL/6JJ小鼠脾細(xì)胞誘導(dǎo)MHC單倍體相合的小鼠急性GVHD;PCR法動態(tài)觀察小鼠Y基因的表達(dá),進(jìn)行嵌合體定性分析;定期觀察小鼠的臨床表現(xiàn)并評分,實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)觀察小鼠的病理變化并評分,根據(jù)病理結(jié)果,對各臨床觀察指標(biāo)進(jìn)行二分類Logistic回歸危險(xiǎn)度分析,尋找模型特征性的臨床評價(jià)指標(biāo),并概括模型的特征。 2.體內(nèi)觀察阻斷CD4~+T細(xì)胞活化的雙信號系統(tǒng)對小鼠慢性GVHD的影響。 在已建立的供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的小鼠慢性GVHD模型的基礎(chǔ)上,以輸注6×10~7個脾細(xì)胞誘導(dǎo)的慢性GVHD組為陽性對照,以基線條件相同輸注等體積的RPMI1640組為空白對照,實(shí)驗(yàn)組A、B、C分別在輸注前將供者細(xì)胞分別應(yīng)用TJU103、CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig處理,輸注后每3天分別給予TJU103、CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig腹腔注射。PCR法動態(tài)觀察小鼠Y基因的表達(dá),分析各種干預(yù)因素對嵌合體形成的影響;根據(jù)模型的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)觀察小鼠的臨床表現(xiàn)并評分,實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)觀察小鼠的病理變化并評分,評價(jià)干預(yù)因素對慢性GVHD的影響。 3.體內(nèi)觀察阻斷CD4~+T細(xì)胞活化的雙信號系統(tǒng)對GVL效應(yīng)的影響。 供者淋巴細(xì)胞輸注后100天各組隨機(jī)抽取一定數(shù)量的小鼠,腹腔注射同等數(shù)量的FBL-3細(xì)胞(小鼠紅白血病細(xì)胞株,H-2b),觀察各組小鼠的生存時(shí)間;取頻死小鼠斷頸處死行病理檢查,觀察白血病細(xì)胞浸潤情況,判定小鼠死亡的原因,評價(jià)各干預(yù)因素對移植物抗紅白血病效應(yīng)的影響。 4.用單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)方法體外動態(tài)監(jiān)測各實(shí)驗(yàn)組小鼠脾細(xì)胞刺激宿主T淋巴細(xì)胞的增殖效應(yīng)、對MHC單倍體相合移植物的殺傷效應(yīng)和對紅白血病細(xì)胞的殺傷效應(yīng)的影響。 供者淋巴細(xì)胞輸注后35天、85天各組抽取一只小鼠,斷頸處死取脾臟,制成單細(xì)胞懸液,用絲裂霉素C(MMC)處理后作為刺激細(xì)胞,以Balb/c~(H-2d)小鼠脾細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞,單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)5天,觀察其增殖效應(yīng);以各組受者的脾細(xì)胞為靶細(xì)胞,觀察單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)5天的反應(yīng)細(xì)胞對其殺傷效應(yīng),評價(jià)其對MHC單倍體相合移植物的殺傷功能;以FBL-3細(xì)胞為靶細(xì)胞,單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)5天的反應(yīng)細(xì)胞對其殺傷效應(yīng),評價(jià)其對紅白血病細(xì)胞的殺傷功能。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法: 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,以小鼠的病理損害,判定小鼠是否發(fā)病,對各臨床觀察指標(biāo)進(jìn)行二分類Logistic回歸危險(xiǎn)度分析;以Kaplan生存曲線描述各組小鼠的慢性GVHD的患病率并進(jìn)行l(wèi)og-rank檢驗(yàn);以H檢驗(yàn)比較各組小鼠GVHD的嚴(yán)重程度,Wilcoxon秩和檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較;兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行慢性GVHD的重復(fù)性檢驗(yàn);析因設(shè)計(jì)資料的方差分析比較各組35天和85天混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)的增殖率和反應(yīng)細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷率的差異;單因素方差分析比較各組小鼠負(fù)荷紅白血病后的生存時(shí)間的差異,以LSD法行組間比較;以P≤0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 1.MHC單倍體相合供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的小鼠慢性GVHD動物模型的建立。 (1)嵌合體檢測:輸注6×10~7、9×10~7個Balb/c小鼠脾細(xì)胞組在2、5、8、12周均可檢測出亮度較為均一的DNA條帶,即形成了較為穩(wěn)定的供受者混合嵌合體;輸注3×10~7個Balb/c小鼠脾細(xì)胞組在2、5周可檢測出亮度較弱的DNA條帶,但8、12周未能檢測出DNA條帶,即未能形成穩(wěn)定的供受者混合嵌合體;輸注6×10~7個C57BU6JJ小鼠脾細(xì)胞組移植組2、5、8周可檢測出較亮的DNA條帶,但在第12周檢測出和輸注6×10~7、9×10~7個Balb/c小鼠脾細(xì)胞組亮度相似的條帶,即起初形成高水平的供受者混合嵌合體,嵌合水平隨時(shí)間的推移而降低。 (2)根據(jù)慢性GVHD的病理評分標(biāo)準(zhǔn)確定各組小鼠的患病狀態(tài),對皮膚改變、體重減輕、腹瀉和弓背體態(tài)四項(xiàng)觀察指標(biāo)進(jìn)行二分類Logistic回歸危險(xiǎn)度分析顯示,模型似然比檢驗(yàn)P=0.041,回歸方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義:按P≤0.05與發(fā)病關(guān)系密切的變量是皮膚改變和體重減輕,P_s=0.000,P_w=0.037;以預(yù)測概率0.05為判別分界點(diǎn),總判對率為95.8%。因此,皮膚改變和體重減輕是本模型較為敏感的臨床觀察指標(biāo)。 (3)各組小鼠的臨床表現(xiàn):輸注不同數(shù)量Balb/c小鼠脾細(xì)胞后,各組受鼠出現(xiàn)不同程度的慢性GVHD的表現(xiàn),輸注等體積的RPMI1640的受鼠未出現(xiàn)慢性GVHD的表現(xiàn),輸注C57BL/6JJ小鼠脾細(xì)胞組最初出現(xiàn)急性GVHD的表現(xiàn),但小鼠并未死亡,后期則出現(xiàn)慢性GVHD的表現(xiàn);log-rank檢驗(yàn)A、B、C實(shí)驗(yàn)組和對照組發(fā)病率的Kaplan生存曲線差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),按校正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)P≤0.0071,B、C實(shí)驗(yàn)組和對照組之間差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),A實(shí)驗(yàn)組和對照組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.032),B、C實(shí)驗(yàn)組和A實(shí)驗(yàn)組之間差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),B、C實(shí)驗(yàn)組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.302);以H檢驗(yàn)比較A、B、C組小鼠GVHD的嚴(yán)重程度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015),按校正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)P≤0.0125,A、B實(shí)驗(yàn)組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004),A、B實(shí)驗(yàn)組和C實(shí)驗(yàn)組之間差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.015);A、B、C組小鼠皮膚改變評分和體重減輕評分的差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.199)。根據(jù)慢性GVHD的臨床評價(jià)標(biāo)準(zhǔn),輸注6×10~7、9×10~7個Balb/c小鼠脾細(xì)胞組成功的誘導(dǎo)出了慢性GVHD,輸注6×10~7組臨床表現(xiàn)最典型。 (4)各組小鼠的病理表現(xiàn):輸注后100天,斷頸處死所有小鼠,A、B、C組受鼠檢測出不同程度的慢性GVHD的病理損害,各組慢性GVHD的發(fā)生率分別為4/12、11/12、11/12,輸注等體積的RPMI1640的受者未檢測出慢性GVHD的病理損害,輸注C57BL/6JJ小鼠脾細(xì)胞組早期出現(xiàn)急性GVHD的病理損害(行嵌合體分析小鼠的病理標(biāo)本),輸注后100天則檢測出慢性GVHD的病理損害。根據(jù)慢性GVHD的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn),對肝臟、皮膚和小腸的病理表現(xiàn)評分,以H檢驗(yàn)比較A、B、C組小鼠GVHD的嚴(yán)重程度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.024),按校正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)P=0.0125,A、B實(shí)驗(yàn)組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.010),A、B實(shí)驗(yàn)組和C實(shí)驗(yàn)組之間差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.023);A、B、C組小鼠肝臟、皮膚和小腸病理改變的嚴(yán)重程度差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.070)。根據(jù)慢性GVHD的病理評價(jià)標(biāo)準(zhǔn),輸注6×10~7、9×10~7個Balb/c小鼠脾細(xì)胞組成功的誘導(dǎo)出了慢性GVHD,輸注6×10~7組病理表現(xiàn)最典型。 2.體內(nèi)觀察阻斷CD4~+T細(xì)胞活化的雙信號系統(tǒng)對小鼠慢性GVHD的影響。 (1)嵌合體檢測:輸注6×10~7個Balb/c小鼠脾細(xì)胞后,cGVHD組和TJU103、CTLA4-Ig、TJU103+CTLA4-Ig組在2、5、8、12周均可檢測出較為均一的DNA條帶,即形成了較為穩(wěn)定的供受者混合嵌合體。 (2)慢性GVHD動物模型的重復(fù)性檢驗(yàn):log-rank檢驗(yàn)建模實(shí)驗(yàn)中輸注6×10~7Balb/c小鼠脾細(xì)胞組和本章實(shí)驗(yàn)中cGVHD組Kaplan生存曲線差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.155);兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)比較兩組樣本GVHD臨床表現(xiàn)、體重減輕、皮膚改變的嚴(yán)重程度差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.143);兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)比較兩組樣本GVHD病理改變、皮膚損害、肝臟損害和腸道損害的嚴(yán)重程度差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.061)。因此輸注6×10~7Balb/c小鼠脾細(xì)胞至CB6F1小鼠所誘導(dǎo)的慢性GVHD具有較好的重復(fù)性。 (3)各組小鼠的臨床表現(xiàn):輸注不同數(shù)量Balb/c供鼠脾細(xì)胞后,各組受鼠觀察到不同程度的慢性GVHD的臨床表現(xiàn),輸注等體積的RPMI1640的受者未觀察到慢性GVHD的臨床表現(xiàn)。log-rank檢驗(yàn)Kaplan生存曲線差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),按校正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)P≤0.0045,cGVHD、TJU103組和對照組之間差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000),CTLA4-Ig、TJU103+CTLA4-Ig組和對照組之間差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.032);cGVHD組和TJU103、CTLA4-Ig、TJU103+CTLA4-Ig組之間差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);按校正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)P≤0.0071,以H檢驗(yàn)比較各組小鼠GVHD的嚴(yán)重程度、皮膚改變評分和體重減輕評分差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.218)。因此,TJU103、CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig均可改變慢性GVHD的發(fā)病率的Kaplan生存曲線,分析其生存曲線,CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig降低了慢性GVHD的發(fā)病率(慢性GVHD組的發(fā)病率為12/12,CTLA4-Ig組的發(fā)病率為4/12,TJU103+CTLA4-Ig組的發(fā)病率為2/12),TJU103延緩了慢性GVHD的發(fā)病時(shí)間(慢性GVHD組的中位發(fā)病時(shí)間為6.8周,TJU103組的中位發(fā)病時(shí)間為11周);TJU103、CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig均不能改變慢性GVHD的嚴(yán)重程度。 (4)各組小鼠的病理表現(xiàn):輸注不同數(shù)量Balb/c小鼠脾細(xì)胞后,各組受鼠檢測到不同程度的慢性GVHD的病理損害,cGVHD組和TJU103、CTLA4-Ig、TJU103+CTLA4-Ig組小鼠慢性GVHD的發(fā)生率為12/12、9/12、4/12和2/12,輸注等體積的RPMI1640的受者未出現(xiàn)慢性GVHD的病理損害。以H檢驗(yàn)比較上述各組小鼠慢性GVHD的嚴(yán)重程度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.019),但是,按校正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)P≤0.0071,上述各組組間比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.027);各組小鼠肝臟和腸道病理改變的嚴(yán)重程度差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.183);各組小鼠皮膚病理改變的嚴(yán)重程度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.010),但是,按校正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)P≤0.0071,上述各組組間比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.012)。 3.體內(nèi)觀察阻斷CD4~+T細(xì)胞活化的雙信號系統(tǒng)對GVL效應(yīng)的影響。 腹腔接種FBL-3細(xì)胞后,觀察各組小鼠的生存期,空白對照組的平均生存時(shí)間為800±1.00天,慢性GVHD組的平均生存時(shí)間為6.42±0.55天,TJU103組的平均生存時(shí)間為9.20±1.30天,CTLA4-Ig組的平均生存時(shí)間為11.00±1.26天,TJU103+CTLA4-Ig組的平均生存時(shí)間為15.40±1.52天,單因素方差分析比較各組小鼠的平均生存時(shí)間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=43.897 P=0.000),以LSD法進(jìn)行組間比較,TJU103組和對照組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.119),其余各組組間差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.042)。取頻死小鼠行病理學(xué)檢查,肝臟表面可見明顯的腫塊結(jié)節(jié),部分小鼠肺組織塌陷:鏡下HE染色可見肝、脾、肺組織及骨髓白血病細(xì)胞彌漫性浸潤,主要為幼稚細(xì)胞,正常組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞。 4.單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)體外監(jiān)測各組小鼠T淋巴細(xì)胞的增殖效應(yīng)、對MHC單倍體相合移植物的殺傷效應(yīng)和對紅白血病細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。 析因設(shè)計(jì)資料方差分析35天和85天各組小鼠脾細(xì)胞刺激宿主T淋巴細(xì)胞的增殖效應(yīng),不同組別間、不同時(shí)間點(diǎn)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F_(group)=402.297P_(group)=0.000,F_(time)=22.355 P_(time)=0.000),組別和時(shí)間點(diǎn)之間的交互效應(yīng)顯著(F_(interaction)=17.432 P_(interaction)=0.000)。數(shù)據(jù)滿足方差齊性要求,LSD法檢測各組增值率的組間差異,在第35天,TJU103組和CTLA4-Ig組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.064),其余各組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);在第85天,TJU103組和cGVHD組、CTLA4-Ig組和TJU103+CTLA4-Ig組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.425),其余各組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析各組35天、85天增值率,對照組、cGVHD組和CTLA4-Ig組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≥0.155),TJU103組和TJU103+CTLA4-Ig組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.001)。析因設(shè)計(jì)資料方差分析35天和85天各組小鼠脾細(xì)胞刺激宿主T淋巴細(xì)胞的對MHC單倍體相合移植物的殺傷效應(yīng)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F_(35)=107.260P_(35)=0.000,F_(85)=85.821 P_(85)=0.000);數(shù)據(jù)滿足方差齊性,LSD法檢測各組殺傷率的組間差異,在第35天,TJU103組和CTLA4-Ig組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.909),其余各組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.005);在第85天,TJU103組和cGVHD組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.614),其余各組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。以上結(jié)果發(fā)現(xiàn):TJU103早期抑制T淋巴細(xì)胞增殖的效應(yīng)同CTLA4-Ig相當(dāng)(0.3610±0.0213 vs 0.3296±0.0335),抑制供者T淋巴細(xì)胞對MHC單倍體相合移植物的殺傷效應(yīng)同CTLA4-Ig相當(dāng),而后期抑制T淋巴細(xì)胞增殖的效應(yīng)減弱,其淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)同慢性GVHD組相當(dāng)(0.4988±0.0202 vs0.5076±0.0307).對MHC單倍體相合移植物的殺傷效應(yīng)增強(qiáng),同慢性GVHD組水平相當(dāng),即TJU103體內(nèi)抑制T淋巴細(xì)胞增殖及抑制供者T淋巴細(xì)胞對宿主的殺傷效應(yīng)均經(jīng)歷了由強(qiáng)到弱的過程;而在T+C聯(lián)合組,T淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)也經(jīng)歷了類似的由強(qiáng)到弱的過程(0.2188±0.0138 vs 0.30304±0.0312)。析因設(shè)計(jì)資料方差分析35天和85天各組小鼠脾細(xì)胞刺激T淋巴細(xì)胞的對小鼠紅白血病細(xì)胞的殺傷效應(yīng)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F_(35)=0.254 P_(35)=0.904,F_(85)=0.026 P_(85)=0.999);不同效靶比之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F_(35)=58.757 P_(35)=0.000,F_(85)=29.188P_(85)=0.000);分組和效靶比之間交互效應(yīng)不顯著(F_(35)=0.393 P_(85)=0.969,F_(85)=0.097P_(35)=1.000),因此,各組小鼠脾細(xì)胞刺激T淋巴細(xì)胞的對小鼠紅白血病細(xì)胞的殺傷效應(yīng)無明顯差異。 結(jié)論: 1.輸注6×10~7和9×10~7個Balb/c供鼠脾細(xì)胞的受鼠鼠成功建立了MHC單倍體相合供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的慢性移植物抗宿主病;毛發(fā)改變和體重減輕是敏感的臨床評價(jià)指標(biāo),肝臟、皮膚和腸道是敏感的病理評價(jià)指標(biāo);模型組具有較好的可重復(fù)性。 2.應(yīng)用TJU103阻斷CD4~-T細(xì)胞活化的第一信號可推遲慢性GVHD的發(fā)病時(shí)間,應(yīng)用CTLA4-Ig阻斷CD4~-T細(xì)胞活化的共刺激信號可降低慢性GVHD的發(fā)生率,聯(lián)合應(yīng)用TJU103和CTLA4-Ig可降低慢性GVHD的發(fā)生率的作用更加明顯。 3.移植后100天腹腔接種小鼠紅白血病細(xì)胞后,慢性GVHD縮短了小鼠的生存時(shí)間;TJU103干預(yù)組和空白對照對照組的生存時(shí)間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,CTLA4-Ig組和TJU103+CTLA4-Ig組明顯的延長了荷紅白血病小鼠的生存時(shí)間,以后者效應(yīng)最強(qiáng)。 4.TJU103、CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig均可抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和對MHC單倍體相合同種異體移植物的殺傷效應(yīng),其中TJU103的抑制效應(yīng)經(jīng)歷了從強(qiáng)到弱的轉(zhuǎn)變;TJU103、CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig對紅白血病細(xì)胞殺傷效應(yīng)無明顯影響。 本研究的創(chuàng)新點(diǎn):建立了MHC單倍體相合供者淋巴細(xì)胞輸注誘導(dǎo)的慢性GVHD動物模型;在上述模型的基礎(chǔ)上證實(shí)了TJU103可推遲慢性GVHD的發(fā)病時(shí)間,CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig可減少慢性GVHD的發(fā)生率,CTLA4-Ig和TJU103+CTLA4-Ig可延長荷白血病小鼠的生存時(shí)間,首次發(fā)現(xiàn)慢性GVHD縮短了荷紅白血病小鼠的生存時(shí)間,并初步證實(shí)TJU103推遲慢性GVHD的發(fā)病時(shí)間與其細(xì)胞動力學(xué)變化有關(guān)。 研究價(jià)值:本研究為臨床建立慢性GVHD的預(yù)防和治療方案進(jìn)行了臨床前研究,為認(rèn)識T細(xì)胞活化在慢性GVHD發(fā)生中的作用進(jìn)行了初步探討,為臨床建立和優(yōu)化慢性GVHD的預(yù)防和治療方案提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1552328